Bu model, koroner greft hastalığının hayvan modellerini oluşturmak için standart bir protokol sağlar. Bu yöntemle kurulan hayvan modeli prosedürü standarttır ve sonuç kararlıdır. Başlamak için, 30 ila 35 kilogram ağırlığındaki üç aylık, erkek minidomuzları, her biri beş hayvandan oluşan sahte ve venöz greft hastalığı gruplarına bölün.
Hayvanı uyuşturduktan sonra, marjinal kulak damarına yerleşik bir venöz kateter yerleştirerek kulak erişimini sağlayın. Şimdi, domuzu sırtüstü pozisyonda ameliyat masasına aktarın. 7.0 ila 7.5 Fransız gauge tüpü ile trakea entübasyonu yapın ve anestezi solunum devresine bağlayın.
Uzuvları bandajlarla hareketsiz hale getirin ve kafayı steril bir örtü ile yükseltin. Kas gevşemesi için vekuronyum bromür intravenöz olarak enjekte edildikten sonra, bir elektrokardiyogram kullanarak kalp atış hızını, kan oksijen seviyelerini ve vücut ısısını izleyin. Cerrahi bölgeyi tıraş ettikten ve sterilize ettikten sonra, etrafına steril bir cerrahi örtü yerleştirin.
Kesisi yapıldıktan ve metinde anlatıldığı gibi iç meme damarını açığa çıkardıktan sonra, sternumun sol tarafındaki iç meme damarını ve sol iç meme arterini yerleştirin ve vasküler forseps ile iç meme veninin künt diseksiyonunu gerçekleştirin. Sol iç meme damarı dallarının elektrikli bıçakla elektrokoagülasyonu ile hemostaz yapın. Hemostaz eksikse, pamuk ipliği kullanarak, hasat edilirken damarın iki ucunu yaslanın ve işaretleyin.
Damar çıkarıldıktan sonra, ön tedavi için damara heparin, normal salin enjekte edin. Ardından, damarı normal saline koyun, yedekleme için saklayın ve benzer şekilde sahte grubun iç meme damarını kesin. Daha sonra, perikardı açın, göğüs duvarını kapatın ve koroner arter baypas grefti olmadan patolojik kontrol için iç meme damarını kullanın.
Sağ koroner arter gövdesini ortaya çıkarmak için perikard üzerinde elektrikli bıçakla yaklaşık yedi santimetrelik bir kesi yapın. Perikardın askıya alınması ve ipsilateral taraftaki cildin 1-0 cerrahi dikişle dikilmesi. Şimdi, sağ koroner arter gövdesini çevreleyen dokulardan ayırın.
Daha sonra, bir tel kanca kullanarak, aortun yakınındaki izole edilmiş sağ koroner arterin proksimal ucunun altındaki blokaj bandını atlayın. Daha sonra, bloke edici bandı sıkılaştırıp gevşeterek miyokardın üç döngü iki dakikalık iskemi ve beş dakikalık reperfüzyon ile tedavi edilmesi. Ayrıca, iskemi reperfüzyonu ön koşullandırması sırasında elektrokardiyogram ile kalbin elektriksel aktivitesini izleyin.
Daha sonra, sağ koroner kan akışını engellemek için bandı sıktıktan sonra kan damarlarını kaplayan epikardı kesin. Koroner arter duvarının açığa çıkarılması, kan damarlarının ön duvarının merkezine karşı cerrahi bir bıçağın ucu ile uzunlamasına kesilmiştir. Lümeni kestikten ve insizyonu büyüttükten ve koroner bir şant yerleştirdikten sonra, şantın bir ucunu bir bobin ile gözyaşı yoluyla distal koroner artere yerleştirin.
Şimdi, açık bir ameliyat alanı sağlamak için koroner arterlerdeki kanı içi boş koroner şanta şönt alın ve 6-0 polipropilen sütür ile iç meme damarı ile aort duvarı arasında uçtan uca sürekli bir dikiş gerçekleştirin. Yükselen aortun ortasında, yükselen aortun sol anterolateral duvarını yarı oklüzyon kelepçesi ile tıkayın. Adventitinin kesildiği aort duvarında cerrahi bıçakla küçük bir kesi yaptıktan sonra, zımbanın baş ucundaki sürgülü şaftın baş ucunu bu kesiden aort boşluğuna yerleştirin.
