Ce modèle fournit un protocole standard pour établir des modèles animaux de maladie coronarienne. La procédure de modèle animal établie par cette méthode est standard et le résultat est stable. Pour commencer, divisez les miniporcs mâles âgés de trois mois pesant de 30 à 35 kilogrammes en groupes de maladies fictives et veineuses du greffon de cinq animaux chacun.
Après avoir anesthésié l’animal, établir l’accès à l’oreille en insérant un cathéter veineux à demeure dans la veine marginale de l’oreille. Maintenant, transférez le porc sur la table d’opération en décubitus dorsal. Effectuer une intubation trachéale avec un tube de calibre français de 7,0 à 7,5 et le connecter au circuit respiratoire de l’anesthésie.
Immobiliser les membres avec des bandages et élever la tête avec un champ stérile. Après avoir injecté du bromure de vecuronium par voie intraveineuse pour la relaxation musculaire, surveillez la fréquence cardiaque, les niveaux d’oxygène dans le sang et la température corporelle à l’aide d’un électrocardiogramme. Après avoir rasé et stérilisé la zone chirurgicale, placez un champ chirurgical stérile autour de celle-ci.
Après avoir pratiqué l’incision et exposé la veine mammaire interne comme décrit dans le texte, localisez la veine mammaire interne et l’artère mammaire interne gauche sur le côté gauche du sternum, et effectuez une dissection contondante de la veine mammaire interne avec une pince vasculaire. Effectuer une hémostase par électrocoagulation des branches de la veine mammaire interne gauche avec un couteau électrique. Si l’hémostase est incomplète, à l’aide de fil de coton, ligaturer et marquer les deux extrémités de la veine pendant la récolte.
Une fois la veine retirée, injectez de l’héparine, une solution saline normale, dans la veine pour un prétraitement. Ensuite, mettez la veine dans la solution saline normale, conservez-la pour la sauvegarde et incisez de la même manière la veine mammaire interne du groupe fictif. Ensuite, ouvrez le péricarde, fermez la paroi thoracique et utilisez la veine mammaire interne pour un contrôle pathologique sans pontage aortocoronarien.
Faites une incision d’environ sept centimètres avec un couteau électrique sur le péricarde pour exposer le tronc de l’artère coronaire droite. Suspendre le péricarde et coudre la peau du côté ipsilatéral avec des sutures chirurgicales 1-0. Maintenant, séparez le tronc de l’artère coronaire droite des tissus environnants.
Ensuite, à l’aide d’un crochet métallique, contourner la bande de blocage sous l’extrémité proximale de l’artère coronaire droite isolée près de l’aorte. Ensuite, traitez le myocarde avec trois cycles d’ischémie de deux minutes et cinq minutes de reperfusion en resserrant et en relaxant la bande bloquante. Surveillez également l’activité électrique du cœur avec l’électrocardiogramme pendant le pré-conditionnement de la reperfusion ischémique.
Ensuite, coupez l’épicarde recouvrant les vaisseaux sanguins après avoir serré la bande pour bloquer le flux sanguin coronaire droit. Exposition de la paroi de l’artère coronaire, coupée longitudinalement avec la pointe d’une lame chirurgicale contre le centre de la paroi antérieure des vaisseaux sanguins. Après avoir coupé la lumière et élargi l’incision et placé un shunt coronaire, insérez une extrémité du shunt avec une bobine dans l’artère coronaire distale à travers la déchirure.
Maintenant, dérivez le sang dans les artères coronaires dans le shunt coronaire creux pour assurer un champ opératoire clair, et effectuez une suture continue de bout en bout entre la veine mammaire interne et la paroi aortique avec la suture en polypropylène 6-0. Au milieu de l’aorte ascendante, obstruez la paroi antérolatérale gauche de l’aorte ascendante avec une pince de semi-occlusion. Après avoir fait une petite incision avec la lame chirurgicale dans la paroi aortique où l’adventice a été coupée, insérez l’extrémité de la tête de la tige coulissante à l’extrémité de la tête du poinçon dans la cavité aortique à travers cette incision.
Ensuite, contractez l’arbre coulissant vers l’extérieur et le couteau circulaire coupe un morceau de la paroi artérielle. Une fois le shunt retiré, effectuez une suture continue de bout en bout entre la veine mammaire interne et l’artère coronaire droite avec la suture en polypropylène 6-0. Après avoir ouvert la pince de semi-occlusion, enregistrer le débit de dérivation du tronc de l’artère coronaire droite proximal au site de l’anastomose à l’aide d’ultrasons.
Préparez l’animal à la chirurgie comme démontré précédemment. Et avec un couteau électrique, faites une incision sternale médiane de 10 centimètres pour fendre le sternum et prélever la veine 30 jours après la chirurgie. Pendant la séparation, évitez les principaux vaisseaux sanguins, le cœur et séparez les vaisseaux sanguins greffés couche par couche.
Coupez rapidement les gros vaisseaux sanguins reliés au cœur et placez le cœur et l’aorte ascendante sur des morceaux de glace. Une fois que le pont vasculaire du greffon, l’aorte connectée et l’artère coronaire droite sont retirés, rincer tous les échantillons avec une solution saline normale à quatre degrés Celsius. Après avoir prélevé l’ensemble du récipient greffé d’environ trois à quatre centimètres et l’avoir divisé en quatre à cinq parties égales, transférez-le dans CryoTubes pour le congeler rapidement dans de l’azote liquide.
Pour analyse, fixer le greffon glacé rincé au sérum physiologique dans une solution de paraformaldéhyde à 4%. Après 12 heures de fixation des tissus, colorez les sections dans 50 millilitres d’une solution aqueuse d’hématoxyline pendant trois minutes. Ensuite, séparez les sections en les lavant avec 50 millilitres d’acide chlorhydrique-éthanol à 0,5% et d’eau ammoniacale à 0,2% pendant 10 secondes chacune.
Une fois les sections rincées pendant une heure à l’eau courante, nettoyez-les en les trempant dans de l’eau distillée pendant trois minutes. Après avoir déshydraté les sections dans de l’éthanol à 70% et 90% pendant 10 minutes, placez-les dans 50 millilitres de solution de coloration à l’éosine à 0,5% d’alcool pendant deux à trois minutes. Une fois que les sections colorées sont déshydratées dans de l’éthanol pur, faites tremper les échantillons dans du xylène pur pendant 10 minutes pour les rendre transparents.
Enfin, égoutter les sections transparentes avec de la colle neutre avant de les recouvrir d’un bordereau de couverture. Observez les coupes pathologiques au microscope optique à un grossissement de 40 fois. L’examen par ultrasons a montré que la direction globale du flux sanguin était normale à l’extrémité proximale, à la cavité vasculaire et à l’extrémité distale du vaisseau du greffon.
Cependant, les extrémités proximale et distale du vaisseau greffé ont montré un écoulement rétrograde du sang. L’analyse histologique de la veine mammaire interne a révélé que dans le groupe fictif, la tunique intima, la tunique moyenne et la paroi veineuse du greffon veineux semblaient normales. Cependant, 30 jours après la transplantation d’artère coronaire, l’intima du vaisseau a été épaissi et la lumière a été rétrécie.
Parmi les groupes de maladies fictives et de greffes veineuses, quatre index biochimiques, l’aspartate aminotransférase, la bilirubine sérique, la bilirubine totale et la créatinine, ont montré des changements statistiquement significatifs. Le chirurgien doit exposer complètement la veine mammaire interne et s’assurer qu’elle n’est pas attachée au tissu environnant. La technique fournit un processus de modélisation standardisé pour l’étude des maladies du greffon veineux dans des modèles animaux.
