Authors
Contact Us

Sign In

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

In This Article

  • Summary
  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • תוצאות
  • Discussion
  • Disclosures
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

כאן, אנו מציגים פרוטוקול ליצירת אורגנואידים שמקורם בחולי מלנומה על ידי תרבית תרחיפים של תאים מנותקים מרקמות מלנומה טרייה. אורגנואידים אלה משחזרים בנאמנות גידולים ספציפיים למטופל במבחנה, ומציעים גישה חדשנית לחקר מנגנוני דיכוי החיסון של הגידול, בדיקות סקר לתרופות, מנגנוני עמידות לתרופות וגישות מעקב אחר סרטן.

Abstract

עם התפתחות האימונותרפיה, יש צורך מתמשך לפתח מודלים שיכולים לשחזר את המיקרו-סביבה של הגידול של גידולים מקומיים. בעוד מודלים מסורתיים דו-ממדיים ותלת ממדיים יכולים להציע תובנות לגבי התפתחות סרטן והתקדמותו, אלה חסרים היבטים מכריעים המעכבים חיקוי נאמן של גידולים מקומיים. מודל חלופי שזכה לתשומת לב רבה הוא אורגנואיד הנגזר מהמטופל. התפתחותם של אורגנואידים אלה משחזרת את התקשורת הבין-תאית המורכבת, המיקרו-סביבה של הגידול וההיסטוארכיטקטורה של גידולים. מאמר זה מתאר את הפרוטוקול להקמת מודלים אורגנואידים הנגזרים מחולה מלנומה (MPDO). כדי לאמת את המודלים האלה, הערכנו את הרכב תאי החיסון, כולל רמות הביטוי של סמני הפעלת תאי T, כדי לאשר את ההטרוגניות התאית של האורגנואידים. בנוסף, כדי לתאר את התועלת הפוטנציאלית של MPDOs בטיפולים תאיים, הערכנו את היכולות ציטוטוקסיות של טיפול באורגנואידים עם תאי T γδ. לסיכום, מודלי MPDO מציעים דרכים מבטיחות להבנת מורכבות הגידול, אימות אסטרטגיות טיפוליות וקידום טיפול מותאם אישית.

Introduction

מודלים קונבנציונליים של תרביות תאים דו-ממדיות הם כלים חיוניים בחקר הסרטן לחקר התקדמות הסרטן והטיפולבו 1. מודלים אלה לא רק מאפשרים תנאי ניסוי מבוקרים כדי לחקור את המנגנונים המולקולריים והתאיים העומדים בבסיס התפתחות והתקדמות סרטן, אלא גם מספקים תוצאות ניסוי חסכוניות ומהירות יחסית. השימוש בהם, עם זאת, מוגבל בשל המגוון התאי המוגבל במיקרו-סביבה של הגידול (TME), אשר לא ניתן לשחזר בטבע קופלנרי של מודלים מונו-תרבותיים2. בנוסף, מודלים של תרביות תאים מציעים סביבה פשטנית מדי בהשוואה לגוף האדם3. לכן, כדי להבין טוב יותר את התקדמות הסרטן ולפתח טיפולים יעילים, חוקרים פנו למודלים חדשניים שמטרתם לשחזר את TME בטבע מקרוב. כתוצאה מכך, שמירה על נאמנות לגידולים מקומיים היא בעלת חשיבות עליונה במודלים אלה. בהתחשב באופי המורכב של הסרטן, כל סטייה משמעותית מהגידול המקורי עלולה להציג משתנים בלתי צפויים שעשויים לבלבל מסקנות משמעותיות לגבי התנהגות הגידול.