Ardından, sürgülü şaftı dışa doğru daraltın ve dairesel bıçak arteriyel duvarın bir parçasını keser. Şant çekildikten sonra, 6-0 polipropilen sütür ile iç meme damarı ile sağ koroner arter arasında uçtan uca sürekli bir dikiş gerçekleştirin. Yarı oklüzyon kelepçesini açtıktan sonra, ultrason kullanarak sağ koroner arter gövdesinin anastomoz bölgesine proksimal bypass akışını kaydedin.
Hayvanı daha önce gösterildiği gibi ameliyat için hazırlayın. Ve bir elektrikli bıçakla, sternumu bölmek ve ameliyattan 30 gün sonra damarı toplamak için 10 santimetrelik bir medyan sternal kesi yapın. Ayrılırken, ana kan damarlarından, kalpten kaçının ve aşılanmış kan damarlarını katman katman ayırın.
Kalbe bağlanan büyük kan damarlarını hızla kesin ve kalbi ve yükselen aortu buz yongaları üzerine yerleştirin. Greft vasküler köprüsü, bağlı aort ve sağ koroner arter çıkarıldıktan sonra, tüm örnekleri dört santigrat derecede normal salinle durulayın. Yaklaşık üç ila dört santimetrelik tüm greft damarını aldıktan ve dört ila beş eşit parçaya böldükten sonra, sıvı azotta hızlı bir şekilde yanıp sönmek için CryoTubes'a aktarın.
Analiz için, buz gibi soğuk, tuzlu suyla durulanmış grefti %4 paraformaldehit çözeltisine sabitleyin. 12 saatlik doku fiksasyonundan sonra, bölümleri üç dakika boyunca sulu bir hematoksilin çözeltisinin 50 mililitresinde boyayın. Daha sonra, bölümleri her biri 10 saniye boyunca 50 mililitre% 0.5 hidroklorik asit-etanol ve% 0.2 amonyak suyu ile yıkayarak ayırın.
Bölümler akan su ile bir saat durulandıktan sonra, üç dakika boyunca damıtılmış suya batırarak temizleyin. Bölümleri 10 dakika boyunca% 70 ve% 90 etanol içinde dehidrate ettikten sonra, iki ila üç dakika boyunca 50 mililitre% 0.5 alkol eozin boyama çözeltisine yerleştirin. Lekeli bölümler saf etanol içinde kurutulduktan sonra, şeffaf hale getirmek için numuneleri 10 dakika boyunca saf ksilen içine batırın.
Son olarak, şeffaf bölümleri bir kapak kayması ile örtmeden önce nötr yapıştırıcı ile damlatın. Patolojik bölümleri ışık mikroskobu altında 40 kat büyütmede gözlemleyin. Ultrasonik muayene, genel kan akış yönünün proksimal uçta, vasküler boşlukta ve greft damarının distal ucunda normal olduğunu gösterdi.
Bununla birlikte, greft damarının proksimal ve distal uçları bir miktar retrograd kan akışı gösterdi. İç meme veninin histolojik analizi, sahte grupta tunika intima, tunika media ve venöz greftin venöz duvarının normal göründüğünü ortaya koydu. Ancak koroner arter transplantasyonundan 30 gün sonra damarın intiması kalınlaştı ve lümen daraldı.
Sahte ve venöz greft hastalığı grupları arasında dört biyokimyasal indeks, aspartat aminotransferaz, serum bilirubin, total bilirubin ve kreatinin istatistiksel olarak anlamlı değişiklikler gösterdi. Cerrah iç meme damarını tamamen açığa çıkarmalı ve çevre dokuya bağlı olmadığından emin olmalıdır. Bu teknik, hayvan modellerinde venöz greft hastalıklarını incelemek için standartlaştırılmış bir modelleme süreci sağlar.
