Die Kombination aus mechanisch isolierter stromaler vaskulärer Fraktion und Fibrinhydrogel: Ein Verarbeitungsprotokoll

Zusammenfassung

Die mechanisch isolierte stromale Gefäßfraktion (SVF) in Kombination mit einem Fibrinhydrogel bietet einen einfachen und effizienten Träger für lebensfähige Stromazellen aus Fettgewebe für verschiedene Indikationen, einschließlich Tissue Engineering und/oder Wundheilungszwecke. Hier stellen wir die Herstellung eines mechanischen SVF (mSVF)-Fibrin-Hydrogel-Konstrukts für die translationale Forschung und klinische Anwendung vor.

Zusammenfassung

Das regenerative Potenzial von aus Fettgewebe gewonnenen Stromazellen (ASCs) hat in der regenerativen und translationalen Forschung große Aufmerksamkeit erregt. In der Vergangenheit erforderte die Extraktion dieser Zellen aus Fettgewebe einen mehrstufigen enzymbasierten Prozess, der zu einem heterogenen Zellmix aus ACS und anderen Zellen führte, der gemeinsam als stromale vaskuläre Fraktion (SVF) bezeichnet wird. Die kürzlich eingeführten mechanischen SVF-Isolationsprotokolle (mSVF) sind weniger zeitaufwändig und umgehen regulatorische Bedenken. Wir haben kürzlich ein Protokoll vorgeschlagen, das mSVF erzeugt, das reich an Stromazellen ist, basierend auf einer Kombination aus Emulgierung und Zentrifugation. Ein aktuelles Problem bei der mSVF-Anwendung in der Wundtherapie ist das Fehlen eines Gerüsts, das Schutz vor mechanischer Manipulation und Austrocknung bietet. In der Vergangenheit hat sich gezeigt, dass Fibrin-Hydrogele eine nützliche Ergänzung beim Zelltransfer zur Wundheilung sind. In der vorliegenden Arbeit beschreiben wir die Präparationsschritte eines mSVF-Fibrin-Hydrogel-Konstrukts als neuartigen Ansatz für die translationale Forschung und klinische Anwendung.

Einleitung

In den letzten Jahren hat sich die regenerative plastische Chirurgie zu einer zusätzlichen Säule der plastischen Chirurgie entwickelt¹. Die regenerative plastische Chirurgie zielt darauf ab, geschädigtes Gewebe wiederherzustellen, indem lösliche Faktoren, Zellen und Gewebe, die dem Patienten entnommen wurden, übertragen werden, um die Gewebewiederherstellung auf minimalinvasive Weise zu fördern². Aus Fettgewebe gewonnene Stammzellen (ASCs) haben aufgrund ihrer Fähigkeit, sich in mehrere mesenchymale Linien zu differenzieren, Aufmerksamkeit erregt, was sie zu einem v....

Protokoll

Diese Studie wurde in Übereinstimmung mit der Deklaration von Helsinki durchgeführt. Alle erwachsenen Spender gaben eine schriftliche Einverständniserklärung ab, um die weitere Verwendung der entnommenen Gewebeproben zu ermöglichen. Das Protokoll folgt den Richtlinien der Ethikkommission für die Humanforschung unserer Institution.

1. Entnahme von Fettgewebe

1. Gewinnen Sie das Fettgewebe, indem Sie eine Standard-Fettabsaugung in einer konventionellen Fettgewinnungstechnik durchführen, die in früheren Veröffentlichungen beschrieben wurde^26,27

Diskussion

Die mechanische Isolierung von SVF bietet eine elegante Alternative zum traditionellen enzymatischen Ansatz und bietet einen breiten Zugang für die klinische Anwendung²⁹. Tatsächlich wird die mSVF, wie sie in der vorliegenden Handschrift vorgeschlagen wird, bereits klinisch zur Weichteilbehandlung von Narben oder als Ergänzung zu kosmetischen Eingriffen^{eingesetzt 30}. Das hier vorgestellte Protokoll bietet eine einfache Methode für die e.......

Materialien

Name	Company	Catalog Number	Comments
12-Wellplate	Sarstedt	83.3921
4′,6-diamidino-2-phenylindole (DAPI)	Biochemica	A1001.0010
50 mL-Falcon	Falcon	352070
Absorbent Towels, Two Pack	Halyard	89701
Alamar blue 25 mL	Invitrogen	DAL1025
Albumin, Bovine (BSA)	VWR	0332-500G
Biotek Cytation 5	Agilent		Cell Imaging Multimode Microplate Reader
CaCl2	Sigma-Aldrich	C5670-500G
Cryostat	Microtome
DMEM with 4,5 g/L glucose,with L-Glutamine, with sodium pyruvate	VWR	392-0416
DPBS	Gibco	14190-144
Epinephrin	Sigma-Aldrich	E4250
Fetal Bovine Serum	Biowest	S181H-500
Fibrinogen Human Plasma 100 mg	Sigma-Aldrich	341576-100MG
Formalin	Fisher Scientific	SF100-4
Formalin 4%	Formafix	1308069
FSC 22-Einbettmedium, blau	Biosystems	3801481S
Hematoxylin & Eosin Solution	Sigma-Aldrich	H3136 / HT110132
Lactated Ringer’s Solution 1000 mL	B Braun	R5410-01
Mercedes Cannula 4mm	MicroAire	PAL-R404LL
NaCl 0.9%	Bbraun	570160
OCT Embedding Matrix 125 mL	CellPath	KMA-0100-00A
Paraformaldehyde	Fisher Scientific	10342243
PBS 1%	Sigma-Aldrich	P4474
PenStrep	Sigma-Aldrich	P4333-100ML
Petridish 150mm	Sarstedt	83.1803
Phalloidin-iFluor 488 Reagent	Abcam	ab176753
Sterile Syringe 20 mL Luer	HENKE-JECT	5200-000V0
Sterile Syringe 30 mL Luer-Lock	BD	10521
Thrombin from Human Plasma	Sigma-Aldrich	T6884-100UN
Tranexamic acid	Orpha Swiss	6837093
Tulipfilter 1.2	Lencion Surgical	ATLLLL
Tulipfilter 1.4	Lencion Surgical	ATLLLL