Diese Methode kann helfen, wichtige Fragen im reproduktiven Bereich zu beantworten, wie zum Beispiel, wie der pubertäre Beginn bei Mäusen und Ratten durch präputiale Trennung, vaginale Öffnung und die Etablierung erster Estrus vor der Durchführung einer Fruchtbarkeitsstudie zu bestimmen. Der Hauptvorteil dieser Technik besteht darin, dass es durch die Etablierung des pubertären Beginns mit dem nachgewiesenen nicht-invasiven Ansatz möglich ist, eine Fruchtbarkeitsstudie an Tieren zu verfolgen und durchzuführen, die geschlechtsreif sind. Die Auswirkungen dieser Technik reichen bis zur Diagnose von Reproduktionsdefiziten, die durch genetische Mutationen oder Behandlungen verursacht werden, die anfällig für die Fortpflanzungskompetenz sind, wie z. B. endokrine störende Chemikalien.
Obwohl diese Methode Einblicke in die Reproduktionskompetenz bei Mäusen geben kann, kann sie auch auf andere Modellsysteme wie Ratten und Hamster angewendet werden. Die visuelle Demonstration dieser Methode ist von entscheidender Bedeutung, da sie gute und delikate Fähigkeiten im Umgang mit Tieren erfordert. Es ist besonders wichtig, die Mäuse korrekt für die folgende visuelle Identifizierung der präputialen Trennung und vaginalen Öffnung zu halten.
Um den Arbeitsbereich vorzubereiten, legen Sie ein Pad auf den Tisch. Legen Sie dann einen sauberen Mauskäfig oben mit dem Gitter nach oben, auf dem Pad. Richten Sie als Nächstes eine Skala im Arbeitsbereich ein.
Legen Sie einen sauberen 500 bis 1000 Milliliter Becher auf die Waage und belaufen Sie es. Platzieren Sie dann ein Blatt neben dem Arbeitsbereich, um die Daten aufzuzeichnen. Legen Sie danach den Mauskäfig in den Arbeitsbereich.
Öffnen Sie den Käfig und entfernen Sie den Deckel, die Wasserflasche und den Lebensmittelhalter auf den Tisch. Während Sie die Maus am Schwanz halten, legen Sie sie auf die saubere Mauskäfigplatte. Während Sie den Schwanz halten, erlauben Sie der Maus, das Raster der Käfigoberseite zu erkunden.
Ziehen Sie den Schwanz vorsichtig nach hinten und nähern Sie sich der anderen Hand der Haut nahe an Hals und Ohren. Greifen Sie die lockere Haut zwischen Schultern und Hals mit Daumen und Zeigefinger. Dann greifen Sie die Haut auf dem Rücken mit den restlichen Fingern und halten Sie die Maus, indem Sie sie sanft gegen die Hand drücken.
Mit der freien Hand, drücken Sie sanft die Haut um den Penis zurück. Bei der präputialen Trennung gleitet die präputiale Haut nach hinten und setzt den Eichel-Penis frei. Zeichnen Sie nach der Untersuchung das Vorhandensein oder Fehlen einer präputialen Trennung auf.
Danach wiegen Sie die Maus und notieren Sie ihr Gewicht. Führen Sie dann die Maus wieder in den Gehäusekäfig ein, indem Sie den Becher über den Käfigboden halten und die Maus von selbst verlassen lassen. Legen Sie eine Baumwollkugel, einen großen Becher und eine Flasche steriles Wasser in den Arbeitsbereich.
Gießen Sie steriles Wasser in das Becherglas. Dann befeuchten Sie die Baumwollkugel mit dem sterilen Wasser in den Becher und legen Sie sie neben die saubere Käfigplatte. Platzieren Sie den Mauskäfig im Arbeitsbereich.
Dann übertragen Sie die Maus auf den Käfig oben, indem Sie es durch die Basis seines Schwanzes halten. Ziehen Sie vorsichtig am Schwanz der Maus, um eine Vorwärtsbewegung durch die Maus zu fördern. Danach heben Sie den Schwanz an, während Sie die Hüften mit drei Fingern stützen.
