Etablissement d’un modèle d’implantation embryonnaire in vitro

Résumé

Ce protocole décrit des méthodologies permettant d’établir un modèle in vitro simple et efficace d’implantation embryonnaire pour évaluer les molécules pertinentes affectant le processus d’implantation embryonnaire.

Résumé

L’implantation embryonnaire est la première étape dans l’établissement d’une grossesse réussie. Un modèle in vitro d’implantation d’embryons est essentiel pour la recherche biologique fondamentale, le développement de médicaments et le dépistage. Cet article présente un modèle in vitro simple, rapide et très efficace pour l’implantation d’embryons. Dans ce protocole, nous introduisons d’abord l’acquisition de blastocystes de souris et la préparation de cellules d’adénocarcinome de l’endomètre humain (Ishikawa) pour l’implantation, puis la méthode de co-culture pour les embryons de souris et les cellules d’Ishikawa. Enfin, nous avons mené une étude pour évaluer l’impact de concentrations variables de 17-β-œstradiol (E₂) et de progestérone (P4) sur les taux d’adhésion embryonnaire sur la base de ce modèle. Nos résultats ont révélé que des concentrations élevées de E₂ réduisaient significativement l’adhésion embryonnaire, tandis que l’ajout de progestérone pouvait restaurer le taux d’adhésion. Ce modèle offre une plate-forme simple et rapide pour évaluer et cribler les molécules impliquées dans le processus d’adhésion, telles que les cytokines, les médicaments et les facteurs de transcription contrôlant l’implantation et la réceptivité de l’endomètre.

Introduction

L’implantation de l’embryon, première étape d’une grossesse réussie, est cruciale pour comprendre sa base biologique et relever les défis de l’infertilité. Cependant, les contraintes éthiques posent des limites importantes à la collecte d’échantillons cliniques d’embryons humains, ce qui entrave la recherche sur les interactions complexes entre les embryons humains et l’endomètre au début de la grossesse¹. Une compréhension approfondie de ces mécanismes complexes est essentielle pour faire progresser la recherche biologique fondamentale, la découverte de médicaments et la santé reproductive.

Des modèles in vitro anté....

Protocole

La manipulation des souris et les études expérimentales ont été réalisées selon des protocoles approuvés par le Comité des animaux de l’Institut de Shanghai pour les technologies biomédicales et pharmaceutiques. Assurez les procédures de sécurité : Portez toujours un équipement de protection individuelle (EPI) approprié lorsque vous manipulez des produits chimiques ou des matières biologiques.

1. Acquisition d’embryons de souris

REMARQUE : Cette section décrit le processus d’obtention d’embryons de souris. Des souris femelles adultes (âgées de 6 à 8 semaines, hybrides C57BL/6 et DBA/2) ont été main....

Discussion

La simplicité et la rapidité du modèle in vitro proposé pour l’implantation d’embryons offrent des avantages remarquables pour le dépistage précoce de médicaments et d’autres applications de recherche. La simplicité du protocole, associée à la nature à haut débit des lignées cellulaires d’Ishikawa, en fait un candidat idéal pour les criblages à grande échelle, en particulier dans les premières étapes de la découverte de médicaments. Liang¹³ a découvert que l?.......

matériels

Name	Company	Catalog Number	Comments
17-β-estradiol	SIGMA	3301	Most potent mammalian estrogenic hormone
BD Falcon	BD	353001	Bacteriological Petri Dishes 35 x 10 mm style w/tight lid, crystal-grade virgin polystyrene, sterile
Biosafety Cabinet	ESCO	class BSC	Aseptic operations, making culture dishes, aliquoting reagents, etc
CO2 Incubator	Thermo	8000DH	Embryo culture
Culture plate	Corning	3506	Cell culture
DMEM/F12	Gibco	1133032	DMEM/F12 (1x), liquid 1:1,Contains L-glutamine and 15 mM HEPES buffer
Fetal Bovine Serum	Gibco	10099141	Fetal Bovine Serum, Qualified, Australia Origin
Gelatin	SIGMA	G9391	Type B, powder, BioReagent, suitable for cell culture
HCG	Nanjing Aibei	M2520	Sterilization reagent, intraperitoneal injection, 50 IU/mL
Hyaluronidase	SIGMA	V900833	Reagent grade, powder
KSOM	Merck	MR-020P-D	(1x), Powder, w/o Phenol Red, 5 x 10 mL
L-glutamine	Gibco	25030081	L-glutamine-200 mM (100x), liquid
M2	Merck	MR-015-D	EmbryoMax M2 Medium (1x), Liquid, with Phenol Red
Mineral oil	SIGMA	M8410	Mineral oil is suitable for use as a cover layer to control evaporation and cross-contamination in various molecular biology applications
Penicillin-Streptomycin, liquid	Gibco	15140122	10,000 Units penicillin (base) and 10,000 units streptomycin (base), utilizing penicillin G (sodium salt) and streptomycin sulfate in 0.85% saline
PMSG	Nanjing Aibei	M2620	Sterilization reagent ,intraperitoneal injection, 50 IU/mL
Progesterone	SIGMA	5341	Steroid hormone secreted by the corpus luteum during the latter half of the menstrual cycle
Sodium pyruvate	Gibco	11360070	Sodium pyruvate is commonly added to cell culture media as a carbon source in addition to glucose
Stereomicroscope	Olympus	SZX7	Embryo retrieval and observation of embryo development