Wir untersuchen, ob es möglich ist, die Mikrobiota einer bestimmten Muttermilch wiederherzustellen und dabei die Nährstoffstruktur in pasteurisierter Milch durch eine Methode zu erhalten, die in Krankenhäusern implementiert werden kann. Unser Ziel ist es, eine neue Ernährungsstrategie für Neugeborene zu entwickeln und ihre Sichtbarkeit zu bewerten. Wir glauben, dass die größte Herausforderung bei der experimentellen Rekonstitution der Mikrobiota der Muttermilch darin besteht, eine Rekonstruktion zu erreichen, die dem ursprünglichen Profil der Muttermilch noch näher kommt, und zwar schnell.
Dies wird nicht nur die Wirkung verstärken, sondern auch die Sicherheit des Verfahrens weiter erhöhen. Unser Ziel ist es, herauszufinden, ob diese neue Ernährungsstrategie signifikante klinische Vorteile für Neugeborene bietet. Der Hof ist der Ansicht, dass die Strategie, wenn sich der praktische Nutzen bestätigt, in allen Regionen mit Muttermilchbanken leicht umgesetzt werden könnte, was sich positiv auf die allgemeine Gesundheit von Nicht-Erwachsenen auswirken würde.
Lassen Sie die Mutter nach Einholung der erforderlichen Zustimmung unter Aufsicht der Krankenschwester Milch mit einer elektrischen Milchpumpe in einen sterilisierten Behälter abpumpen. Beschriften Sie nach der Entnahme den Behälter mit der Milch mit den Informationen der Mutter, dem Datum und der Uhrzeit der Entnahme. Lagern Sie die Muttermilch oder die Muttermilch bis zu 12 Stunden bei minus vier Grad Celsius oder weniger.
Tauen Sie Rohmilch oder pasteurisierte Spendermilch oder PDM auf, die in sterilisierten Glasbehältern mit Kunststoffdeckel in einem 40 Grad Celsius warmen Wasserbad gelagert wird. Nehmen Sie die Muttermilchflasche aus dem Wasserbad, bevor die Milchtemperatur fünf Grad Celsius überschreitet. Tragen Sie als Nächstes einen Laborkittel, eine Maske, eine Mütze und Handschuhe.
Reinigen Sie die Arbeitsfläche mit einer Oberflächenreinigungslösung gemäß dem lokalen institutionellen Protokoll. Übertragen Sie das Aliquot von bis zu einem Milliliter des MOM in ein Kryoröhrchen für die anschließende 16S-Sequenzierung und Bakterienzählung. Lagern Sie das Kryoröhrchen bei minus 80 Grad Celsius.
Übertragen Sie mit einer sterilen Pipette das verbleibende Volumen der MOM, das 10 % des gewünschten Endvolumens entspricht, in einen lebensmittelechten Behälter. Tauchen Sie den Behälter in ein Wasserbad bei 37 Grad Celsius. Übertragen Sie als Nächstes das Aliquot des PDM von einem Milliliter in ein DNase/RNase-freies Kryoröhrchen für die 16S-Sequenzierung und Bakterienzählung.
Lagern Sie das Kryoröhrchen bei minus 80 Grad Celsius. Mit einer sterilen Pipette wird eine PDM-Menge, die 90 % des gewünschten Endvolumens entspricht, in den Behälter mit dem MOM überführt, wodurch die inokulierte Muttermilch gebildet wird. Verschließen Sie den Behälter mit einem Deckel, um eine Kontamination zu vermeiden, und tauchen Sie ihn vier Stunden lang in ein 37 Grad heißes Wasserbad, damit sich Mikroorganismen in der Milch vermehren können.
Nach vier Stunden nehmen Sie das Gefäß mit der fermentierten inokulierten Muttermilch aus dem Wasserbad. Übertragen Sie das Aliquot von einem Milliliter der rekonstituierten Milch in ein DNase/RNase-freies Kryoröhrchen für die 16S-Sequenzierung und Bakterienzählung. Lagern Sie das Kryoröhrchen bei minus 80 Grad Celsius.
Übertragen Sie das verbleibende Volumen der rekonstituierten Milch in einen desinfizierten Behälter zum Füttern von Neugeborenen.
