Etablierung eines Embryoimplantationsmodells in vitro

Zusammenfassung

Dieses Protokoll beschreibt Methoden zur Erstellung eines einfachen und effizienten In-vitro-Modells für die Embryoimplantation zur Bewertung der relevanten Moleküle, die den Einnistungsprozess des Embryos beeinflussen.

Zusammenfassung

Die Einnistung des Embryos ist der erste Schritt auf dem Weg zu einer erfolgreichen Schwangerschaft. Ein In-vitro-Modell für die Embryoimplantation ist entscheidend für die biologische Grundlagenforschung, die Arzneimittelentwicklung und das Screening. In dieser Arbeit wird ein einfaches, schnelles und hocheffizientes in vitro Modell für die Embryonenimplantation vorgestellt. In diesem Protokoll stellen wir zunächst die Blastozystenakquisition von Mäusen und die Vorbereitung der humanen Endometrium-Adenokarzinomzellen (Ishikawa) für die Implantation vor, gefolgt von der Co-Kultur-Methode für Mausembryonen und Ishikawa-Zellen. Schließlich führten wir eine Studie durch, um den Einfluss unterschiedlicher Konzentrationen von 17-β-Östradiol (E₂) und Progesteron (P4) auf die Adhäsionsraten der Embryonen auf der Grundlage dieses Modells zu bewerten. Unsere Ergebnisse zeigten, dass hohe Konzentrationen von E₂ die Adhäsion des Embryos signifikant reduzierten, während die Zugabe von Progesteron die Adhäsionsrate wiederherstellen konnte. Dieses Modell bietet eine einfache und schnelle Plattform für die Bewertung und das Screening von Molekülen, die am Adhäsionsprozess beteiligt sind, wie z. B. Zytokine, Medikamente und Transkriptionsfaktoren, die die Implantation und die Empfänglichkeit des Endometriums steuern.

Einleitung

Die Einnistung des Embryos, der erste Schritt einer erfolgreichen Schwangerschaft, ist entscheidend für das Verständnis der biologischen Grundlagen und die Bewältigung der Herausforderungen der Unfruchtbarkeit. Ethische Zwänge stellen jedoch erhebliche Einschränkungen bei der Entnahme von klinischen Embryonenproben am Menschen dar und behindern die Erforschung der komplizierten Wechselwirkungen zwischen menschlichen Embryonen und dem Endometrium während der frühen Schwangerschaft¹. Ein tiefgreifendes Verständnis dieser komplexen Mechanismen ist unerlässlich, um die biologische Grundlagenforschung, die Arzneimittelforschung und die reproduktive ....

Protokoll

Der Umgang mit Mäusen und experimentelle Studien wurden im Rahmen von Protokollen durchgeführt, die vom Tierausschuss des Shanghai Institute for Biomedical and Pharmaceutical Technologies genehmigt wurden. Sicherheitsverfahren gewährleisten: Tragen Sie beim Umgang mit Chemikalien oder biologischen Materialien immer geeignete persönliche Schutzausrüstung (PSA).

1. Gewinnung von Mausembryonen

HINWEIS: In diesem Abschnitt wird der Prozess der Gewinnung von Mausembryonen beschrieben. Erwachsene weibliche Mäuse (6-8 Wochen alt, Hybride C57BL/6 und DBA/2) wurden unter Standardumgebungsbedingungen von 12 ....

Diskussion

Die Einfachheit und Schnelligkeit des vorgeschlagenen In-vitro-Modells für die Embryonenimplantation bietet bemerkenswerte Vorteile für das Wirkstoffscreening in der Frühphase und andere Forschungsanwendungen. Das unkomplizierte Protokoll, gepaart mit dem hohen Durchsatz der Ishikawa-Zelllinien, macht es zu einem idealen Kandidaten für groß angelegte Screenings, insbesondere in den frühen Stadien der Wirkstoffforschung. Liang¹³ fand heraus, dass der TAGLN2-Knockdown die Invasionsfä.......

Materialien

Name	Company	Catalog Number	Comments
17-β-estradiol	SIGMA	3301	Most potent mammalian estrogenic hormone
BD Falcon	BD	353001	Bacteriological Petri Dishes 35 x 10 mm style w/tight lid, crystal-grade virgin polystyrene, sterile
Biosafety Cabinet	ESCO	class BSC	Aseptic operations, making culture dishes, aliquoting reagents, etc
CO2 Incubator	Thermo	8000DH	Embryo culture
Culture plate	Corning	3506	Cell culture
DMEM/F12	Gibco	1133032	DMEM/F12 (1x), liquid 1:1,Contains L-glutamine and 15 mM HEPES buffer
Fetal Bovine Serum	Gibco	10099141	Fetal Bovine Serum, Qualified, Australia Origin
Gelatin	SIGMA	G9391	Type B, powder, BioReagent, suitable for cell culture
HCG	Nanjing Aibei	M2520	Sterilization reagent, intraperitoneal injection, 50 IU/mL
Hyaluronidase	SIGMA	V900833	Reagent grade, powder
KSOM	Merck	MR-020P-D	(1x), Powder, w/o Phenol Red, 5 x 10 mL
L-glutamine	Gibco	25030081	L-glutamine-200 mM (100x), liquid
M2	Merck	MR-015-D	EmbryoMax M2 Medium (1x), Liquid, with Phenol Red
Mineral oil	SIGMA	M8410	Mineral oil is suitable for use as a cover layer to control evaporation and cross-contamination in various molecular biology applications
Penicillin-Streptomycin, liquid	Gibco	15140122	10,000 Units penicillin (base) and 10,000 units streptomycin (base), utilizing penicillin G (sodium salt) and streptomycin sulfate in 0.85% saline
PMSG	Nanjing Aibei	M2620	Sterilization reagent ,intraperitoneal injection, 50 IU/mL
Progesterone	SIGMA	5341	Steroid hormone secreted by the corpus luteum during the latter half of the menstrual cycle
Sodium pyruvate	Gibco	11360070	Sodium pyruvate is commonly added to cell culture media as a carbon source in addition to glucose
Stereomicroscope	Olympus	SZX7	Embryo retrieval and observation of embryo development