A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
* These authors contributed equally
מקטע כלי דם סטרומה מבודד מכנית (SVF) בשילוב עם הידרוג'ל פיברין מציע נשאות קלה ויעילה לתאי סטרומה ברי קיימא שמקורם בשומן עבור אינדיקציות שונות, כולל הנדסת רקמות או מטרות ריפוי פצעים. כאן, אנו מציגים את ההכנה של מבנה מכני SVF (mSVF)-פיברין הידרוג'ל למחקר תרגומי ויישום קליני.
הפוטנציאל הרגנרטיבי של תאי סטרומה שמקורם בשומן (ASCs) זכה לתשומת לב משמעותית במחקר רגנרטיבי ותרגומי. בעבר, מיצוי תאים אלה מרקמת השומן דרש תהליך רב-שלבי מבוסס אנזימים, וכתוצאה מכך נוצר תמהיל תאים הטרוגניים המורכב מ-ACS ותאים אחרים, המכונים במשותף מקטע כלי הדם של סטרומה (SVF). פרוטוקולי בידוד מכניים SVF (mSVF) שהוצגו לאחרונה גוזלים פחות זמן ועוקפים חששות רגולטוריים. לאחרונה הצענו פרוטוקול שמייצר mSVF עשיר בתאי סטרומה המבוסס על שילוב של תחליב וצנטריפוגה. אחת הבעיות הנוכחיות ביישום mSVF לטיפול בפצעים היא היעדר פיגום המספק הגנה מפני מניפולציה מכנית והתייבשות. הידרוג'ל פיברין הוכח בעבר כנספח שימושי בהעברת תאים למטרות ריפוי פצעים. בעבודה שלהלן, אנו מתארים את שלבי ההכנה של מבנה הידרוג'ל mSVF-פיברין כגישה חדשנית למחקר תרגומי וליישום קליני.
בשנים האחרונות, כירורגיה פלסטית רגנרטיבית התפתחה כנדבך נוסף של כירורגיה פלסטית1. ניתוח פלסטי רגנרטיבי נועד לשקם רקמות פגועות על ידי העברת גורמים, תאים ורקמות מסיסים שנקצרו מהמטופל כדי לקדם שיקום רקמות באופן זעיר פולשני2. תאי גזע שמקורם בשומן (ASC) זכו לתשומת לב בשל יכולתם להתמיין לשושלות מזנכימליות מרובות, מה שהופך אותם למועמדים מבטיחים למחקר ברפואה רגנרטיבית3. פרופיל הציטוקינים שלהם מציג השפעות אנגיוגניות, מדכאות חיסון ונוגדות חמצון4.
באופן מסורתי, ASCs בודדו מרקמת השומן באמצעות גישה אנזימט....
מחקר זה בוצע בהתאם להצהרת הלסינקי. כל התורמים הבגירים נתנו הסכמה מדעת בכתב כדי לאפשר שימוש נוסף בדגימות הרקמה שנאספו. הפרוטוקול עוקב אחר הנחיות ועדת האתיקה של המחקר האנושי של המוסד שלנו.
1. קציר רקמת שומן
בדיקת Resazurin
תחילה בחנו את יכולת הקיום של תאי mSVF במבחנה . לשם כך ערכנו בדיקת כדאיות של תאי רסזורין בימים 0, 3 ו-7. יכולת הקיום של התא בימים 0, 3 ו-7 מתוך ארבע דגימות בסך הכל מוצגת באיור 1. הערכים של יום 0 משמשים כבסיס והוגדרו כ- 100%. ביום השלישי, הבקרה ה.......
הבידוד המכני של SVF מספק חלופה אלגנטית לגישה האנזימטית המסורתית ומציע גישה רחבה ליישום קליני29. למעשה, mSVF, כפי שהוצע בכתב היד הנוכחי, כבר נמצא בשימוש קליני לטיפול בצלקות ברקמות רכות או כנספח להליכים קוסמטיים30. הפרוטוקול המוצג כאן מספק שיטה פשוטה ל.......
למחברים אין מה לחשוף.
בונג-סונג קים נתמך על ידי קרן המחקר הגרמנית (KI 1973/2-1) וקרן נוברטיס למחקר רפואי-ביולוגי (#22A046).
....Name | Company | Catalog Number | Comments |
12-Wellplate | Sarstedt | 83.3921 | |
4′,6-diamidino-2-phenylindole (DAPI) | Biochemica | A1001.0010 | |
50 mL-Falcon | Falcon | 352070 | |
Absorbent Towels, Two Pack | Halyard | 89701 | |
Alamar blue 25 mL | Invitrogen | DAL1025 | |
Albumin, Bovine (BSA) | VWR | 0332-500G | |
Biotek Cytation 5 | Agilent | Cell Imaging Multimode Microplate Reader | |
CaCl2 | Sigma-Aldrich | C5670-500G | |
Cryostat | Microtome | ||
DMEM with 4,5 g/L glucose,with L-Glutamine, with sodium pyruvate | VWR | 392-0416 | |
DPBS | Gibco | 14190-144 | |
Epinephrin | Sigma-Aldrich | E4250 | |
Fetal Bovine Serum | Biowest | S181H-500 | |
Fibrinogen Human Plasma 100 mg | Sigma-Aldrich | 341576-100MG | |
Formalin | Fisher Scientific | SF100-4 | |
Formalin 4% | Formafix | 1308069 | |
FSC 22-Einbettmedium, blau | Biosystems | 3801481S | |
Hematoxylin & Eosin Solution | Sigma-Aldrich | H3136 / HT110132 | |
Lactated Ringer’s Solution 1000 mL | B Braun | R5410-01 | |
Mercedes Cannula 4mm | MicroAire | PAL-R404LL | |
NaCl 0.9% | Bbraun | 570160 | |
OCT Embedding Matrix 125 mL | CellPath | KMA-0100-00A | |
Paraformaldehyde | Fisher Scientific | 10342243 | |
PBS 1% | Sigma-Aldrich | P4474 | |
PenStrep | Sigma-Aldrich | P4333-100ML | |
Petridish 150mm | Sarstedt | 83.1803 | |
Phalloidin-iFluor 488 Reagent | Abcam | ab176753 | |
Sterile Syringe 20 mL Luer | HENKE-JECT | 5200-000V0 | |
Sterile Syringe 30 mL Luer-Lock | BD | 10521 | |
Thrombin from Human Plasma | Sigma-Aldrich | T6884-100UN | |
Tranexamic acid | Orpha Swiss | 6837093 | |
Tulipfilter 1.2 | Lencion Surgical | ATLLLL | |
Tulipfilter 1.4 | Lencion Surgical | ATLLLL |
Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article
Request PermissionThis article has been published
Video Coming Soon
Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved