Traitement systémique des souris adultes postnatales, juvéniles et avortées par injection dans le sinus rétrobulbaire

Nos recherches portent sur le développement de thérapies géniques pour des maladies génétiques rares, en particulier un groupe de troubles métaboliques connus sous le nom d’acidémies organiques. L’objectif de notre recherche est de déterminer quelles approches pourraient être les mieux adaptées pour passer aux essais cliniques sur l’homme. De multiples thérapies géniques sont approuvées pour traiter une variété de maladies génétiques, ce qui n’était pas le cas il y a dix ans.

En fait, plusieurs essais cliniques de thérapie génique pour l’acidémie organique sont terminés, en cours ou prévus. L’administration systémique à des modèles miroirs de maladies génétiques graves peut être difficile car les souris peuvent ne pas atteindre la taille adulte. Ce protocole d’injection rétrobulbaire permettra de tester des thérapies géniques dans des modèles miroirs avec des phénotypes sévères et, espérons-le, de développer de nouvelles thérapies pour les patients.

Pour commencer, diluez l’AAV au volume et à la concentration d’injection souhaités avec du PBS stérile dans un microtube à centrifuger stérile de 1,5 millilitre pour chaque injection. Avant de remplir la seringue stérile à usage unique, déplacez le piston de haut en bas plusieurs fois pour vous assurer qu’il peut être enfoncé en douceur. Remplissez ensuite la seringue jusqu’au volume souhaité en veillant à ce qu’il n’y ait pas de bulles d’air.

Si vous êtes droitier, positionnez la souris anesthésiée sur son côté gauche, le museau pointant vers la main droite pour injecter l’œil droit. Ensuite, appliquez une ou deux gouttes d’anesthésique ophtalmique sur le globe oculaire à injecter. À l’aide d’un tampon de gaze absorbant stérile, retirez tout excès de solution anesthésique ophtalmique.

Appliquez une légère pression du bout des doigts sur la peau, dorsale et ventrale de l’œil pour faire ressortir partiellement le globe oculaire de la souris de l’orbite. Maintenant, insérez le biseau de l’aiguille vers le bas à un angle de 30 degrés dans le canthus médial. Appliquez lentement et doucement une pression sur le piston de la seringue pour administrer l’injectat.

Enfin, retirez le masque facial de la souris pour permettre la récupération de l’anesthésie. L’expression de l’ARN méthylmalonyl coenzyme CoA mutase a été observée dans les hépatocytes, indiquant une injection rétrobulbaire réussie.