בעוד xenografts שמקורם בחולה (PDX) התפתחו כמערכת מודל המאפשרת מעקב אחר התקדמות הגידול in vivo, כמה מגבלות תוהות עד כמה הגידול המפותח משחזר את הביולוגיה האנושית של סרטן4. לדוגמה, מלנומה TME מכילה תאי חיסון חודרי גידול ותאי סטרומה. כאשר עוברים כקסנוגרפט, התאים הלא סרטניים מהחולה יאבדו בהדרגה, מה שיכול לבחור התאמות שונות מאלה שבגידולי החולה. בעוד שניתן למתן מגבלות אלה על ידי ביצוע מעברים מוגבלים של PDX in vivo, ההבדלים בין המינים עדיין יכולים להוות סיכון לשינויים גנטיים ב- PDX החורגים מזה של הגידול המקומי5. יתר על כן, מודלים PDX נקבעים בדרך כלל בעכברים מדוכאי חיסון כדי למנוע דחייה של רקמות אנושיות. זה מגביל את היכולת לחקור את תפקידה של מערכת החיסון המארחת בסרטן, במיוחד במחקרים אימונותרפיים6. אנו ואחרים השתלנו PDX בעכברים "אנושיים" 7,8. עם זאת, הקמת מודלים PDX בעכברים אנושיים היא גוזלת זמן ויקרה. זה יכול לקחת כמה חודשים עד שנים לפתח מודל PDX יחיד מדגימת הגידול של המטופל, ובכך להגביל את המהירות ואת קנה המידה של המחקר. למרות מגבלות אלה, מודלים של PDX הוכחו כמייצגים במדויק את הביולוגיה של TME, ולכן נעשה בהם שימוש נרחב לפיתוח טיפולים לסרטן, רפואה מותאמת אישית ואימונותרפיה, בין היתר9.

טכניקת תרבית תלת-ממדית חלופית שהתפתחה היא אורגנואיד הנגזר מהמטופל (PDO), שבו גידול של חולה שזה עתה נותח מתורבת כדי ליצור מודלים השומרים על הטרוגניות פנוטיפית, היסטוארכיטקטורה ותקשורת בין-תאית10. יכולתו להידמות מאוד לגידולים מקומיים הודגמה בעבר, כאשר אורגנואידים בתרבית מסרטן לא פולשני שרירי (NMIBC) וסרטן שלפוחית השתן פולשני שרירים (MIBC) הצליחו לשחזר היבטים מרכזיים של גידולי ההורים11. בשל הפוטנציאל והיתרונות שלהם על פני מודלים אחרים, PDOs מציעים מגוון רחב של יישומים מותאמים אישית שחסרים למודלים אחרים, כולל אך לא מוגבל למחקר ופיתוח של מעכבי בקרה חיסונית יחד עם טיפולים תאיים וממוקדים. לדוגמה, בעבר השתמשנו באורגנואידים שמקורם בחולי מלנומה (MPDOs) כדי לחקור את יכולתם של לימפוציטים חודרי גידול (TILs) להתרחב באמצעות נוגדנים IL-2 ונוגדנים נגד PD1 (αPD-1). התוצאות הראו כי ה-TILs שהורחבו על ידי IL-2 ו-αPD-1 לא רק היו בעלי מספר גבוה יותר, אלא גם יכלו לחדור בהצלחה ל-MPDO ולהרוג תאי מלנומה ביעילות גבוהה יותר מאשר TILs שהורחבו בשיטות אחרות12. קבוצות אחרות הראו תוצאות דומות כאשר השימוש באנטי-PD-1 ו/או אנטי-PD-L1 מוביל לכך ש-TILs נשארים פונקציונליים ב-PDOs, מה שמוביל לאחר מכן להרג הגידול13. בנוסף, הקבוצה שלנו השתמשה גם ב-MPDO כדי להעריך את יכולת החדירה וההרג של תאי T γδ14. היישום של PDOs משתרע על פני מגוון רחב של תחומים, כולל הרחבת TIL, מחקרי ציטוטוקסיות וסינון מולקולות קטנות. כל היישומים הללו מדגישים את הפוטנציאל והשימושיות שמודל זה מעניק. ככזה, אנו מתארים את הפרוטוקול המפורט עבור התרבות של MPDOs.

