この方法は、前接分離、膣開き、および不妊治療研究を行う前に最初の発情を確立することによって、マウスおよびラットの思春期発症を決定する方法など、生殖分野の重要な質問に答えるのに役立ちます。この技術の主な利点は、実証された非侵襲的アプローチを用いて思春期発症を確立することによって、性的に成熟した動物に従って不妊治療研究を行うことは可能である。この技術の影響は、内分泌破壊化学物質などの生殖能力に影響を与えやすい遺伝子変異または治療によって引き起こされる生殖障害の診断にまで及ぶ。
この方法は、マウスの生殖能力に関する洞察を提供することができますが、ラットやハムスターなどの他のモデルシステムにも適用できます。この方法の視覚的なデモンストレーションは、良い、繊細な動物の取り扱いスキルを必要とするため、重要です。特に、以下の前置分離と膣開きの視覚同定のために、マウスを正しく保持することが重要である。
作業領域を準備するには、テーブルの上にパッドを置きます。その後、グリッドを上に向けて、パッド上にきれいなマウスケージの上を置きます。次に、作業領域にスケールを設定します。
スケールにきれいな500〜1000ミリリットルのビーカーを置き、それをつばきます。次に、ワークシートを作業領域の横に配置して、データを記録します。この後、マウスケージを作業領域に配置します。
ケージを開け、蓋、水筒、食品ホルダーをテーブルに取り外します。尻尾でマウスを保持しながら、きれいなマウスケージの上に置きます。尾のホールドを維持しながら、マウスはケージの上のグリッドを探索することができます。
尾を後ろ向きにそっと引っ張り、もう一方の手を首と耳に近い皮膚に近づけます。肩と首の間のゆるい皮膚を親指と人差し指でつかみます。その後、残りの指で背中の皮膚をつかみ、手にそっと押し付けてマウスを保持します。
自由な手で、陰茎の周りの皮膚をそっと押し戻します。前接頭分離時に、前皮は後方に滑り、亀頭陰茎を露出する。検査後、前置分離の有無を記録する。
この後、マウスの重量を量り、その重量を記録します。次に、ケージの床の上にビーカーを保持し、マウスが自分で出るようにすることによって、ハウジングケージにマウスを再導入します。作業エリアに綿球、大きなビーカー、滅菌水のボトルを置きます。
ビーカーに滅菌水を注ぎます。次に、ビーカーに滅菌水を入れて綿球を加湿し、清潔なケージの上に置きます。マウスケージを作業領域に配置します。
その後、尾の付け根でマウスを保持してケージの上にマウスを移します。マウスの尻尾を軽く引っ張り、マウスの前方移動を促します。この後、3本の指で腰を支えながら尾を持ち上げます。
加湿した綿のボールで外陰部をきれいにし、外陰部を調べて膣が完全に開いているかどうかを判断します。膣の開口部が発生した場合に記録します。その後、マウスの重量を量り、ホームケージに戻します。
マウスの飼育ペアごとに、ふた、水、食べ物、寝具、および入れ子材料を備えたきれいなマウスケージを準備します。その後、必要な情報をケージカードに入力します。準備した寝具ケージをきれいなテーブルの上に置き、手袋をした手をゆっくりとマウスケージに入れ、ケージに短時間放置します。
手袋をした手でゆっくりとマウスに近づきます。マウスが手の上を走ったら、親指と人差し指の間でマウスの尾をつかみ、尾でマウスを持ち上げます。マウスは、最大2〜3秒間、体のサポートなしで尾で保持することができます。
準備された飼育ケージにマウスを置き、オスマウスとメスマウスが食物、水、および巣の材料を持っていることを確認した後、ケージを閉じます。提示された方法を用いて、2つの異なるトランスジェニックマウスモデルが研究された。膣の開口および前形分離は、ヘテロ接合マウスおよび対照マウスの両方で同じ年齢および体重で起こった。
逆に、膣の開口部と前の分離は、条件付きノックアウト女性と男性で有意に遅れ、体重の増加に関連した。4.5週齢で、女性のコントロールと条件付きノックアウトマウスは体重に匹敵し、条件付きノックアウトオスはコントロールよりもわずかに重かった。これは、経膣開口および条件付きノックアウトマウスの前体分離の遅延が体重増加の遅延と関連していないことを示している。
思春期の発症が終わったら、不妊治療の研究は10〜16週で始まった。オスとメスのヘテロジゴテマウスの両方が亜肥沃であった。ヘテロジゴテ雌は3ヶ月間の研究で少ないごみを生成し、男性と女性のヘテロジゴトマウスの両方が小さなごみを生成しました。
生殖アッセイを設定する前に思春期発症を確認することの重要性を説明するために、生殖能力は条件付きノックアウトマウスで評価した。70日間の不妊治療研究の間、条件付きノックアウト男性も女性もゴミを発生させました。この手順を試みる間、注意してマウスを扱い、動物に近づいて扱いながら落ち着いておくことを忘れないでください。
この手順に従って、循環性ホルモンレベルを測定するような他の方法は、不妊症または他の不妊症が異常なテストステロン、エストロゲン、卵胞刺激ホルモン、および黄体形成ホルモンレベルによって引き起こされたかどうかなどの追加の質問に答えるために実行することができる。マウスを使用すると、噛み付きやアレルギーの発症のリスクがあるため、危険な場合があることを忘れないでください。露出を減らすために、手袋やラボコートの着用、マウスの注意深い取り扱いなどの予防措置は、この手順を実行する際に必ず服用する必要があります。
