שיטות לקעקוע Xenopus laevis עם מכונת קעקועים סיבובית

Joanna R. Suber; Jennifer Landino

doi:10.3791/67086

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

Summary

כאן, אנו מתארים שיטות לקעקוע בוגר Xenopus laevis (צפרדע אפריקאית ציפורניים) עם מכונת קעקוע סיבובית. קעקוע נכון יוצר ספרות כהות וקלות לקריאה שמחזיקות מעמד מספר חודשים והופכות את בעלי החיים לניתנים להבחנה בקלות למטרות מחקר ושמירת רשומות.

Abstract

מודלים של בעלי חיים מרחיבים את היקף המחקר הביו-רפואי, מקדמים את הבנתנו בביולוגיה התפתחותית, מולקולרית ותאית ומאפשרים לחוקרים למדל מחלות אנושיות. תיעוד ומעקב אחר בעלי חיים בודדים מאפשרים לחוקרים להפחית את מספר בעלי החיים הדרושים למחקר ולשכלל שיטות לשיפור רווחת בעלי החיים. קיימות מספר שיטות מתועדות היטב לסימון ומעקב אחר יונקים, כולל ניקוב אוזניים ותגי אוזניים. עם זאת, השיטות לסימון מיני דו-חיים ימיים מוגבלות, כאשר המשאבים הקיימים מיושנים, לא יעילים או יקרים מדי. בכתב יד זה, אנו מתארים שיטות ושיטות עבודה מומלצות לסימון Xenopus laevis באמצעות מכונת קעקועים סיבובית. קעקוע נכון מביא לקעקועים באיכות גבוהה, מה שהופך אנשים לניתנים להבחנה בקלות עבור חוקרים ומהווה סיכון מינימלי לבריאות בעלי החיים. אנו גם מדגישים את הגורמים לקעקועים באיכות ירודה, מה שעלול לגרום לקעקועים שדוהים במהירות ולגרום נזק מיותר לבעלי חיים. גישה זו מאפשרת לחוקרים ולווטרינרים לסמן דו-חיים, מה שמאפשר להם לעקוב אחר שכפולים ביולוגיים וקווים טרנסגניים ולשמור תיעוד מדויק של בריאות בעלי חיים.

Introduction

מודלים של בעלי חיים הם כלים שימושיים לחקר שאלות הנוגעות לבריאות האדם. בפועל, מחקר ביו-רפואי באמצעות מודלים של בעלי חיים דורש ארגון ותחזוקה קפדניים של מושבת בעלי חיים בריאה. שיטות עבודה מומלצות לטיפול אתי בבעלי חיים ולגידול שואפות להפחית את מספר בעלי החיים הדרושים לניסויים ולחדד שיטות עבודה כדי להבטיח רווחת בעלי חיים¹. סוג צפרדע בעל טפרים, כולל Xenopus laevis (X. laevis; צפרדע אפריקאית בעלת טפרים) ו-Xenopus tropicalis (X. tropicalis; צפרדע בעלת טפרים מערביים), שימשו במחקר ביו-רפואי מאז שנות ה-30 של המאה ה-20, כאשר רופאים דרום אפריקאים השתמשו ב-X. laevis לביצוע בדיקות ההריון הראשונות². בעוד בדיקות הריון מודרניות כבר לא דורשות צפרדעים, התפקיד של מחקר Xenopus נמשך. יתרונות השימוש בקסנופוס למחקר ביו-רפואי כוללים את הגנום המבואר היטב^{שלהם 3}, ביוץ המושרה לאורך כל השנה של ביצים^{גדולות 4}, וביציות המוטלות חיצונית הניתנות להפריה חוץ גופית. תכונות אלה הופכות אותם לנכס שימושי לאמבריולוגיה ופיתוח של בעלי חוליות ^5,6,7, ביולוגיה מולקולרית ותאית בסיסית ^7,8,9,10, ולמידול מחלות אנושיות ^7,11,12,13.

