Ricostituzione individualizzata del microbiota del latte umano: un approccio fattibile in contesti del mondo reale

Stiamo studiando se è possibile recuperare il microbiota di uno specifico latte materno preservando la struttura nutrizionale nel latte pastorizzato attraverso una metodologia che può essere implementata negli ospedali. Il nostro obiettivo è sviluppare una nuova super strategia nutrizionale per i neonati e valutarne la visibilità. Riteniamo che la sfida più grande nella ricostituzione sperimentale del microbiota del latte umano sia quella di ottenere una ricostruzione che sia ancora più vicina al profilo originale presente nel latte materno, e farlo rapidamente.

Ciò non solo migliorerà i suoi effetti, ma aumenterà anche ulteriormente la sicurezza della procedura. Il nostro obiettivo è determinare se questa nuova super strategia nutrizionale offre benefici clinici significativi per i neonati. Riteniamo che, se i benefici pratici saranno confermati, la strategia potrebbe essere facilmente implementata in tutte le regioni con banche del latte umano che porteranno ad un impatto positivo sulla salute generale dei non adulti.

Dopo aver ottenuto il consenso richiesto, far estrarre alla madre il latte utilizzando un tiralatte elettrico in un contenitore sterilizzato sotto la supervisione dell'infermiera. Dopo la raccolta, etichettare il contenitore contenente il latte con le informazioni della madre, la data e l'ora della raccolta. Conserva il latte materno o il MOM a meno quattro gradi Celsius o meno per un massimo di 12 ore.

Scongelare il latte crudo o il latte donato pastorizzato o PDM, conservato in contenitori di vetro sterilizzati con coperchi di plastica in un bagno d'acqua a 40 gradi Celsius. Rimuovere la bottiglia di latte umano dal bagnomaria prima che la temperatura del latte superi i cinque gradi Celsius. Quindi, indossa un camice da laboratorio, una maschera, un berretto e guanti.

Pulire il piano di lavoro con una soluzione detergente per superfici, seguendo il protocollo istituzionale locale. Trasferire l'aliquota fino a un millilitro di MOM in una crioprovetta per il successivo sequenziamento 16S e la conta batterica. Conservare il criotubo a meno 80 gradi Celsius.

Utilizzando una pipetta sterile, trasferire il volume rimanente di MOM, equivalente al 10% del volume finale desiderato, in un contenitore per alimenti. Immergere il contenitore a bagnomaria a 37 gradi Celsius. Successivamente, trasferire l'aliquota di un millilitro di PDM in una crioprovetta priva di DNasi/RNasi per il sequenziamento 16S e la conta batterica.

Conservare il criotubo a meno 80 gradi Celsius. Utilizzando una pipetta sterile, trasferire una quantità di PDM equivalente al 90% del volume finale desiderato nel contenitore contenente il MOM, formando il latte materno inoculato. Sigillare il contenitore con un coperchio per evitare contaminazioni e immergerlo in un bagnomaria a 37 gradi Celsius per quattro ore per consentire ai microrganismi di moltiplicarsi nel latte.

Trascorse quattro ore, togliere dal bagnomaria il contenitore con il latte materno inoculato fermentato. Trasferire l'aliquota di un millilitro di latte ricostituito in una crioprovetta priva di DNasi/RNasi per il sequenziamento 16S e la conta batterica. Conservare il criotubo a meno 80 gradi Celsius.

Trasferire il volume rimanente di latte ricostituito in un contenitore igienizzato per l'alimentazione dei neonati.