إنشاء وتقييم نموذج مرض الكسب غير المشروع في الوريد الخنزير

يوفر هذا النموذج بروتوكولا قياسيا لإنشاء نماذج حيوانية لمرض الكسب غير المشروع التاجي. إجراء النموذج الحيواني الذي أنشأته هذه الطريقة قياسي ، والنتيجة مستقرة. للبدء ، قسم الخنازير الصغيرة الذكور البالغة من العمر ثلاثة أشهر والتي تزن 30 إلى 35 كيلوغراما إلى مجموعات مرض الكسب غير المشروع والوريدي الوهمي المكونة من خمسة لكل منها.

بعد تخدير الحيوان ، قم بإنشاء وصول الأذن عن طريق إدخال قسطرة وريدية ساكنة في وريد الأذن الهامشي. الآن ، نقل الخنزير إلى طاولة العمليات في وضع ضعيف. قم بإجراء التنبيب الرغامي باستخدام أنبوب قياس فرنسي من 7.0 إلى 7.5 ، وقم بتوصيله بدائرة التنفس التخدير.

شل حركة الأطراف بالضمادات ، وارفع الرأس بستارة معقمة. بعد حقن بروميد فيكورونيوم عن طريق الوريد لاسترخاء العضلات ، راقب معدل ضربات القلب ومستويات الأكسجين في الدم ودرجة حرارة الجسم باستخدام مخطط كهربية القلب. بعد حلاقة وتعقيم المنطقة الجراحية ، ضع ستارة جراحية معقمة حولها.

بعد إجراء الشق وكشف الوريد الثديي الداخلي كما هو موضح في النص ، حدد موقع الوريد الثديي الداخلي والشريان الثديي الداخلي الأيسر على الجانب الأيسر من القص ، وقم بإجراء تشريح حاد للوريد الثديي الداخلي باستخدام ملقط الأوعية الدموية. أداء الارقاء عن طريق التخثير الكهربائي لفروع الوريد الثديي الداخلي الأيسر بسكين كهربائي. إذا كان الإرقاء غير مكتمل ، باستخدام خيط القطن ، قم بربط طرفي الوريد ووضع علامة عليه أثناء حصاده.

بمجرد إزالة الوريد ، قم بحقن الهيبارين ، محلول ملحي طبيعي في الوريد للمعالجة المسبقة. بعد ذلك ، ضع الوريد في المحلول الملحي الطبيعي ، واحتفظ به للنسخ الاحتياطي ، وبالمثل شق الوريد الثديي الداخلي للمجموعة الوهمية. ثم افتح التامور ، وأغلق جدار الصدر ، واستخدم الوريد الثديي الداخلي للسيطرة المرضية دون تطعيم مجازة الشريان التاجي.

قم بعمل شق بطول سبعة سنتيمترات تقريبا بسكين كهربائي على التأمور لكشف جذع الشريان التاجي الأيمن. تعليق التامور ، وخياطة الجلد على الجانب المماثل مع 1-0 خيوط جراحية. الآن ، افصل جذع الشريان التاجي الأيمن عن الأنسجة المحيطة.

بعد ذلك ، باستخدام خطاف سلكي ، تجاوز الشريط المانع أسفل الطرف القريب من الشريان التاجي الأيمن المعزول بالقرب من الشريان الأورطي. بعد ذلك ، عالج عضلة القلب بثلاث دورات من نقص التروية لمدة دقيقتين وخمس دقائق من التروية عن طريق شد واسترخاء الشريط المحظور. أيضا ، راقب النشاط الكهربائي للقلب باستخدام مخطط كهربية القلب أثناء التكييف المسبق لنقص التروية.

بعد ذلك ، قم بقطع النخاب الذي يغطي الأوعية الدموية بعد شد الشريط لمنع تدفق الدم التاجي الأيمن. فضح جدار الشريان التاجي ، مقطوع طوليا بطرف شفرة جراحية ضد مركز الجدار الأمامي للأوعية الدموية. بعد قطع التجويف وتوسيع الشق ووضع تحويلة تاجية ، أدخل أحد طرفي التحويلة بملف في الشريان التاجي البعيد من خلال التمزق.

الآن ، قم بتحويل الدم في الشرايين التاجية إلى التحويلة التاجية المجوفة لضمان مجال جراحي واضح ، وقم بإجراء خياطة مستمرة من طرف إلى جانب بين الوريد الثديي الداخلي وجدار الأبهر باستخدام خياطة البولي بروبلين 6-0. في منتصف الشريان الأورطي الصاعد ، اسد الجدار الأمامي الجانبي الأيسر للشريان الأورطي الصاعد بمشبك شبه انسداد. بعد إجراء شق صغير بالشفرة الجراحية في جدار الأبهر حيث تم قطع المغامرة ، أدخل نهاية رأس العمود المنزلق في نهاية رأس الثقب في تجويف الأبهر من خلال هذا الشق.