Protocol

רקמות מלנומה אנושית התקבלו מחולים שקיבלו טיפול באוניברסיטת פנסילבניה באמצעות פרוטוקול איסוף רקמות (UPCC08607) שאושר על ידי מועצת הביקורת המוסדית של אוניברסיטת פנסילבניה. כל המטופלים חתמו על הסכמה מדעת. לאחר כריתה של רקמות המלנומה האנושית, רקמת הגידול ממוקמת בתווך הנשר השונה של דולבקו (DMEM) ונשמרת בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס עד לעיבוד (תוך 6 שעות). אורגנואידים שמקורם בחולי מלנומה (MPDOs) נגזרו מגידול טרי כפי שמודגם באיור 1.

1. בידוד תאים מרקמת המלנומה האנושית

  1. הכנות לפני תחילת ההליך
    הערה: ניתן להשתמש בשתי שיטות תרבית (מטריג'ל וג'ל קולגן) לתרבית רקמת מלנומה מנותקת:
    1. לשיטת מטריגל: הכינו תמיסת ציפוי של מטריצת קרום מרתף מופחתת גורם גדילה (GFR) על ידי דילול מטריצת קרום מרתף GFR עם מדיום תרבית אורגנואיד (ראה טבלה 1) ביחס של 1:2. הוסף כ 115 μL של תמיסה מופשרת לכל אחת מכמה בארות של צלחת 48 בארות ולהשאיר אותו להתמצק במשך 30 דקות ב 37 ° C באינקובטור לח.
    2. לשיטת ג'ל הקולגן: יש להוסיף 1 מ"ל של ג'ל קולגן (ראו טבלה 1) לתוספת קרום פנימי בקוטר 30 מ"מ. הניחו לג'ל להתמצק למשך 30 דקות בטמפרטורה של 37°C באינקובטור לח.
  2. הכינו את המדיום המותנה L-WRN15. התווך המותנה L-WRN מופק מקו תאים L-WRN שהונדס להפריש Wnt3a, R-spondin 3 ונוגין למדיום מותנה יחיד הנמצא בשימוש נרחב לתרבית תאים.
    1. הפשיר cryotube של תאי L-WRN באמבט מים 37 ° C. הוסף 5 מ"ל של תווך תא L (ראה טבלה 1) ואת תרחיף התא L-WRN לצינור חרוטי של 15 מ"ל, וצנטריפוגה ב 120 × גרם למשך 5 דקות ב- 4 ° C. שאפו את הסופרנטנט, וודאו ש~500 μL נשאר בתחתית כדי להשעות מחדש את גלולת התאים.
    2. מעבירים את גלולת התא בסופרנאטנט ל-30 מ"ל של תווך תא L על קרח ומוסיפים 150 מיקרוליטר של היגרומיצין (500 מיקרוגרם/מ"ל) ו-300 מיקרוליטר של G418 (500 מיקרוגרם/מ"ל). זרעו את התאים בצפיפות של 3 × 106 על בקבוק T-150 ודגרו ב 37 מעלות צלזיוס באינקובטור לח עם 5% CO2 עד ~ 90% מפגש.
    3. ברגע שהתאים הם ~90% נפגשים, לפצל תאים לחמש צלוחיות T-150 על ידי שטיפה עם 20 מ"ל של מלח חוצץ פוספט (PBS), שאיפה ועיכול עם 3 מ"ל של תחליף טריפסין. לאחר 5 דקות, לנטרל עם 9 מ"ל של תווך תא L ואחריו צנטריפוגה במשך 5 דקות ב 120 × גרם ב 4 ° C . כאשר ~100% נפגשים, פצלו את חמש צלוחיות T-150 ל-10 צלוחיות T-175 תלת-שכבתיות.
