이 모델은 관상동맥 이식편 질환의 동물 모델을 확립하기 위한 표준 프로토콜을 제공한다. 이 방법으로 확립 된 동물 모델의 절차는 표준이며 결과는 안정적입니다. 먼저 체중이 30-35kg인 생후 3개월 된 수컷 미니돼지를 각각 5마리씩 가짜 및 정맥 이식 질환 그룹으로 나눕니다.
동물을 마취 한 후, 유치 정맥 카테터를 가장자리 귀 정맥에 삽입하여 귀 접근을 설정하십시오. 이제 돼지를 앙와위 자세로 수술대에 옮깁니다. 7.0-7.5 프렌치 게이지 튜브로 기관 삽관을 수행하고 마취 호흡 회로에 연결하십시오.
팔다리를 붕대로 고정시키고 멸균 드레이프로 머리를 들어 올리십시오. 근육 이완을 위해 베쿠로늄 브로마이드를 정맥 주사한 후 심전도를 사용하여 심박수, 혈중 산소 수치 및 체온을 모니터링합니다. 수술 부위를 면도하고 살균한 후 그 주위에 멸균 수술용 드레이프를 놓습니다.
본문에 설명된 대로 절개를 하고 내부 유방을 노출시킨 후 흉골 왼쪽의 내부 유방 정맥과 왼쪽 내부 유방 동맥을 찾아 혈관 겸자로 내부 유방 정맥을 둔기로 절개합니다. 전기 나이프로 왼쪽 내부 유방 정맥 가지의 전기 응고로 지혈을 수행하십시오. 지혈이 불완전한 경우 면사를 사용하여 채취하는 동안 정맥의 양쪽 끝을 결찰하고 표시합니다.
정맥이 제거되면 전처리를 위해 생리 식염수인 헤파린을 정맥에 주입합니다. 그런 다음 정맥을 생리 식염수에 넣고 백업을 위해 보관하고 유사하게 가짜 그룹의 내부 유방 정맥을 절개합니다. 그런 다음 심낭을 열고 흉벽을 닫고 관상 동맥 우회술 없이 병리학적 조절을 위해 내부 유방 정맥을 사용합니다.
오른쪽 관상 동맥 줄기를 노출시키기 위해 심낭에 전기 칼로 약 7 센티미터를 절개하십시오. 심낭을 매달고 1-0 수술 봉합사로 동측 피부를 꿰매십시오. 이제 오른쪽 관상 동맥 줄기를 주변 조직과 분리하십시오.
다음으로, 와이어 후크를 사용하여 대동맥 근처의 고립 된 우측 관상 동맥의 근위 끝 아래의 차단 밴드를 우회합니다. 그런 다음 차단 밴드를 조이고 이완하여 2분 허혈 및 5분 재관류의 3주기로 심근을 치료합니다. 또한 허혈 재관류 사전 컨디셔닝 동안 심전도로 심장의 전기적 활동을 모니터링합니다.
다음으로, 밴드를 조인 후 혈관을 덮고 있는 심외막을 절단하여 우측 관상동맥 혈류를 차단한다. 관상 동맥 벽을 노출시키고, 수술 용 칼날의 끝으로 혈관의 전벽 중심에 대해 세로로 자른다. 내강을 절단하고 절개 부위를 확대하고 관상동맥 션트를 삽입한 후 션트의 한쪽 끝을 코일로 삽입하여 파열을 통해 원위 관상동맥에 삽입합니다.
이제 관상동맥의 혈액을 속이 빈 관상동맥 션트로 션트하여 명확한 수술 영역을 확보하고 6-0 폴리프로필렌 봉합사를 사용하여 내부 유방 정맥과 대동맥벽 사이에 종단 간 연속 봉합을 수행합니다. 상행 대동맥의 중간에서 상행 대동맥의 왼쪽 전외측 벽을 반 폐색 클램프로 폐색합니다. 외막이 절개된 대동맥 벽에 수술용 칼날로 작은 절개를 한 후 펀치의 머리 끝에 있는 슬라이딩 샤프트의 머리 끝을 이 절개를 통해 대동맥강에 삽입합니다.
그런 다음 슬라이딩 샤프트를 바깥쪽으로 수축시키고 원형 칼이 동맥 벽의 일부를 잘라냅니다. 션트가 당겨지면 6-0 폴리프로필렌 봉합사를 사용하여 내부 유방 정맥과 오른쪽 관상 동맥 사이에 종단 간 연속 봉합을 수행합니다. 반 폐색 클램프를 연 후 초음파를 사용하여 문합 부위에 근접한 우측 관상 동맥 줄기의 우회 흐름을 기록합니다.
앞에서 설명한대로 수술을 위해 동물을 준비하십시오. 그리고 전기 칼로 10cm 중앙값 흉골 절개를 하여 흉골을 쪼개고 수술 후 30일 후에 정맥을 채취합니다. 분리하는 동안 주요 혈관, 심장을 피하고 이식 된 혈관을 층별로 분리하십시오.
심장에 연결된 큰 혈관을 빠르게 잘라내고 심장과 상행 대동맥을 얼음 조각 위에 놓습니다. 이식편 혈관 다리, 연결된 대동맥 및 우측 관상 동맥이 제거되면 섭씨 4도에서 생리 식염수로 모든 샘플을 헹굽니다. 약 3-4cm의 이식 용기 전체를 4-5등분으로 나눈 후 CryoTubes로 옮겨 액체 질소에서 빠르게 급속 동결합니다.
분석을 위해 얼음처럼 차가운 식염수로 헹궈진 이식편을 4% 파라포름알데히드 용액에 고정합니다. 12 시간의 조직 고정 후, 3 분 동안 50 밀리리터의 헤마 톡실 린 수용액으로 절편을 염색한다. 그런 다음 50 밀리리터의 0.5 % 염산-에탄올과 0.2 % 암모니아수로 각각 10 초 동안 세척하여 섹션을 분리합니다.
섹션을 흐르는 물로 1시간 동안 헹구면 증류수에 3분 동안 담가 청소합니다. 70 % 및 90 % 에탄올에서 10 분 동안 절편을 탈수 한 후 50 밀리리터의 0.5 % 알코올 에오신 염색 용액에 2-3 분 동안 넣습니다. 염색된 절편이 순수한 에탄올로 탈수되면 샘플을 순수한 자일렌에 10분 동안 담가 투명하게 만듭니다.
마지막으로 투명 부분을 중성 접착제로 떨어뜨린 후 커버 슬립으로 덮습니다. 광학 현미경으로 병리학적 부분을 40배 배율로 관찰합니다. 초음파 검사는 이식편의 근위부, 혈관강 및 말단부에서 전체 혈류 방향이 정상임을 보여주었습니다.
그러나 이식 혈관의 근위 및 원위 말단은 약간의 역행 혈액 흐름을 보였다. 내부 유방 정맥의 조직 학적 분석 결과 가짜 그룹에서 tunica intima, tunica media 및 정맥 이식편의 정맥 벽이 정상으로 나타났습니다. 그러나 관상 동맥 이식 30 일 후 혈관의 내막이 두꺼워지고 내강이 좁아졌습니다.
가짜 및 정맥 이식 질환군 중 아스파르테이트 아미노전이효소, 혈청 빌리루빈, 총 빌리루빈, 크레아티닌의 4가지 생화학적 지표가 통계적으로 유의한 변화를 보였다. 외과의는 내부 유방 정맥을 완전히 노출시키고 주변 조직에 부착되지 않도록해야합니다. 이 기술은 동물 모델에서 정맥 이식편 질환을 연구하기 위한 표준화된 모델링 프로세스를 제공합니다.