بعد ذلك ، اقبض العمود المنزلق للخارج وقطع السكين الدائري قطعة من جدار الشرايين. بمجرد سحب التحويلة ، قم بإجراء خياطة مستمرة من طرف إلى جانب بين الوريد الثديي الداخلي والشريان التاجي الأيمن باستخدام خياطة البولي بروبلين 6-0. بعد فتح المشبك شبه الانسدادي ، سجل التدفق الجانبي لجذع الشريان التاجي الأيمن القريب من موقع المفاغرة باستخدام الموجات فوق الصوتية.

تحضير الحيوان للجراحة كما هو موضح سابقا. وباستخدام سكين كهربائي ، قم بعمل شق قصي متوسط 10 سم لتقسيم القص وحصاد الوريد بعد 30 يوما من الجراحة. أثناء الفصل ، تجنب الأوعية الدموية الرئيسية والقلب وافصل الأوعية الدموية المطعمة طبقة تلو الأخرى.

قطع الأوعية الدموية الكبيرة المتصلة بالقلب بسرعة ، ووضع القلب والشريان الأورطي الصاعد على رقائق الثلج. بمجرد إزالة جسر الأوعية الدموية الطعم والشريان الأورطي المتصل والشريان التاجي الأيمن ، اشطف جميع العينات بمحلول ملحي طبيعي عند أربع درجات مئوية. بعد أخذ وعاء الكسب غير المشروع بالكامل الذي يبلغ طوله حوالي ثلاثة إلى أربعة سنتيمترات وتقسيمه إلى أربعة إلى خمسة أجزاء متساوية ، انقله إلى CryoTubes لتجميده بسرعة في النيتروجين السائل.

للتحليل ، قم بإصلاح الكسب غير المشروع المثلج والمغسول بالمحلول الملحي في محلول بارافورمالدهايد 4٪. بعد 12 ساعة من تثبيت الأنسجة ، قم بتلطيخ الأقسام في 50 مل من محلول مائي من الهيماتوكسيلين لمدة ثلاث دقائق. بعد ذلك ، افصل الأقسام عن طريق الغسيل ب 50 ملليلتر من 0.5٪ حمض الهيدروكلوريك والإيثانول و 0.2٪ ماء الأمونيا لمدة 10 ثوان لكل منهما.

بمجرد شطف الأجزاء لمدة ساعة بالماء الجاري ، قم بتنظيفها عن طريق نقعها في الماء المقطر لمدة ثلاث دقائق. بعد تجفيف الأقسام في 70٪ و 90٪ إيثانول لمدة 10 دقائق ، ضعها في 50 ملليلتر من محلول تلطيخ الكحول يوزين 0.5٪ لمدة دقيقتين إلى ثلاث دقائق. بمجرد تجفيف الأجزاء الملطخة في الإيثانول النقي ، انقع العينات في الزيلين النقي لمدة 10 دقائق لجعلها شفافة.

أخيرا ، قم بتقطير المقاطع الشفافة بغراء محايد قبل تغطيتها بزلة غطاء. مراقبة الأقسام المرضية تحت المجهر الضوئي في تكبير 40 مرة. أظهر الفحص بالموجات فوق الصوتية أن الاتجاه الكلي لتدفق الدم كان طبيعيا في الطرف القريب وتجويف الأوعية الدموية والنهاية البعيدة لوعاء الكسب غير المشروع.

ومع ذلك ، أظهرت النهايات القريبة والبعيدة لوعاء الكسب غير المشروع بعض التدفق الرجعي للدم. كشف التحليل النسيجي للوريد الثديي الداخلي أنه في المجموعة الوهمية ، بدت الغلالة الداخلية ، والغلالة الوسطى ، والجدار الوريدي للكسب غير المشروع الوريدي طبيعية. ومع ذلك ، بعد 30 يوما من زرع الشريان التاجي ، تم تكثيف بطانة الوعاء وتم تضييق التجويف.

من بين مجموعات مرض الكسب غير المشروع الوهمي والوريدي ، أظهرت أربعة مؤشرات كيميائية حيوية ، الأسبارتات أمينوترانسفيراز ، البيليروبين المصلي ، البيليروبين الكلي ، والكرياتينين ، تغيرات ذات دلالة إحصائية. يجب على الجراح كشف الوريد الثديي الداخلي بالكامل والتأكد من عدم ارتباطه بالأنسجة المحيطة. توفر هذه التقنية عملية نمذجة موحدة لدراسة أمراض الكسب غير المشروع الوريدي في النماذج الحيوانية.