    4. לאחר המפגש, יש לשטוף תאים עם 2 x 50 מ"ל של PBS ולאחר מכן עם 25 מ"ל של מדיום כביסה (ראה טבלה 1).
    5. הוסף 75 מ"ל של מדיום תרבית ראשוני לכל בקבוק T-175 תלת שכבתי ודגור במשך 3 ימים ב 37 ° C באינקובטור לח עם 5% CO2 (ראה טבלה 1).
    6. לאחר 3 ימים, קצרו את התווך המותנה לחרוט של 50 מ"ל וסחררו ב 1,100 × גרם במשך 5 דקות ב 4 מעלות צלזיוס. לאסוף את supernatant (מדיום מותנה), להבטיח כי 5 מ"ל נשאר מאחור.
    7. הוסף 75 מ"ל טרי של מדיום תרבית תאים ראשונית לכל בקבוק T-175 תלת שכבתי ודגר במשך 3 ימים נוספים כדי לאסוף תווך מותנה נוסף.
    8. למדיום המותנה שנאסף, הוסף נפח שווה של מדיום תרבית תאים ראשוני (50% נפח) וסנן ואקום את התוכן באמצעות מסנן 0.22 מיקרומטר. לאחסן aliquots לתוך צינורות 50 מ"ל ולאחסן ב -20 ° C לשימוש לטווח ארוך או 4 ° C עד 2-3 שבועות. השתמש במדיום זה כדי להשלים את אמצעי התרבית האורגנואידים (ראה טבלה 1).
      הערה: יש להפשיר את aliquots ב 4 °C בלילה לפני השימוש.
  3. קצירת תערובת התאים מרקמת מלנומה טרייה
    1. לשטוף את רקמת המלנומה שזה עתה נכרתה בצלחת פטרי 10 מ"ל המכילה אמצעי כביסה. לאחר השטיפה הראשונה, השתמשו בפינצטה סטרילית כדי להעביר את הגידול לצלחת פטרי שנייה לשטיפה נוספת וחזרו על תהליך זה 3x על קרח כדי לשמור על שלמות הגידול ועל יכולת הקיום שלו. במהלך מחזורי השטיפה הללו, השתמשו במספריים סטריליים ובלהב כדי להסיר עודפי רקמת חיבור, שומן ושאריות דם. לאחר שלוש השטיפות, הניחו את הגידול בצלחת פטרי ריקה והשתמשו בלהבים סטריליים כדי לטחון אותו דק.
      הערה: לאחר הטחינה, הגידול צריך להציג עקביות דמוית ג'ל. ככל שהטחינה של הגידול עדינה יותר, כך תפוקת התא תהיה גבוהה יותר. הסיבה לכך היא כי גושים גדולים יותר של הגידול יהיה מאתגר יותר לעיכול ולא יכול לעבור דרך מסננת תאי ניילון 70 מיקרומטר בשלב הבא.
    2. לאחר שרקמת הגידול נשטפה היטב וטחונה, העבירו אותה לצינור חרוטי של 50 מ"ל המכיל 10 מ"ל של מדיום העיכול המוכן (ראה טבלה 1). מניחים את החרוט באמבט מים ב 37 ° C, להבטיח את התוכן הם מערבולות כל 5 דקות.
    3. לאחר 25 דקות, הוסף 30 מ"ל של מדיום ADMEM/F12 המכיל 10% FBS כדי לעצור את העיכול.
      הערה: כמויות אלה שצוינו מיועדות לגידולים במשקל שאינו עולה על 0.2 גרם.
