Caracterización de moduladores de receptores activados por proteasas con un ensayo de movilización de calcio mediante un lector de placas

Nuestro laboratorio está trabajando para comprender cómo la modulación de los receptores activados por la proteasa puede inhibir la inflamación. Hemos desarrollado una nueva clase de moléculas pequeñas llamadas parmodulinas que modulan la actividad de PAR1. El objetivo es descubrir parmodulinas con propiedades mejoradas para su potencial uso como candidatos a fármacos, así como comprender su modo de acción.

En estudios preclínicos con nuestros colaboradores, hemos determinado que las parmodulinas pueden ser particularmente prometedoras para el tratamiento de trastornos impulsados por la tromboinflamación, incluidas las enfermedades renales, hepáticas y cardiovasculares. Su modo de acción también puede permitir el desarrollo de compuestos con un mejor perfil de seguridad que los anteriores candidatos a fármacos dirigidos a PAR1. El receptor PAR1 es importante para la activación de las plaquetas, pero su señalización en las células endoteliales también es importante y relevante en numerosas patologías.

Por lo tanto, queríamos desarrollar un protocolo barato y conveniente para probar la actividad de las parmodulinas y las células endoteliales cultivadas. Estamos aquí para compartir un protocolo actualizado que mide la movilización de calcio que utiliza un lector de placas estándar y no requiere un manipulador de líquidos automatizado. Es adecuado para el cribado de ligandos PAR1 en células endoteliales, pero en teoría, puede utilizarse para medir la actividad de cualquier compuesto que afecte a la movilización del calcio.