L’échantillonnage répété de sang sur le petit animal de laboratoire est un aspect important de l’optimisation du plomb pharmaceutique. Ce protocole détaille les compétences microchirurgicales pour établir un modèle permanent de canulation de la veine jugulaire du rat. Cette technique peut établir efficacement un modèle de canulation de canulation veineuse jugulaire et prélever à plusieurs reprises des échantillons de sang à travers la canule chez des rats conscients tout en évitant le stress et la douleur.
Il est important de localiser la veine jugulaire et sa canulation car la démonstration visuelle de la complexité anatomique n’est pas disponible pour ce modèle. Pour commencer, préparez le poste de travail aseptique avec 75% d’alcool médical, puis anesthésiez le rat rasé avec de l’isoflurane mélangé à de l’oxygène. Injecter par voie sous-cutanée une solution de méloxicam à une dose de deux milligrammes par kilogramme, puis soulever soigneusement la peau près de la clavicule sur le côté droit de la ligne médiane du cou avec une pince et, à l’aide d’une paire de ciseaux chirurgicaux, faire une incision de 1,5 à 2 centimètres de long vers la poitrine.
Pour exposer la veine jugulaire inférieure, utilisez des ciseaux à iris pour disséquer émoussé la fine couverture tissulaire. L’extrémité céphalique proximale de la veine jugulaire externe se compose de deux branches qui peuvent être identifiées visuellement. Soulevez la veine jugulaire avec son tissu membranaire conjonctif pour visualiser la glande lymphatique attachée à la veine jugulaire.
Séparez soigneusement la veine le long de la direction vasculaire du muscle environnant, de la graisse et d’autres tissus. Poussez la pince sous la veine jugulaire sans endommager les vaisseaux sanguins collatéraux et passez deux morceaux de suture 6-0 sous la veine pour marquer les deux extrémités du vaisseau sanguin individuellement. Tirez un morceau de la suture aussi loin que possible vers la tête du rat et ligaturez la veine crâniennement avec deux à trois nœuds à l’aide d’une pince.
Placez la deuxième ligature sur l’extrémité caudale de la veine avec un nœud lâche. Fixez un cathéter en polyuréthane de 11 centimètres, ou PU, à la seringue à pointe émoussée préparée remplie de solution saline héparinisée et poussez lentement la solution saline héparinisée dans le cathéter pour éviter les bulles d’air. Poussez le côté plat non bout à bout de la pince sous la veine jugulaire pour sortir de l’autre côté.
Faites une petite coupe en forme de V sur la veine près de la cravate crânienne avec une paire de microcisseurs castroviejo et ouvrez doucement l’incision avec la pointe de la pince à dilatateur du vaisseau du coude. Découpez l’ouverture oblique de l’extrémité avant du cathéter de la veine jugulaire. Plantez l’extrémité oblique du tube avec une pince et faites-la glisser dans la veine jugulaire.
Tout en avançant le cathéter, retirez lentement la pince microchirurgicale du coude et serrez la surface externe du vaisseau avec une pince. Arrêtez d’insérer le cathéter lorsque vous frappez la première marque bleue du tube PU, qui mesure environ trois centimètres de long. Fixez le cathéter inséré à la veine avec des ligatures caudales et rostrales à l’aide d’une pince.
Enfilez une suture 6-0 à travers le tissu exposé sur le côté droit de l’incision à l’aide d’une aiguille de suture et attachez la ligature avec un hémostat. Ensuite, pliez le cathéter à la deuxième marque bleue pour se lier avec la même ligature et éviter d’obstruer le tube pu. Après avoir coupé tout le fil de suture supplémentaire, fermez le cathéter en remplaçant la seringue à pointe émoussée par un bouchon en acier inoxydable de calibre 22.
Placez le rat en position dorsale et nettoyez doucement la zone entre l’omoplate avec la boule de coton imbibée d’alcool médical à 75%. À l’aide des ciseaux chirurgicaux, faites une très petite incision au centre du cou dorsal. À travers l’incision dorsale, guidez et poussez doucement le trochar sous la peau vers l’incision ventrale sur le côté droit du cou.
Mettez le cathéter veineux dans le trochar, puis retirez et guidez le cathéter veineux vers l’incision dorsale. Après avoir fixé le cathéter extériorisé dans la couche musculaire, fermez la couche cutanée des incisions ventrale et dorsale avec la suture en nylon 6-0 et l’aiguille de suture et écouvillonnez toutes les incisions chirurgicales avec de l’iodophore. Ensuite, retirez le bouchon du cathéter en serrant le cathéter du bout des doigts.
Placez une nouvelle seringue à pointe émoussée et retirez lentement la seringue pour tester le flux sanguin. Tenez à nouveau le cathéter du bout des doigts. Injecter 0,2 millilitre de solution saline héparinisée et 0,1 millilitre de solution de verrouillage dans le cathéter à l’aide de la seringue à pointe émoussée, puis remplacer la seringue par un bouchon en acier inoxydable.
Détachez le cathéter et poussez légèrement le bouchon pour assurer l’étanchéité du cathéter. Pour prélever des échantillons de sang pour les tests hématologiques, placez le rat dans un dispositif de retenue, ouvrez le bouchon et insérez la seringue dans le cathéter pu veineux pour vous assurer que le cathéter n’est pas obstrué. Jeter le sang initialement prélevé contenant un mélange de sang, de solution saline héparinisée et de solution de verrouillage de cathéter.
À l’aide d’une nouvelle seringue, prélever 150 microlitres d’échantillon de sang frais et transférer l’échantillon de sang dans un tube de 0,5 millilitre préalablement pulvérisé avec K2EDTA. Injecter 150 microlitres de solution saline normale préchauffée et infuser 0,2 millilitre de solution saline normale héparinisée stérile à travers le cathéter. Injecter 100 microlitres de la solution de verrouillage dans le cathéter pour assurer l’étanchéité et la stérilité du cathéter avant le prochain prélèvement d’échantillons.
Dans la présente étude, les conditions physiologiques et hématologiques sur six jours postopératoires ont été étudiées. La majorité des rats se sont rétablis dans les quatre à six jours suivant la chirurgie, comme en témoignent un gain de poids corporel de plus de 10 grammes, un apport alimentaire régulier, des composants sanguins sélectionnés liés à l’infection, à la déshydratation et à l’inflammation, notamment les globules blancs, les globules rouges, l’hémoglobine et la numération plaquettaire. Ainsi, les rats ont eu besoin d’un minimum de quatre à six jours pour se rétablir après la procédure.
La grande consommation d’eau indiquait une déshydratation le premier jour après l’opération. En outre, la pharmacocinétique de l’acide ellagique polyphénolique naturel a été étudiée dans le modèle établi de canulation de la veine jugulaire et la faible biodisponibilité de l’acide ellagique a été indiquée par sa faible concentration plasmatique sur 24 heures. L’isolement correct de la veine jugulaire est la première étape la plus importante, car la veine jugulaire incrustée dans d’autres tissus mous peut ne pas être immédiatement visible par le chercheur.
Un prélèvement sanguin séquentiel chez le même animal peut être effectué dans le modèle de rat JVC établi. C’est un outil utile et robuste pour évaluer la performance des formulations de médicaments in vivo.