    4. סנן את תרחיף התאים המעוכל דרך מסננת תאי ניילון בגודל 70 מיקרומטר, ולאחר מכן שטוף את המסננת עם ADMEM/F12 (1x) Reduced Serum Medium (1:1) המכיל 10% FBS. לאחר שלב הכביסה, השתמשו בפיפטה כדי לאחזר את כל המדיה שנותרה בתחתית המסנן כדי להבטיח אחזור של מספר התאים הגבוה ביותר האפשרי. לאחר מכן, צנטריפוגה ב 300 × גרם במשך 7 דקות ב 4 °C (75 °F). השליכו את הסופרנאטנט והשעו מחדש את הגלולה בתווך תרבית אורגנואידים (ראו טבלה 1).
    5. תרבית את תרחיף המלנומה החד-תאי במערכות תרבית מטריג'ל או קולגן:
      1. מטריג'ל: ספרו את התרחיף החד-תאי כדי להבטיח שכ-2 × 105 תאים נזרעים בבארות מצופות מטריג'ל שחוממו מראש בתוספת 200 מיקרוליטר של מדיום תרבית אורגנואידים.
        הערה: אורגנואידים מבוססי מטריג'ל משמשים לחקר פתופיזיולוגיה, בדיקת יעילות תרופות ובדיקת רעילות לתרופות16.
      2. ג'ל קולגן: יש לספור את התרחיף החד-תאי כדי להבטיח ערבוב של כ-106 תאים עם 1 מ"ל של ג'ל קולגן. הוסיפו את התערובת לתוספות קרום ג'ל הקולגן שהתמצקו מראש והניחו אותן בצלחת של 6 בארות. הוסיפו מספיק מדיום לתרבית אורגנואידים כדי לטבול את התוספות המכילות את התאים וג'ל הקולגן.
        הערה: אורגנואידים מג'ל קולגן משמשים למדידת נדידת תאי T ולחקר התפתחות רקמות16.
    6. תנו לאורגנואידים לגדול תוך הקפדה על הוספת מדיום טרי כל 3 ימים.
    7. יש להעביר את האורגנואידים ברגע שהם מגיעים לגודל של 150-200 מיקרומטר או לשמר אותם בהקפאה עד לשימוש נוסף.
      1. למעבר אורגנואידים, מעבירים את האורגנואידים לחרוט 15 מ"ל ושוטפים עם DPSB 1x. צנטריפוגה את התערובת ב 300 × גרם במשך 7 דקות ב 4 ° C. הסר את supernatant ולהוסיף תחליף טריפסין (50-100 μL לכל organoid) במשך 10 דקות באמבט מים 37 מעלות צלזיוס, להבטיח כי התוכן מעורבל כל 3 דקות.
      2. יש להפסיק את העיכול באמצעות מדיום ADMEM/F12 (1x) Reduced Serum Medium (1:1) המכיל 10% FBS. צנטריפוגות את התערובת ב 300 × גרם במשך 7 דקות ומשהה מחדש בתווך תרבית אורגנואידים.
      3. זרעו את התרחיף החד-תאי לתוך באר חדשה מצופה מטריג'ל/קולגן באותה צפיפות זריעה ראשונית (2 × 10,5 תאים ב-200 מיקרוליטר של תרבית אורגנואידים עבור בארות מצופות מטריג'ל בצלחת 48 בארות או 106 תאים ב-1 מ"ל של תרבית אורגנואידים עבור החדרת קרום פנימי מצופה קולגן בקוטר 30 מ"מ).
      4. לשימור בהקפאה, יש לעכל MPDOs באמצעות תחליף טריפסין לתרחיפים חד-תאיים ולאחר מכן להשעיה של 106 תאים לתוך 1 מ"ל של תווך הקפאה (ראה טבלה 1).