שיטות אמינות למעקב אחר בעלי חיים בודדים של קסנופוס חיוניות לרישום שכפולים ביולוגיים ולשיפור הקפדנות והרבייה במחקר. מכיוון שקסנופוס שוכנים לעתים קרובות בקבוצות, סימון בעלי חיים מאפשר לחוקרים לעקוב בקלות אחר בעלי חיים בודדים⁴. שמירה על תיעוד מדויק של בעלי חיים יכולה לחסוך זמן ומשאבים ולשפר את היכולת לעקוב אחר בריאותם של בעלי חיים. לדוגמה, זיהוי פרטני של בעלי חיים יכול לשפר את תהליכי העבודה הארגוניים ליצירת קווי קסנופוס טרנסגניים, מכיוון שהדבר דורש דורות מרובים של צפרדעים עם גנוטיפים ספציפיים שאומתו על ידי ריצוף¹⁴, הדורש ארגון וזיהוי פרטני של בעלי חיים. זה נכון במיוחד כאשר מוטציות אלה חסרות פנוטיפים בוגרים שניתן להבחין בהם בקלות. באופן דומה, השימוש בביציות ובעוברים של Xenopus לחקר ביולוגיה תאית והתפתחותית בסיסית מועיל ממעקב אחר בעלי חיים בודדים. לאחר גרימת ביוץ, בעלי חיים צריכים לנוח לפחות 3 חודשים כדי למנוע סיבוכים בריאותיים כגון תסמונת ביוץ יתר¹⁵. שיטות זיהוי אינדיבידואליות מבטיחות כי בעלי חיים אינם מושרים לבייץ בתדירות גבוהה מדי.

סימון ומעקב אחר בעלי חיים גם מאפשר לאנשי המעבדה לעקוב אחר בעיות בריאותיות של בעלי חיים. בעלי חיים מאותו גנוטיפ חולים יכולים להצביע על רבייה מוגזמת או על חששות בריאותיים בלתי צפויים הקשורים לטרנסגן. באופן דומה, בעלי חיים שחולים לאחר הביוץ האחרון יכולים להצביע על בעיות עם ריאגנטים, חומרים או טכניקות. מעקב אחר בעלי חיים ובריאותם מאפשר לאנשי מעבדה ווטרינרים לעקוב כאשר חששות עולים מחדש ולנקוט באמצעי מניעה למניעת מחלות עתידיות. ביונקים, ישנן שיטות זיהוי רבות. שיטות קבועות לעכברים כוללות ניקוב אוזניים, תגי אוזניים, קעקוע ושבבים תת עוריים¹⁶. אלה יכולים להבדיל באופן ברור ואמין בין בעלי חיים בתוך מושבה או כלוב ויכולים להיות מנוהלים בקלות על ידי אנשי מעבדה. שיטות כגון ניקוב אוזניים הן זעיר פולשניות, דורשות רק פריט אחד של ציוד מיוחד, ועובדות עבור בעלי חיים ברוב הגילאים. בעוד שמערכות אלה פשוטות ושימושיות עבור עכברים, השימוש בהן בצפרדעים מציב מערך ייחודי של אתגרים. לצפרדעים ולדו-חיים אחרים אין פינה (מבנה אוזן חיצוני). כמה חוקרים הצמידו תגים ללסת, לבוהן או לגפה האחורית של החיה ^17,18. גישה זו גרמה לבעיות שונות: תגי לסת גרמו לגירוי, וצפרדעים נסערות ניסו למשוך תגים עם הגפיים הקדמיות שלהם¹⁷. תגי הבוהן פילחו את הרשת בין אצבעות הרגליים, פגעו בתנועה ונשאו את הסיכון ללכת לאיבוד. ככאלה, דו-חיים זקוקים לשיטות זיהוי משלהם. מבחינה היסטורית, גזיזת אצבעות שימשה גם לסימון דו-חיים^17,19. הבוהן נחתכת בזוג מספריים חדים, וניתן לזהות את החיה לפי אורך הבהונות בכפות הרגליים הקדמיות והאחוריות או לפי הזווית שבה הבוהן גדלה לאחור (בסלמנדרות). עם זאת, שיטה זו מעוררת חשש אתי שגזיזת הבוהן עלולה לפגוע בתנועת החיה¹⁷ . בנוסף, זה יכול לגרום לדימום ולהציג סיכון של זיהום. מערכת סימון מבוססת נוספת היא השתלות עצמיות של העור, שבהן העור נלקח מחלק אחד של הצפרדע ומוצמד בניתוח לחלק אחר. לדוגמה, מתוארת שיטה לסימון גב או כתף של צפרדע באמצעות שתל עור בהיר מחזה²⁰ שלה. השתלות עור מגיעות גם עם מגבלות וסיכונים: ההליך הוא פולשני ומציג את הסיכון של זיהום הידרופילה Aeromonas, או רגל אדומה, נגע שעלול להיות קטלני; ריפוי מלא של autograft לוקח עד 6 שבועות; ועם השיטות המתוארות, רק 6 צפרדעים ניתן לשכן יחד בגלל מקומות מוגבלים לשים autograft²⁰.

