Le lymphœdème est une maladie chronique sans remède. Il affecte un tiers des patientes qui ont subi une chirurgie des ganglions lymphatiques axillaires et une radiothérapie dans le traitement du cancer du sein. Avoir un modèle animal valide facilite la compréhension du mécanisme et le développement de nouvelles stratégies de traitement.
Le modèle de lymphœdème de la queue de souris est fiable et reproductible avec l’apparition rapide. Il présente des changements histologiques compatibles avec le lymphœdème humain. La démonstration de la procédure sera faite par le Dr Ganesh Mohan, un post-doctorant de mon laboratoire.
Pour commencer, positionnez la souris sous sédateur de huit semaines et préparez la queue avec de l’alcool isopropylique à 70%. Utilisez un étrier pour mesurer le diamètre de la queue par incréments de cinq millimètres à partir de 20 millimètres de la base de la queue. Marquez une excision circonférentielle de trois millimètres sur la queue à 20 millimètres de la base.
Sous grossissement microscopique chirurgical, effectuez une excision méticuleuse de la peau de trois millimètres sur toute l’épaisseur en laissant toute la vascularisation sous-jacente intacte. Inciser la marque circonférentielle supérieure d’abord à travers le derme suivie d’une incision circonférentielle de pleine épaisseur de trois millimètres distale à la première incision. Faites une incision verticale perpendiculaire de pleine épaisseur pour relier les deux incisions, puis utilisez un micro fin denté pour saisir un bord d’attaque et disséquer profondément dans le plan avasculaire au derme et superficiel à l’adventitie veineuse avec des micro-ciseaux.
Injecter 0,1 millilitre de 1% de bleu isosulfan par voie sous-cutanée proximale à l’extrémité de la queue. Identifiez les deux canaux lymphatiques apparaissant bleus en raison de l’injection adjacente aux veines latérales de la queue. Transectez soigneusement les lymphatiques en disséquant un plan entre la veine latérale et le lymphatique avec des ciseaux microchirurgicaux droits.
Passez l’extrémité d’une lame de ciseaux entre le vaisseau lymphatique et la veine latérale et fermez les lames pour transecter le vaisseau lymphatique. Lorsque vous avez terminé, habillez la plaie de la queue avec un adressage clair adhérent stérile. Administrer de l’indocyanine verte 0,1 millilitre par voie sous-cutanée dans la queue distale de la souris près de la pointe.
Atténuez les lumières de la pièce, puis placez l’angiographie laser proche infrarouge dans un réglage tampon et effectuez une imagerie en direct. Après l’administration de bleu isosulfan dans l’extrémité de la queue, les lymphatiques présentaient une couleur bleue. Les lymphatiques ont été perturbés tandis que les veines latérales adjacentes ont été préservées.
L’enflure progressive et le lymphœdème persistant soutenu dans la queue de la souris après l’induction du lymphœdème sont montrés ici. Le volume de la queue de souris, calculé par une équation de cône tronqué, a culminé à la quatrième semaine et a plafonné à la sixième semaine, suivie d’une amélioration progressive qui s’est maintenue jusqu’à la semaine 15. L’imagerie à haute résolution du contraste des mouchetures au laser a été réalisée pour confirmer la perfusion de la queue de souris dans le modèle de queue de lymphœdème montrant des veines latérales blessées et des veines latérales intactes pour l’évaluation de la perméabilité vasculaire de la queue.
La lymphangiographie au laser proche infrarouge a démontré des lymphatiques intacts préopératoires et aucun transit ICG au-delà du site chirurgical postopératoire, confirmant ainsi que l’enflure était causée par un dysfonctionnement lymphatique. L’efficacité de l’administration de cargaisons génétiques à l’aide de la technologie de nanotransfection tissulaire a été démontrée en délivrant de l’ADN marqué à l’amidite de fluorescéine à la queue murine. L’utilisation d’adaptations pour le modèle de lymphœdème de la queue de souris et l’angiographie au laser proche infrarouge ICG est un modèle animal cliniquement traduisible et passionnant avec des implications thérapeutiques.