תוצאות

הצורה והגודל של MPDOs נוטרו לאורך זמן כדי ללמוד את דינמיקת הצמיחה שלהם. כפי שניתן לראות באיור 2, במהלך תקופת הגידול הראשונית, גודל האורגנואיד גדל באופן משמעותי במהלך 7 הימים המתוארים. בעקבות התצפית על דינמיקת הגדילה של MPDO, תשומת הלב הופנתה להערכת הרכב תאי החי...

Discussion

הופעתם של PDOs התייחסה למגבלות מרובות שמציבות שיטות מחקר סרטן אחרות שהוקמו בעבר, תוך הצגת יישומים פוטנציאליים טרנספורמטיביים בתחום. טכנולוגיית אורגנואידים זו הוצעה לראשונה בשנת 2009 על ידי הנס קלברס ועמיתיו, שהצליחו לבסס בהצלחה מערכת תרבית אורגנואידים במעיים על ידי גידול ...

Disclosures

למחברים אין ניגודי עניינים להצהיר.

Acknowledgements

מחקר זה מומן בחלקו על ידי מענקים מהחברות R01(CA258113), SPORE (CA261608) ו-P01 (CA114046). איור 1 הוכן בשנת BioRender.com.

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
2 mL Red Cap Internal Threaded Polypropylene Cryogenic VialCorning431420
50 mL Polypropylene Conical TubeCorning352070
100 mm TC-treated Cell Culture DishCorning353003
105 mm Polystyrene Forceps SterileCaplugs Evergreen 222-1121-B1I
150 cm2 Cell Culture FlaskCorningCLS430825
A83-01Tocris2939
Advanced DMEM/F12 (1x) Reduced Serum Medium (1:1)Gibco12634-010
B-27 Supplement (50x)Gibco17504-044
Brilliant Violet 510 anti-human Perforin AntibodyBioLegend308120
Brilliant Violet 605 anti-human Ki-67 AntibodyBioLegend350522
Brilliant Violet 650 anti-human CD366 (Tim-3) AntibodyBioLegend345028
Brilliant Violet 711 anti-human CD45 AntibodyBioLegend304050
Cell Culture Inserts 0.4 µm, 30 mm DiameterMillipore SigmaPIHP03050
Cell Staining BufferBioLegend420201
Cell Strainer 40 µm NylonCorning 352340
Cell Strainer 70 µm NylonCorning 352350
Collagenase, Type IV, powderGibco17104019
Cultrex Rat Collagen ITrevigen3440-100-01
Culture Plate, PS, 48 wells, TC treated with lid, sterileMax Scientific 07-6048
Dimethyl Sulfoxide (DMSO) Hybri-MaxSigma-AldrichD2650
DMEM - high glucose 4.5 mg/mLCorningMT10-0130CV
Dnase I - Grade IIMillipore Sigma10104159001
DPBS, 1% Corning21-031-CV
Fetal Bovine Serum, FBSCorningMT35-010-CV
FITC Annexin V Apoptosis Detection Kit IBD Biosciences 556547
ForskolinTocris1099
Geneticin Selective Antibiotic (G418 Sulfate) (50 mg/mL)ThermoFisher10131035
GlutaMAX SupplementThermoFisher35050061
Ham's F12 Nutrient MixThermoFisher11765054
HEPES (1 M)Gibco15630-080
Hygromycin B (50 mg/mL)ThermoFisher10687010
L-Glutamine 200 mM (100x)Gibco25030-081
L-WRN cellATCCCRL-3276
Matrigel Phenol Free & Growth Fact. ReducedCorning356231
Millex PVDF syringe filter, 0.22 μMMillipore SigmaSLGVR33RB
N-AcetylcysteineSigma-AldrichA9165-5G
NicotinamideSigma-AldrichN0636-100G
Nunc TripleFlask Treated Cell Culture FlaskThermoFisher132867
PE/Cyanine5 anti-human CD8a AntibodyBioLegend301010
PE-Cy 7 Mouse anti-Human CD279 (PD-1)BD Biosciences 561272
Pen StrepGibco15140-122
Recombinant Human EGFPeprotechAF-100-15-1MG
Recombinant Human FGF-acidicPeprotech100-17A
Sodium Bicarbonate Solution (NaHCO3) (7.5%)Quality Biological 118-085-721
Stainless Steel Surgical Blades no. 22Integra4-322
TrypLE Express Gibco12604-021

