Эта модель обеспечивает стандартный протокол для создания животных моделей ишемической болезни сердца. Процедура модели животных, установленная этим методом, является стандартной, и результат стабилен. Для начала разделите трехмесячных мини-свиней-самцов весом от 30 до 35 килограммов на группы по пять животных в каждой.
После обезболивания животного установите доступ к уху, вставив постоянный венозный катетер в краевую ушную вену. Теперь перенесите свинью на операционный стол в положении лежа на спине. Выполните интубацию трахеи с помощью трубки французского калибра от 7,0 до 7,5 и подключите ее к дыхательному контуру анестезии.
Обездвижите конечности бинтами, а голову приподнимите стерильной драпировкой. После внутривенного введения векурония бромида для расслабления мышц контролируйте частоту сердечных сокращений, уровень кислорода в крови и температуру тела с помощью электрокардиограммы. После бритья и стерилизации хирургической области наденьте на нее стерильную хирургическую простыню.
Сделав разрез и обнажив внутреннюю молочную вену, как описано в тексте, найдите внутреннюю молочную вену и левую внутреннюю молочную артерию с левой стороны грудины и выполните тупое рассечение внутренней молочной вены сосудистыми щипцами. Выполняют гемостаз путем электрокоагуляции левых внутренних ветвей молочной вены электрическим ножом. Если гемостаз неполный, с помощью хлопчатобумажной нити перевязывают и отмечают два конца вены во время ее забора.
После удаления вены введите гепарин, физиологический раствор, в вену для предварительной обработки. Затем поместите вену в физиологический раствор, сохраните ее для резервного копирования и аналогичным образом надрежьте внутреннюю молочную вену фиктивной группы. Затем вскрывают перикард, закрывают грудную стенку и используют внутреннюю молочную вену для патологического контроля без аортокоронарного шунтирования.
Сделайте примерно семисантиметровый разрез электрическим ножом на перикарде, чтобы обнажить ствол правой коронарной артерии. Подвешивают перикард и сшивают кожу с ипсилатеральной стороны хирургическими швами 1-0. Теперь отделите ствол правой коронарной артерии от окружающих тканей.
Далее с помощью проволочного крючка обходите блокирующую ленту под проксимальным концом изолированной правой коронарной артерии возле аорты. Затем обработайте миокард тремя циклами двухминутной ишемии и пятиминутной реперфузией, затягивая и расслабляя блокирующую ленту. Кроме того, контролируйте электрическую активность сердца с помощью электрокардиограммы во время предварительного кондиционирования реперфузии ишемии.
Затем разрежьте эпикард, покрывающий кровеносные сосуды, предварительно затянув бандаж, чтобы заблокировать правый коронарный кровоток. Обнажая стенку коронарной артерии, разрезают продольно кончиком хирургического лезвия о центр передней стенки кровеносных сосудов. Разрезав просвет, увеличив разрез и установив коронарный шунт, вставьте один конец шунта с катушкой в дистальный отдел коронарной артерии через разрыв.
Теперь шунтируйте кровь в коронарных артериях в полый коронарный шунт, чтобы обеспечить чистое операционное поле, и выполните непрерывный шов между внутренней молочной веной и стенкой аорты с помощью полипропиленового шва 6-0. В середине восходящей аорты окклюзируют левую переднебоковую стенку восходящей аорты полуокклюзионным зажимом. Сделав небольшой разрез хирургическим лезвием в стенке аорты, где была разрезана адвентиция, вставьте головной конец скользящего стержня на головном конце пуансона в полость аорты через этот разрез.
Затем сожмите скользящий стержень наружу, и круглый нож отрежет кусок артериальной стенки. После того, как шунт вытащен, выполните непрерывный шов между внутренней молочной веной и правой коронарной артерией полипропиленовым швом 6-0. После вскрытия полуокклюзионного зажима с помощью УЗИ запишите шунтирование ствола правой коронарной артерии проксимальнее места анастомоза.
Подготовьте животное к операции, как показано ранее. А электрическим ножом сделайте 10-сантиметровый срединный разрез грудины, чтобы расколоть грудину и заборать вену через 30 дней после операции. При разделении избегайте основных кровеносных сосудов, сердца и разделяйте пересаженные кровеносные сосуды слой за слоем.
Быстро отрежьте крупные кровеносные сосуды, соединяющиеся с сердцем, и поместите сердце и восходящую аорту на ледяную крошку. После удаления сосудистого мостика трансплантата, соединенной аорты и правой коронарной артерии промойте все образцы физиологическим раствором при температуре четыре градуса Цельсия. Взяв весь сосуд трансплантата размером около трех-четырех сантиметров и разделив его на четыре-пять равных частей, перенесите его в CryoTubes для быстрой мгновенной заморозки в жидком азоте.
Для анализа зафиксируйте ледяной, промытый физиологическим раствором трансплантат в 4%-ном растворе параформальдегида. После 12 часов фиксации тканей окрашивайте срезы в 50 миллилитрах водного раствора гематоксилина в течение трех минут. Затем разделите секции, промыв 50 миллилитрами 0,5%-ной соляной кислоты-этанола и 0,2%-ной аммиачной воды в течение 10 секунд каждая.
После того, как срезы будут промыты в течение одного часа проточной водой, очистите их, замочив в дистиллированной воде на три минуты. После обезвоживания срезов в 70% и 90% этаноле в течение 10 минут поместите их в 50 миллилитров 0,5%-ного спиртового раствора для окрашивания эозина на две-три минуты. После обезвоживания окрашенных участков в чистом этаноле замочите образцы в чистом ксилоле на 10 минут, чтобы сделать их прозрачными.
Наконец, промокните прозрачные участки нейтральным клеем, прежде чем накрыть их покровом. Наблюдайте патологические срезы под световым микроскопом при 40-кратном увеличении. Ультразвуковое исследование показало, что общее направление кровотока в проксимальном конце, сосудистой полости и дистальном конце сосуда трансплантата было нормальным.
Однако проксимальный и дистальный концы сосуда трансплантата показали некоторый ретроградный поток крови. Гистологический анализ внутренней молочной вены показал, что в фиктивной группе интима оболочка, средняя оболочка и венозная стенка венозного трансплантата оказались в норме. Однако через 30 дней после трансплантации коронарной артерии интима сосуда была утолщена, а просвет сужен.
Среди групп фиктивной и венозной трансплантатной болезни четыре биохимических индекса: аспартатаминотрансфераза, билирубин сыворотки, общий билирубин и креатинин показали статистически значимые изменения. Хирург должен полностью обнажить внутреннюю молочную вену и убедиться, что она не прикреплена к окружающим тканям. Методика обеспечивает стандартизированный процесс моделирования для изучения заболеваний венозных трансплантатов на животных моделях.