Reinigen Sie die Vulva vorsichtig mit der befeuchteten Baumwollkugel, und untersuchen Sie dann die Vulva, um festzustellen, ob die Vagina vollständig geöffnet ist. Zeichnen Sie auf, ob eine vaginale Öffnung aufgetreten ist. Dann wiegen Sie die Maus und bringen Sie sie in den heimischen Käfig zurück.
Bereiten Sie einen sauberen Mauskäfig mit Deckel, Wasser, Futter, Bettwäsche und Nistmaterial für jedes Brutpaar von Mäusen vor. Füllen Sie dann die Käfigkarten mit den erforderlichen Informationen aus. Legen Sie den vorbereiteten Bettkäfig auf einen sauberen Tisch, führen Sie dann langsam eine handschuhbare Hand in den Mauskäfig ein und lassen Sie ihn für kurze Zeit im Käfig.
Nähern Sie sich langsam den Mäusen mit der handgeliebten Hand. Wenn die Mäuse über die Hand laufen, greifen Sie den Schwanz einer Maus zwischen Daumen und Zeigefinger, und heben Sie dann die Maus am Schwanz. Die Maus kann bis zu zwei bis drei Sekunden ohne Unterstützung des Körpers am Schwanz gehalten werden.
Legen Sie die Maus in den vorbereiteten Zuchtkäfig, und schließen Sie dann den Käfig, nachdem Sie sichergestellt haben, dass die männlichen und weiblichen Mäuse Nahrung, Wasser und Nistmaterial haben. Mit der vorgestellten Methode wurden zwei verschiedene transgene Mausmodelle untersucht. Vaginale Öffnung und präputiale Trennung traten im gleichen Alter und Gewicht sowohl bei den heterozygoten Mäusen als auch bei den Kontrollmäusen auf.
Umgekehrt wurden vaginale Öffnung und präputiale Trennung bei bedingten Knockout-Frauen und Männchen signifikant verzögert und mit erhöhtem Körpergewicht in Verbindung gebracht. Im Alter von 4,5 Wochen hatten weibliche Kontrollen und die bedingten Knockout-Mäuse ein vergleichbares Körpergewicht, während die bedingten Knockout-Männchen etwas schwerer waren als die Kontrollen. Dies deutet darauf hin, dass die Verzögerung bei der vaginalen Öffnung und präputialen Trennung der bedingten Knockout-Mäuse nicht mit einer Verzögerung der Gewichtszunahme verbunden war.
Nach Abschluss des pubertären Beginns wurde die Fruchtbarkeitsstudie im Alter von 10 bis 16 Wochen begonnen. Sowohl männliche als auch weibliche Heterozygotenmäuse waren subfruchtbar. Heterozygote Weibchen erzeugten in der dreimonatigen Studie weniger Würfe, und sowohl männliche als auch weibliche Heterozygotenmäuse erzeugten kleinere Würfe.
Um zu veranschaulichen, wie wichtig es ist, den pubertären Beginn vor der Einrichtung eines Fruchtbarkeitstestes zu bestätigen, wurde die reproduktive Kompetenz bei bedingten Knockout-Mäusen bewertet. Während der 70-tägigen Fruchtbarkeitsstudie erzeugten weder bedingte Knockout-Männchen noch Weibchen Würfe. Beim Versuch dieses Verfahrens ist es wichtig, daran zu denken, die Mäuse vorsichtig zu behandeln und ruhig zu bleiben, während sie sich den Tieren nähern und damit umgehen.
Nach diesem Verfahren, andere Methoden wie die Messung zirkulierender Sexualhormonspiegel können durchgeführt werden, um zusätzliche Fragen zu beantworten, wie Ob Unfruchtbarkeit oder andere Subfertilität durch abnormale Testosteron verursacht wurde, Östrogen, Follikel stimulierendes Hormon, und luteinisierenden Hormonspiegel. Vergessen Sie nicht, dass die Arbeit mit Mäusen aufgrund des Risikos des Beißens und der Entwicklung von Allergien gefährlich sein kann. Um die Exposition zu reduzieren, sollten bei der Durchführung dieses Verfahrens immer Vorsichtsmaßnahmen wie das Tragen von Handschuhen und einem Labormantel und ein sorgfältiger Umgang mit den Mäusen getroffen werden.
