Comience abriendo el programa e inicialice la bomba inyectora haciendo clic en el Control del dispensador, seleccione Bomba 2 y luego haga clic en Iniciar. Para enjuagar el tubo con agua ionizada, haga clic en Enjuagar y, a continuación, pulse Siguiente. Seleccione la bomba 2 y ajuste el soporte de la punta a la punta deseada.
A continuación, vuelva a hacer clic en Siguiente. Haga clic en Iniciar para comenzar el enjuague de la tubería. Repita el enjuague con metanol.
Mientras tanto, prepare una solución de sustrato de trabajo diluyendo el material de sustrato de 1 a 100. Finalmente, enjuague el tubo con la dilución de trabajo del sustrato en PBS. Cargue la placa en el lector de placas.
Y luego, en Configuración de medición, elija la apertura a la apertura de luminiscencia de 384 placas de EE. UU., seguida de la distancia entre la placa y el detector a 0,6 milímetros y el tiempo de medición a 0,5 segundos. Una vez que se hayan establecido los ajustes de medición, en la pestaña Configuración general de protocolo, seleccione el tipo de placa como 384 Nuc y elija la opción Por columnas bidireccionales como modo de medición. Introduzca 1 en la pestaña número de repeticiones de ensayo.
Ahora, en la pestaña Dispensar, seleccione la medida de dispensación deseada. A continuación, ajuste el tiempo de medición para cada pozo a un segundo y seleccione la bomba usada deseada. Velocidad de dispensación de 200 microlitros por segundo.
Y el volumen de dispensación a 50 microlitros. Elija Volumen de dispensación como el volumen de llenado de la jeringa para la bomba 2. Y luego establezca el Iniciar dispensación en el número de medición en 1.
En la pestaña Selección de pocillos, utilice el menú desplegable Agregar o quitar muestras, elija el tipo de muestra deseado y seleccione los pocillos que se van a medir. Después de eso, inicie la medición haciendo clic en Ejecutar. La señal de luminiscencia basal del DMSO se observa en la columna 1, y la disminución de la señal de luminiscencia en presencia del inhibidor de ATG4B, FMK-9a, se observa en la columna 24.
