Un modelo de linfedema de cola murina

El linfedema es una afección crónica sin cura. Afecta a un tercio de las pacientes que se han sometido a una cirugía de ganglios linfáticos axilares y radiación en el tratamiento del cáncer de mama. Tener un modelo animal válido facilita la comprensión del mecanismo y el desarrollo de nuevas estrategias de tratamiento.

El modelo de linfedema de cola de ratón es confiable y reproducible con el inicio rápido. Exhibe cambios histológicos consistentes con linfedema humano. Demostrando el procedimiento estará el Dr. Ganesh Mohan, un post-doctorado de mi laboratorio.

Para comenzar, coloque el ratón sedado de ocho semanas de edad por la esternón y prepare la cola con alcohol isopropílico al 70%. Use una pinza para medir el diámetro de la cola en incrementos de cinco milímetros a partir de 20 milímetros desde la base de la cola. Marque una escisión circunferencial de tres milímetros en la cola a 20 milímetros de la base.

Bajo aumento microscópico quirúrgico, realice una meticulosa escisión de piel de tres milímetros de espesor completo dejando intacta toda la vasculatura subyacente. Incise la marca circunferencial superior primero a través de la dermis seguida de una incisión circunferencial de espesor completo tres milímetros distales a la primera incisión. Haga una incisión vertical perpendicular de espesor completo para conectar las dos incisiones, luego use una pastilla fina dentada para agarrar un borde de ataque y diseccionar profundamente dentro del plano avascular a la dermis y superficial a la adventicia venosa con micro tijeras.

Inyecte 0,1 mililitros de azul isosulfán al 1% por vía subcutánea proximal a la punta de la cola. Identifique los dos canales linfáticos que aparecen azules debido a la inyección adyacente a las venas laterales de la cola. Transecte los linfáticos con cuidado, diseccionando un plano entre la vena lateral y la linfática con tijeras microquirúrgicas rectas.

Pase la punta de una hoja de tijera entre el vaso linfático y la vena lateral y cierre las cuchillas para transectar el vaso linfático. Cuando termine, vista la herida de la cola con un direccionamiento transparente adherente estéril. Administrar verde de indocianina 0,1 mililitros por vía subcutánea en la cola distal del ratón cerca de la punta.

Atenúe las luces de la habitación y luego coloque la angiografía láser infrarroja cercana en la configuración de almacenamiento en búfer y realice imágenes en vivo. Después de la administración de azul isosulfán en la punta de la cola, los linfáticos exhibieron color azul. Los linfáticos se interrumpieron mientras que las venas laterales adyacentes se conservaron.

La hinchazón progresiva y el linfedema persistente sostenido en la cola del ratón después de la inducción del linfedema se muestran aquí. El volumen de la cola del ratón calculado por una ecuación de cono truncado, alcanzó su punto máximo en la semana cuatro y se estabilizó hasta la semana seis, seguida de una mejora gradual que se mantuvo hasta la semana 15. Se realizaron imágenes de contraste de manchas láser de alta resolución para confirmar la perfusión de la cola del ratón en el modelo de cola de linfedema que muestra venas laterales lesionadas y venas laterales intactas para la evaluación de la permeabilidad de la vasculatura de la cola.

La linfangiografía con láser de infrarrojo cercano demostró linfáticos intactos preoperatorios y ningún tránsito de ICG más allá del sitio quirúrgico después de la operación, lo que confirma que la hinchazón fue causada por disfunción linfática. La eficiencia de la entrega de carga genética utilizando tecnología de nanotransfección de tejidos se demostró mediante la entrega de ADN etiquetado con amidita de fluoresceína a la cola murina. El uso de adaptaciones para el modelo de linfedema de cola de ratón y la angiografía láser de infrarrojo cercano ICG es un modelo animal clínicamente traducible y emocionante con implicaciones de tratamiento.