Создание модели имплантации эмбриона in vitro

Резюме

В этом протоколе описываются методологии создания простой и эффективной модели имплантации эмбриона in vitro для оценки соответствующих молекул, влияющих на процесс имплантации эмбриона.

Аннотация

Имплантация эмбриона – это первый шаг в установлении успешной беременности. Модель in vitro для имплантации эмбриона имеет решающее значение для фундаментальных биологических исследований, разработки лекарств и скрининга. В этой статье представлена простая, быстрая и высокоэффективная модель имплантации эмбриона in vitro . В этом протоколе мы сначала вводим получение бластоцисты мыши и подготовку клеток аденокарциномы эндометрия человека (Исикава) к имплантации, а затем метод совместного культивирования эмбрионов мышей и клеток Исикавы. Наконец, мы провели исследование для оценки влияния различных концентраций 17-β-эстрадиола (_Е2) и прогестерона (Р4) на скорость адгезии эмбрионов на основе этой модели. Наши результаты показали, что высокие концентрации_Е2 значительно снижают адгезию эмбрионов, в то время как добавление прогестерона может восстановить скорость адгезии. Эта модель предлагает простую и быструю платформу для оценки и скрининга молекул, участвующих в процессе адгезии, таких как цитокины, лекарства и факторы транскрипции, контролирующие имплантацию и рецептивность эндометрия.

Введение

Имплантация эмбриона, первый этап успешной беременности, имеет решающее значение для понимания его биологической основы и решения проблем бесплодия. Тем не менее, этические ограничения создают значительные ограничения при сборе образцов клинических эмбрионов человека, препятствуя исследованию сложных взаимодействий между человеческими эмбрионами и эндометрием на ранних сроках беременности¹. Глубокое понимание этих сложных механизмов жизненно важно для продвижения фундаментальных биологических исследований, разработки лекарств и репродуктивного здоровья.

В предыдущих моделях in vitro использовались модели адгезии, в к....

протокол

Работа с мышами и экспериментальные исследования проводились в соответствии с протоколами, утвержденными Комитетом по животным Шанхайского института биомедицинских и фармацевтических технологий. Обеспечьте процедуры безопасности: Всегда надевайте соответствующие средства индивидуальной защиты (СИЗ) при работе с химическими или биологическими материалами.

1. Приобретение эмбрионов мышей

ПРИМЕЧАНИЕ: В этом разделе описан процесс получения эмбрионов мыши. Взрослых самок мышей (в возрасте 6-8 недель, гибрид C57BL/6 и DBA/2) содержали в стандартных условиях окружающей среды 12 часов в светлом свете и 12....

Результаты

В процессе вспомогательных репродуктивных техник контролируемая гиперстимуляция яичников (ГН) является важнейшим этапом, приводящим к значительному повышению уровня эстрогенов у пациенток более чем в 10-20 раз по сравнению с естественными циклами¹¹. Учитывая этот контекст,.......

Обсуждение

Простота и быстрота предлагаемой модели in vitro для имплантации эмбрионов дают замечательные преимущества для скрининга лекарств на ранних стадиях и других исследовательских приложений. Простой протокол в сочетании с высокой пропускной способностью клеточных линий Исикавы делае?.......

Материалы

Name	Company	Catalog Number	Comments
17-β-estradiol	SIGMA	3301	Most potent mammalian estrogenic hormone
BD Falcon	BD	353001	Bacteriological Petri Dishes 35 x 10 mm style w/tight lid, crystal-grade virgin polystyrene, sterile
Biosafety Cabinet	ESCO	class BSC	Aseptic operations, making culture dishes, aliquoting reagents, etc
CO2 Incubator	Thermo	8000DH	Embryo culture
Culture plate	Corning	3506	Cell culture
DMEM/F12	Gibco	1133032	DMEM/F12 (1x), liquid 1:1,Contains L-glutamine and 15 mM HEPES buffer
Fetal Bovine Serum	Gibco	10099141	Fetal Bovine Serum, Qualified, Australia Origin
Gelatin	SIGMA	G9391	Type B, powder, BioReagent, suitable for cell culture
HCG	Nanjing Aibei	M2520	Sterilization reagent, intraperitoneal injection, 50 IU/mL
Hyaluronidase	SIGMA	V900833	Reagent grade, powder
KSOM	Merck	MR-020P-D	(1x), Powder, w/o Phenol Red, 5 x 10 mL
L-glutamine	Gibco	25030081	L-glutamine-200 mM (100x), liquid
M2	Merck	MR-015-D	EmbryoMax M2 Medium (1x), Liquid, with Phenol Red
Mineral oil	SIGMA	M8410	Mineral oil is suitable for use as a cover layer to control evaporation and cross-contamination in various molecular biology applications
Penicillin-Streptomycin, liquid	Gibco	15140122	10,000 Units penicillin (base) and 10,000 units streptomycin (base), utilizing penicillin G (sodium salt) and streptomycin sulfate in 0.85% saline
PMSG	Nanjing Aibei	M2620	Sterilization reagent ,intraperitoneal injection, 50 IU/mL
Progesterone	SIGMA	5341	Steroid hormone secreted by the corpus luteum during the latter half of the menstrual cycle
Sodium pyruvate	Gibco	11360070	Sodium pyruvate is commonly added to cell culture media as a carbon source in addition to glucose
Stereomicroscope	Olympus	SZX7	Embryo retrieval and observation of embryo development