A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

In This Article

  • Summary
  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • תוצאות
  • Discussion
  • Disclosures
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

מקטע כלי דם סטרומה מבודד מכנית (SVF) בשילוב עם הידרוג'ל פיברין מציע נשאות קלה ויעילה לתאי סטרומה ברי קיימא שמקורם בשומן עבור אינדיקציות שונות, כולל הנדסת רקמות או מטרות ריפוי פצעים. כאן, אנו מציגים את ההכנה של מבנה מכני SVF (mSVF)-פיברין הידרוג'ל למחקר תרגומי ויישום קליני.

Abstract

הפוטנציאל הרגנרטיבי של תאי סטרומה שמקורם בשומן (ASCs) זכה לתשומת לב משמעותית במחקר רגנרטיבי ותרגומי. בעבר, מיצוי תאים אלה מרקמת השומן דרש תהליך רב-שלבי מבוסס אנזימים, וכתוצאה מכך נוצר תמהיל תאים הטרוגניים המורכב מ-ACS ותאים אחרים, המכונים במשותף מקטע כלי הדם של סטרומה (SVF). פרוטוקולי בידוד מכניים SVF (mSVF) שהוצגו לאחרונה גוזלים פחות זמן ועוקפים חששות רגולטוריים. לאחרונה הצענו פרוטוקול שמייצר mSVF עשיר בתאי סטרומה המבוסס על שילוב של תחליב וצנטריפוגה. אחת הבעיות הנוכחיות ביישום mSVF לטיפול בפצעים היא היעדר פיגום המספק הגנה מפני מניפולציה מכנית והתייבשות. הידרוג'ל פיברין הוכח בעבר כנספח שימושי בהעברת תאים למטרות ריפוי פצעים. בעבודה שלהלן, אנו מתארים את שלבי ההכנה של מבנה הידרוג'ל mSVF-פיברין כגישה חדשנית למחקר תרגומי וליישום קליני.

Introduction

בשנים האחרונות, כירורגיה פלסטית רגנרטיבית התפתחה כנדבך נוסף של כירורגיה פלסטית1. ניתוח פלסטי רגנרטיבי נועד לשקם רקמות פגועות על ידי העברת גורמים, תאים ורקמות מסיסים שנקצרו מהמטופל כדי לקדם שיקום רקמות באופן זעיר פולשני2. תאי גזע שמקורם בשומן (ASC) זכו לתשומת לב בשל יכולתם להתמיין לשושלות מזנכימליות מרובות, מה שהופך אותם למועמדים מבטיחים למחקר ברפואה רגנרטיבית3. פרופיל הציטוקינים שלהם מציג השפעות אנגיוגניות, מדכאות חיסון ונוגדות חמצון4.

באופן מסורתי, ASCs בודדו מרקמת השומן באמצעות גישה אנזימט....

Protocol

מחקר זה בוצע בהתאם להצהרת הלסינקי. כל התורמים הבגירים נתנו הסכמה מדעת בכתב כדי לאפשר שימוש נוסף בדגימות הרקמה שנאספו. הפרוטוקול עוקב אחר הנחיות ועדת האתיקה של המחקר האנושי של המוסד שלנו.

1. קציר רקמת שומן

  1. קצרו את רקמת השומן על ידי ביצוע שאיבת שומן סטנדרטית בטכניקת קצירת שומן קונבנציונלית שתוארה בפרסומים קודמים26,27. הקפד להשתמש בתמיסת גידול המורכבת מלקטט ואפינפרין של רינגר רגיל ביחס של 1:200,000.
  2. יש לבצע את שאיבת השומן עם צינורית שאיפה 4 מ"מ, תחת לחץ ורטט שליליים, לתוך שקית סטרילית. העבירו מיד את השומן שנקטף למעב....

תוצאות

בדיקת Resazurin
תחילה בחנו את יכולת הקיום של תאי mSVF במבחנה . לשם כך ערכנו בדיקת כדאיות של תאי רסזורין בימים 0, 3 ו-7. יכולת הקיום של התא בימים 0, 3 ו-7 מתוך ארבע דגימות בסך הכל מוצגת באיור 1. הערכים של יום 0 משמשים כבסיס והוגדרו כ- 100%. ביום השלישי, הבקרה ה.......

Discussion

הבידוד המכני של SVF מספק חלופה אלגנטית לגישה האנזימטית המסורתית ומציע גישה רחבה ליישום קליני29. למעשה, mSVF, כפי שהוצע בכתב היד הנוכחי, כבר נמצא בשימוש קליני לטיפול בצלקות ברקמות רכות או כנספח להליכים קוסמטיים30. הפרוטוקול המוצג כאן מספק שיטה פשוטה ל.......

Disclosures

למחברים אין מה לחשוף.

Acknowledgements

בונג-סונג קים נתמך על ידי קרן המחקר הגרמנית (KI 1973/2-1) וקרן נוברטיס למחקר רפואי-ביולוגי (#22A046).

....

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
12-WellplateSarstedt83.3921
4′,6-diamidino-2-phenylindole (DAPI)BiochemicaA1001.0010
50 mL-FalconFalcon352070
Absorbent Towels, Two PackHalyard89701
Alamar blue 25 mLInvitrogenDAL1025
Albumin, Bovine (BSA)VWR0332-500G
Biotek Cytation 5 AgilentCell Imaging Multimode Microplate Reader 
CaCl2 Sigma-AldrichC5670-500G
CryostatMicrotome
DMEM with 4,5 g/L glucose,with L-Glutamine, with sodium pyruvateVWR392-0416
DPBSGibco14190-144
EpinephrinSigma-AldrichE4250
Fetal Bovine SerumBiowestS181H-500
Fibrinogen Human Plasma 100 mgSigma-Aldrich341576-100MG
FormalinFisher ScientificSF100-4
Formalin 4%Formafix1308069
FSC 22-Einbettmedium, blauBiosystems3801481S
Hematoxylin & Eosin SolutionSigma-AldrichH3136 / HT110132
Lactated Ringer’s Solution 1000 mLB BraunR5410-01
Mercedes Cannula 4mmMicroAirePAL-R404LL
NaCl 0.9%Bbraun570160
OCT Embedding Matrix 125 mLCellPathKMA-0100-00A
ParaformaldehydeFisher Scientific10342243
PBS 1%Sigma-AldrichP4474
PenStrepSigma-AldrichP4333-100ML
Petridish 150mmSarstedt83.1803
Phalloidin-iFluor 488 ReagentAbcamab176753
Sterile Syringe 20 mL LuerHENKE-JECT5200-000V0
Sterile Syringe 30 mL Luer-LockBD10521
Thrombin from Human PlasmaSigma-AldrichT6884-100UN
Tranexamic acidOrpha Swiss6837093
Tulipfilter 1.2Lencion SurgicalATLLLL
Tulipfilter 1.4Lencion SurgicalATLLLL

References

  1. Daar, A. S., Greenwood, H. L. A proposed definition of regenerative medicine. J Tissue Eng Regen Med. 1 (3), 179-184 (2007).
  2. Machens, H. G., Mailänder, P. Regenerative medicine and plastic surgery. Chirurg. 76 (5....

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Explore More Articles

SVFMSVF

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Research

Education

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved