Assemblage d’organoïdes rétiniens avec la microglie

Résumé

Les microglies sont des cellules immunitaires résidentes uniques dans la rétine, jouant un rôle crucial dans diverses maladies dégénératives de la rétine. La génération d’un modèle de co-culture d’organoïdes rétiniens avec des microglies peut faciliter une meilleure compréhension de la pathogenèse et de la progression du développement des maladies rétiniennes.

Résumé

En raison de l’accessibilité limitée de la rétine humaine, les organoïdes rétiniens (OI) sont le meilleur modèle pour étudier les maladies rétiniennes humaines, ce qui pourrait révéler le mécanisme du développement rétinien et l’apparition de maladies rétiniennes. Les microglies (MG) sont des macrophages résidents uniques dans la rétine et le système nerveux central (SNC), remplissant des fonctions immunitaires cruciales. Cependant, les organoïdes rétiniens sont dépourvus de microglie puisque leur origine de différenciation est le sac vitellin. La pathogenèse spécifique de la microglie dans ces maladies rétiniennes reste incertaine ; Par conséquent, l’établissement d’un modèle d’organoïde rétinien incorporé à la microglie s’avère nécessaire. Ici, nous avons réussi à construire un modèle co-cultivé d’organoïdes rétiniens avec des microglies dérivées de cellules souches humaines. Dans cet article, nous avons différencié la microglie, puis co-cultivé à des organoïdes rétiniens à un stade précoce. En tant qu’incorporation de cellules immunitaires, ce modèle fournit une plate-forme optimisée pour la modélisation des maladies rétiniennes et le criblage de médicaments afin de faciliter la recherche approfondie sur la pathogenèse et le traitement des maladies liées à la rétine et au SNC.

Introduction

En tant que source limitée de la rétine humaine, la différenciation des cellules souches humaines en organoïdes rétiniens tridimensionnels (3D) représente un modèle in vitro prometteur pour simuler la rétine¹. Il contient différents types de cellules dans la rétine, notamment des photorécepteurs, des cellules ganglionnaires rétiniennes, des cellules bipolaires, des cellules de Müller, des cellules horizontales et des astrocytes². Ce modèle permet d’émuler et d’étudier à la fois les mécanismes de développement rétinien et la pathogenèse des maladies rétiniennes. Cependant, en raison de la méthode de différenciati....

Protocole

Cette étude a été approuvée par le Comité d’éthique institutionnelle de l’hôpital Tongren de Pékin, Université de médecine de la capitale. La lignée cellulaire H9 des HESC provient de l’Institut de recherche WiCell. Préchauffez le milieu de culture cellulaire à température ambiante (RT) pendant 30 minutes avant l’expérience.

1. Génération de la microglie humaine

1. Cultivez les CSEh dans un milieu de cellules souches jusqu’à ce que la densité cellulaire atteigne 80 % à 90 %. Ensemencez au moins 1 x 10⁶ cellules dans chaque puits.
2. Aspirer le milieu de cellules souches et rincer les cellules avec 1....

Discussion

En raison de la disponibilité limitée de la rétine humaine, notre compréhension actuelle des réponses inflammatoires rétiniennes provient presque de modèles animaux. Pour surmonter cette limitation, les organoïdes rétiniens ont été différenciés. Le développement de modèles d’organoïdes rétiniens a été un domaine de recherche actif, visant à récapituler la complexité de la rétine humaine pour la modélisation des maladies et le développement thérapeutique. Plusieurs études ont rapporté avoir r.......

matériels

Name	Company	Catalog Number	Comments
Acctuase	Stemcell Technologies	07920
Advanced DMEM/F12	Thermo	12634-010
Anti-CRX(M02)	abnova	H00001406-M02	Antibody; dilution as per the manufacturer's instructions
Anti-IBA1	Abcam	ab5076	Antibody; dilution as per the manufacturer's instructions
B27	Life Technologies	17105-041
Dispase (1U/mL)	Stemcell Technologies	07923
DMEM basic	Gibco	10566-016
DMEM/F12	Gibco	10565-042
DPBS	Gibco	C141905005BT
EDTA	Thermo	15575020
F12	Gibco	11765-054
FBS	Biological Industry	04-002-1A
Gelatin	Sigma	G7041-100G	Solid
Glutamax	Gibco	35050-061
H9 cell line	WiCell Research Institute
IL-3	RD Systems	203-IL-050
IL-34	PeproTech	200-34-50UG
KSR	Gibco	10828028
Matrix	Corning	356231
M-CSF	RD Systems	216-MC-500
MEM Non-essential Amino Acid Solution	Sigma	M7145
N2	Life Technologies	17502-048
Neurobasal	Gibco	21103-049
Pen/strep	Gibco	15140-122
Stem cell medium	Stemcell Technologies	5990
Taurine	Sigma	T-8691-25G
X-ViVO	LONZA	04-418Q
Y27632	Selleck	S1049
β-mercaptoethanol	Life Technologies	21985-023