Cette étude utilise des souris BALB/c pour établir le modèle NEC, qui sera utile pour la recherche sur les maladies sur les lymphocytes T. Le cinquième jour, les deux groupes ne montrent aucune différence significative sur la taille du corps. Cependant, au jour 10, les souris NEC étaient plus minces que les souris témoins de manière significative.
Le poids des souris du groupe NEC a augmenté lentement et le taux de survie a progressivement diminué au cours des cinq jours d’établissement du modèle. Le modèle NEC pourrait être avantageux pour étudier la polarisation des lymphocytes T. Yan Tian, un étudiant de troisième cycle de mon laboratoire, fera la démonstration de la procédure.
Gavage les souris avec 20 à 30 microlitres de LPS, et les nourrir avec 40 à 50 microlitres de formule le cinquième jour. À partir du cinquième jour, placez-les dans un dispositif d’hypoxie à 5% d’oxygène pendant 90 secondes et réoxygénez-les pendant trois minutes. Ensuite, placez les souris dans un environnement de quatre degrés Celsius pendant 15 minutes et transférez-les dans un incubateur.
Observez attentivement toutes les souris, pesez-les tous les jours, enregistrez la survie des souris pendant la période d’induction et notez si leurs selles sont sanglantes et collantes. En tenant la sonde gastrique dans la main droite, fixez la tête de la souris avec l’index sur la tête de la souris doucement enfoncée vers l’arrière et vers le bas. Insérez le tube gastrique du coin gauche de la bouche et déplacez-le lentement de deux à trois centimètres vers le centre de la bouche.
Poussez 40 à 50 microlitres de formule ou 20 à 30 microlitres de LPS dans le tube digestif. Si la souris a un fort réflexe de vomissement et que la sonde gastrique pénètre dans la trachée, retirez-la doucement et laissez la souris se reposer avant de réessayer de gavage. Immergez le tissu frais de l’illum de souris dans 10% de formol, incorporez les tissus dans de la paraffine et coupez-les en tranches de quatre micromètres.
Pour déparaffiniser les sections, mettez-les dans du xylène. Faire tremper pendant cinq minutes avec succès dans de l’éthanol absolu, de l’éthanol à 95 %, de l’éthanol à 80 %, de l’éthanol à 70 % et de l’eau distillée. Ensuite, colorez les sections avec une solution d’hématoxyline pendant cinq minutes et différenciez-les en acide chlorhydrique à 1% et en alcool à 70% pendant cinq secondes.
Enfin, colorez-les avec une solution d’éosine pendant une minute et examinez l’histopathologie du tissu intestinal à un grossissement de 40 fois. Les photomicrographies du score de pathologie intestinale de zéro à quatre ont montré une muqueuse intacte et normale, une séparation sous-muqueuse et lamina propria légère, une séparation sous-muqueuse et lamina propria modérée, une séparation sous-muqueuse et lamina propria sévère et une disparition des villosités intestinales avec nécrose intestinale. Le score de pathologie intestinale était significativement plus élevé dans le groupe NEC que chez le groupe témoin avec une valeur P inférieure à 0,001.
Les selles ont été notées de zéro avec des granulés bien formés à trois avec des selles liquides. Au jour 10, les scores de selles des groupes NEC étaient significativement plus élevés dans le groupe NEC avec une valeur P inférieure à 0,001. Le cinquième jour, les deux groupes n’ont montré aucune différence significative dans la taille du corps.
Cependant, au jour 10, les souris du groupe NEC étaient significativement plus minces et plus petites de la tête à la queue que les souris du groupe témoin. Le poids des souris du groupe NEC a augmenté lentement et le taux de survie a progressivement diminué au cours des cinq jours d’établissement du modèle. La zone iléocécale réséquée du tissu intestinal chez les patients NEC a montré une nécrose du tissu de la muqueuse intestinale.
Dans cette étude, les souris du groupe NEC ont également développé une hémorragie iléocécale et une nécrose. Lorsque vous gavagingz la souris, assurez-vous que la souris n’a pas de mal à éviter d’effectuer l’insertion de la sonde gastrique. Gavage les souris avec 20 à 30 microlitres de LPS et les nourrir avec 40 à 50 microlitres de formule le cinquième jour.
À partir du cinquième jour, placez-les dans un dispositif d’hypoxie à 5% d’oxygène pendant 90 secondes et réoxygénez-les pendant trois minutes. Ce modèle pourrait être utile pour la recherche sur la maladie NEC sur les cellules T et pourrait aider à étudier les réponses des cellules Th2 dans neC.