References

  1. Mirabelli, P., Coppola, L., Salvatore, M. Cancer Cell Lines Are Useful Model Systems for Medical Research. Cancers (Basel). 11 (8), 1098 (2019).
  2. Shannon, A. E., Boos, C. E., Hummon, A. B. Co-culturing multicellular tumor models: Modeling the tumor microenvironment and analysis techniques. Proteomics. 21 (9), e2000103 (2021).
  3. Jubelin, C., Muñoz-Garcia, J., Griscom, L. Three-dimensional in vitro culture models in oncology research. Cell Biosci. 12, 155 (2022).
  4. Jin, J., Yoshimura, K., Sewastjanow-Silva, M., Song, S., Ajani, J. A. Challenges and prospects of patient-derived xenografts for cancer research. Cancers (Basel). 15 (17), 4352 (2023).
  5. Nabel, C. S., Heiden, M. G. V. Patient-derived xenografts to study cancer metabolism: when does X mark the spot). Cancer Res. 81 (17), 4399 (2021).
  6. Choi, Y., et al. Studying cancer immunotherapy using patient-derived xenografts (PDXs) in humanized mice. Exp Mol Med. 50 (8), 99 (2018).
  7. Woo, X. Y., et al. Conservation of copy number profiles during engraftment and passaging of patient-derived cancer xenografts. Nat Genet. 53 (1), 86 (2021).
  8. Somasundaram, R. Tumor-infiltrating mast cells are associated with resistance to anti-PD-1 therapy. Nat Commun. 12 (1), 346 (2021).
  9. Abdolahi, S. Patient-derived xenograft (PDX) models, applications and challenges in cancer research. J Transl Med. 20 (1), 206 (2022).
  10. Yang, S., et al. Organoids: The current status and biomedical applications. Med Comm. 4 (3), e274 (2023).
  11. Minoli, M. Bladder cancer organoids as a functional system to model different disease stages and therapy response. Nat Commun. 14, 2214 (2023).
  12. Ou, L., et al. Patient-derived melanoma organoid models facilitate the assessment of immunotherapies. eBioMedicine. 92, 104614 (2023).
  13. Grönholm, M., et al. Patient-derived organoids for precision cancer immunotherapy. Cancer Res. 81 (12), 3149-3155 (2021).
  14. Ou, L., et al. Preclinical platforms to study therapeutic efficacy of human γδ T cells. Clin Transl Med. 12 (6), e814 (2022).
  15. Murine L-Wrn conditioned medium protocol. The University of Texas MD Anderson Cancer Center Available from: https://www.mdanderson.org/documents/Labs/Taniguchi%20Laboratory/Mouse%20CM.pdf (2024)
  16. Jee, J. H., et al. Development of collagen-based 3D matrix for gastrointestinal tract-derived organoid culture. Stem Cells Int. 13 (2019), 8472712 (2019).
  17. Pipkin, M. E., Rao, A., Lichtenheld, M. G. The transcriptional control of the perforin locus. Immunol Rev. 235 (1), 55 (2010).
  18. Li, X., et al. Tim-3 suppresses the killing effect of Vγ9Vδ2 cells on colon cancer cells by reducing perforin and granzyme B expression. Exp Cell Res. 386 (1), 111719 (2020).
  19. Li, L. T., Jiang, G., Chen, Q., Zheng, J. N. Ki67 is a promising molecular target in the diagnosis of cancer (Review). Mol Med Rep. 11 (3), 1566-1572 (2015).
  20. Sato, T., et al. Single Lgr5 stem cells build crypt-villus structures in vitro without a mesenchymal niche. Nature. 459 (7244), 262-265 (2009).
  21. Li, H. Y., Ren, K., Wang, C., Bu, W. B. Skin organoid research progress and potential applications. International Journal of Dermatology and Venereology. 5 (2), 101-106 (2022).
  22. Sun, L., et al. A human mucosal melanoma organoid platform for modeling tumor heterogeneity and exploring immunotherapy combination options. Sci Adv. 9 (43), (2023).
  23. Vlachogiannis, G., et al. Patient-derived organoids model treatment response of metastatic gastrointestinal cancers. Science. 359 (6378), 920-926 (2018).
  24. Ganesh, K., et al. A rectal cancer organoid platform to study individual responses to chemoradiation. Nat Med. 25 (10), 1607-1614 (2019).
  25. Vilgelm, A. E., et al. Fine-needle aspiration-based patient-derived cancer organoids. iScience. 23 (8), 101408 (2020).

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Explore More Articles

T

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Contact Us

Recommend to library

JoVE NEWSLETTERS

Research

Education

Authors

Librarians

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved