Мы исследуем, возможно ли восстановить микробиоту конкретного материнского молока, сохраняющую питательную структуру в пастеризованном молоке, с помощью методологии, которая может быть внедрена в больницах. Наша цель — разработать новую суперстратегию питания для новорожденных и оценить ее видимость. Мы считаем, что самой большой проблемой при экспериментальном восстановлении микробиоты грудного молока является достижение реконструкции, которая будет еще ближе к исходному профилю, присутствующему в материнском молоке, и сделать это быстро.
Это не только усилит ее эффект, но и еще больше повысит безопасность процедуры. Мы стремимся определить, обеспечивает ли эта новая стратегия питания значительные клинические преимущества для новорожденных. Мы считаем, что если практическая польза подтвердится, то стратегия может быть легко реализована во всех регионах, где банки грудного молока окажут положительное влияние на общее состояние здоровья взрослого населения.
После получения необходимого согласия попросите мать сцедить молоко с помощью электрического молокоотсоса в стерилизованный контейнер под наблюдением медсестры. После сбора пометьте контейнер с молоком, указав информацию о матери, дату и время сбора. Храните собственное молоко матери или МОМ при температуре минус четыре градуса Цельсия или ниже в течение 12 часов.
Разморозьте сырое молоко или пастеризованное донорское молоко или ДПМ, хранящиеся в стерилизованных стеклянных контейнерах с пластиковыми крышками на водяной бане 40 градусов Цельсия. Снимите бутылку с грудным молоком с водяной бани до того, как температура молока превысит пять градусов по Цельсию. Затем наденьте лабораторный халат, маску, шапочку и перчатки.
Очистите рабочую поверхность раствором для очистки поверхностей, следуя местному институциональному протоколу. Перенесите аликвоту до одного миллилитра MOM в криопробирку для последующего секвенирования 16S и подсчета бактерий. Храните криопробирку при температуре минус 80 градусов по Цельсию.
С помощью стерильной пипетки перенесите оставшийся объем MOM, эквивалентный 10% от конечного желаемого объема, в контейнер, безопасный для пищевых продуктов. Погрузите емкость на водяную баню при температуре 37 градусов Цельсия. Затем переложите одну миллилилитровую аликвоту PDM в криопробирку, свободную от ДНКазы/РНКазы для секвенирования 16S и подсчета бактерий.
Храните криопробирку при температуре минус 80 градусов по Цельсию. С помощью стерильной пипетки перенесите количество PDM, эквивалентное 90% от конечного желаемого объема, в контейнер, содержащий MOM, формируя инокулированное материнское молоко. Закройте емкость крышкой, чтобы предотвратить загрязнение, и погрузите ее в водяную баню с температурой 37 градусов Цельсия на четыре часа, чтобы микроорганизмы могли размножаться в молоке.
Через четыре часа снимите емкость с ферментированным инокулированным материнским молоком с водяной бани. Перелейте одну миллилитровую аликвоту восстановленного молока в криопробирку, свободную от ДНКазы/РНКазы, для секвенирования 16S и подсчета бактерий. Храните криопробирку при температуре минус 80 градусов по Цельсию.
Оставшийся объем восстановленного молока переложите в продезинфицированный контейнер для кормления новорожденных.
