Pour commencer, utilisez une seringue Hamilton de 25 microlitres pour injecter intrapéritonéale des ratons anesthésiés avec 15 microlitres d’Addgene. Ensuite, rasez les poils et les moustaches des chiots anesthésiés de six à huit semaines. Montez le rat sur un cadre stéréotaxique avec des barres auriculaires.
Et placez un coussin chauffant en dessous pour maintenir la température corporelle de l’animal. Ensuite, place de gaze trempée dans une solution saline glacée sur la tête du rat pour minimiser les saignements. À l’aide d’un scalpel de taille 15, faites une incision sur la ligne médiane de la peau et du muscle au-dessus du crâne.
Tirez sur la peau et les muscles pour exposer le crâne. À l’aide d’un foret rond d’un par quatre, perforez soigneusement la calotte crânienne pour exposer le cerveau antérieur. Ensuite, utilisez des rongeurs pour couper le crâne.
À l’aide d’un scalpel de taille 15, faites une incision dans le cerveau et le bulbe olfactif. Utilisez une spatule pour déconnecter soigneusement la dure-mère du crâne. Ensuite, soulevez doucement le cerveau sectionné pour afficher le ganglion du trijumeau et la base du crâne.
Cautériser tout saignement à l’aide d’un stylo cautériste. Pour imager le GCaMP6-X, placez la cavité crânienne sous l’objectif du microscope. Ensuite, mettez au point le ganglion terminal.
Ensuite, appliquez des stimuli mécaniques à un centimètre carré du visage. Utilisez un objectif 20X pour visualiser les neurones du ganglion trijumeau qui répondent au stimulus. Pour collecter le stato fluorescent au fil du temps avec le logiciel d’acquisition, appuyez sur le bouton d’acquisition de flux sous le menu d’acquisition.
Réglez ensuite le nombre d’images sur 300 et le temps d’acquisition sur 90 secondes. Définissez les paramètres de l’appareil photo pour acquérir des images à la fréquence d’images. Obtenez des enregistrements de base stables sur trois minutes.
Un plus grand volume de titre viral a entraîné une augmentation de l’infection neuronale des ratons. La stimulation mécanique légère n’activait que la région V2 du ganglion trijumeau. La fluorescence au repos était relativement faible dans la plupart des neurones avec peu d’augmentations spontanées.
Les stimuli naturels, en particulier la stimulation ponctuelle, ont suscité les réponses neuronales les plus robustes. Les stimuli de brosse dans les modèles de lésions de constriction chronique ont suscité une augmentation de deux fois de l’amplitude de la réponse maximale chez les blessés par rapport au côté controlatéral. Lorsque deux stimuli ont été appliqués en série, il y a eu une amplification significative en réponse au deuxième stimulus.
