Partielle Hepatektomie bei erwachsenen Zebrafischen

Zusammenfassung

Dieses Protokoll beschreibt das Verfahren zur Entfernung des Bauchlappens der Leber bei erwachsenen Zebrafischen, um die Untersuchung der Leberregeneration zu ermöglichen.

Zusammenfassung

Leberversagen ist eine der weltweit führenden Todesursachen, und die Sterblichkeit durch chronische Lebererkrankungen steigt in den Vereinigten Staaten stark an. Gesunde Lebern sind in der Lage, sich von toxischen Schäden zu regenerieren, aber bei fortgeschrittenen Lebererkrankungen ist die natürliche Regenerationsfähigkeit der Leber beeinträchtigt. Zebrafische haben sich als leistungsfähiges experimentelles System zur Untersuchung der Regeneration herausgestellt. Sie sind ein ideales Modell für die Untersuchung der Leberregeneration aus der partiellen Hepatektomie, einem Verfahren mit direkter klinischer Relevanz, bei dem ein Teil der Leber operativ entfernt wird, wobei der Rest intakt bleibt. Es gibt kein Standardprotokoll für die partielle Hepatektomie; Frühere Studien, die dieses Modell verwendeten, verwendeten leicht unterschiedliche Protokolle und berichteten über unterschiedliche Ergebnisse. Hier wird ein effizientes, reproduzierbares Protokoll zur Durchführung einer partiellen Hepatektomie bei erwachsenen Zebrafischen beschrieben. Mit dieser Technik zeigen wir, dass Zebrafische in der Lage sind, den resezierten Lappen epimorph zu regenerieren. Dieses Protokoll kann verwendet werden, um die Mechanismen, die für die Leberregeneration bei Zebrafischen erforderlich sind, weiter zu untersuchen.

Einleitung

Unter den festen Organen beim Menschen ist die Leber das einzige Regenerationsorgan¹. Dies ist von entscheidender Bedeutung, da die Leber ein essentielles Organ ist, das für wichtige Stoffwechselfunktionen, Energiespeicherung, Blutentgiftung, Sekretion von Plasmaproteinen und Gallenproduktion verantwortlich ist². Hepatozyten, die durch toxische oder entzündliche Schäden verloren gehen, werden in erster Linie durch Teilung der verbleibenden Hepatozyten ersetzt¹. Ein klassisches experimentelles Modell zur Untersuchung der Leberregeneration ist die partielle Hepatektomie, bei der einzelne Leberlappen....

Protokoll

Zebrafische wurden nach Standardverfahren gezüchtet und gezüchtet. Die Experimente wurden vom Institutional Animal Care and Use Committee des Brigham and Women's Hospital genehmigt (2016N000405). Erwachsene Zebrafische wurden vor Beginn des Protokolls 24 Stunden lang gefastet. Systemwasser bezieht sich auf das Wasser in Zebrafisch-Haltungsbecken in der Wasseranlage.

1. Vorbereitung und Betäubung

1. Bereiten Sie 0,016% ige Tricainlösung in Systemwasser vor.
   VORSICHT: Tricain ist ein Reizstoff, wenn es mit den Augen, der Haut oder den Atemwegen in Kontakt kommt.
2. Bereiten Sie einen Schwamm vor, um betäubte Zebrafische währe....

Ergebnisse

Um das regenerative Potenzial der erwachsenen Zebrafischleber zu untersuchen, haben wir eine partielle Hepatektomie (PHX) bei erwachsenen Zebrafischen durchgeführt. Im Allgemeinen wurden große Erwachsene (30-40 mm Länge) ausgewählt, die zwischen 1,5 und 2,5 Jahre alt waren. In einzelnen Experimenten wurden Tiere aus demselben Tank ausgewählt und auf Alter und Größe abgestimmt. Als angemessene Kontrolle verwendeten wir Scheinoperationen, bei denen das Tier sowohl betäubt wurde als auch einen großen Schnitt in der.......

Diskussion

Die anatomischen Unterschiede zwischen Zebrafisch- und Säugetiermodellen für die Leberregeneration stellen einzigartige Herausforderungen für die Leberresektion dar. Die Leber beim Zebrafisch befindet sich in unmittelbarer Nähe zum Herzen und zum Darm; Die versehentliche Schädigung beider Organe führt zu einer erhöhten Mortalität. Die Zebrafischleber ist nicht eingekapselt, was es schwieriger macht, sich vom Darm zu trennen. Die Leber erhält nährstoffreiches Blut aus dem Darm durch Pfortadern. Bei Säugetieren .......

Materialien

Name	Company	Catalog Number	Comments
16% Paraformaldehyde Aqueous Solution, EM Grade	Electron Microscopy Sciences	15700
50 mL Falcon Centrifuge Tubes, Polypropylene, Sterile	Corning	352098
AS 82/220.R2 PLUS Analytical Balance	Bay State Scale & Systems, INC.	WL-104-1051
Dumont #55 Forceps	Fine Science Tools	11295-51
EMS Kuehne Coverglass/Specimen Forceps	Electron Microscopy Sciences	72997-07
Epifluorescence microscope	Zeiss	Discovery.V8
Mastertop Cellulose Cleaning Scrub Sponge	Amazon	B07CBSM53Z
PBS10X Liquid Conc 4L	EMD Millipore	6505-4L
Super Fine Micro Scissors, 3 1/4" straight	Biomedical Research Instruments	11-1020
Tricaine methanesulfonate	Syndel	TRIC-M-GR-0010
Tween 20, Fisher BioReagents	Fischer Scientific	BP337-500