גישות סימון פחות פולשניות כוללות חרוזי זכוכית ושבבי משדר^17,19. בשיטת חרוזי הזכוכית, חרוזי זכוכית מושחלים על תפר קטן ותופרים לתוך עור הצפרדע. זה מספק שונות גדולה יותר מאשר השתלות עור, עם לפחות 60 שילובי צבעים ייחודיים. עם זאת, קיים סיכון שהתפר יכול לצאת ולגרום לאיבוד החרוזים. לחלופין, ניתן להשתיל משדר שבב מתחת לעור בשק הלימפה הגבי של הצפרדע. שיטה זו נחשבת לשיטת הסימון הקבועה ביותר ומאפשרת לזהות ולקטלג באופן אינדיבידואלי מספר אינסופי של בעלי חיים. עם זאת, זוהי גם השיטה היקרה ביותר, שכן שבבים בודדים הם יקרים, ומושבה גדולה תהיה יקרה לסמן. שבבים דורשים גם סורק מיוחד כדי לקרוא¹⁹. גישה נפוצה אחת לזיהוי קסנופוס היא התייחסות לצביעה ולדפוס הטבעיים של בעלי החיים. זה עובד טוב במיוחד עבור צפרדעים כגון X. laevis, אשר יש דפוסים ברורים שנשארים לאורך כל הבגרות. עם זאת, דפוסים אלה יכולים להשתנות עם הזמן עם מתח, והצביעה יכולה להיראות שונה כאשר צפרדעים מועברות בין מיכלים שקופים וכהים¹⁵. בנוסף, שיטת זיהוי זו שימושית פחות עבור X. tropicalis, שיש לו דפוסי סימון פחות ברורים בהשוואה ל-X. laevis, או עבור בעלי חיים לבקנים, שאין להם סימוני צבע²¹. אפילו עבור מינים עם סימונים ברורים, אנשי מעבדה יכולים לפרש את המיקום והגודל של הסימונים באופן שונה, מה שעלול לגרום לטעויות בזיהוי. מסיבה זו, צילום בעלי חיים הוא אמין ביותר בשילוב עם שיטת זיהוי נוספת. לכן, אנו מבקשים לסמן ולזהות בעלי חיים מסוג Xenopus באמצעות טכניקה קלה להבחנה, קבועה וזעיר פולשנית.

ישנם מקורות מוגבלים שפורסמו המתארים שיטות לקעקוע דו-חיים. קעקוע תואר לצד טכניקות מיתוג אחרות, כולל מותגי חום, מותגי כסף חנקתי ומותגי הקפאה¹⁷. באותו משאב, הקעקוע נעשה על ידי ציור ספרות עם מחט היפודרמית 27G, והתהליך צוין כלא גורם לזיהום, בניגוד לטכניקות מיתוג אחרות, שהשתמשו בחוט בצורת ספרה או סימן אחר. במקור אחר, מכונת קעקוע חשמלית (שתוארה כמחט רוטטת) שימשה לסימון צפרדעים, אך מעט פרטים נמסרו על הטכניקה^17,19. המחברים מזהירים כי על ידי הפרעה לשכבת הרפש המגנה על הצפרדע, הליך זה מגביר את הסיכון לרגל אדומה. אמנם אין שיטת סימון או זיהוי שהיא גם לגמרי לא פולשנית (כמו צילומים) וגם קבועה (כמו שבבים), אבל קעקוע מספק פשרה יעילה. קעקוע הוא פשוט יחסית בהשוואה לטכניקות אחרות, כגון השתלות עור. יתרונות נוספים כוללים עקומת למידה קטנה יותר וציוד זול יחסית. קעקוע דו-חיים ימיים מגיע עם אתגרים מסוימים, אשר יכולים להפחיד חוקרים ולפגוע בסימון מוצלח של בעלי חיים. מאמר זה נועד לספק לחוקרים שיטות מתועדות היטב לקעקוע קסנופוס בוגר באמצעות מכונת קעקועים סיבובית.

Protocol

כל הנהלים המתוארים בבעלי חיים אושרו על ידי הוועדה המוסדית לטיפול ושימוש בבעלי חיים של דארטמות' קולג '.

1. הגדרת ציוד

הערה: זרימת עבודה עבור ההליך והגדרת ספסל לדוגמה כלולות (איור 1).

חבר את אקדח הקעקוע ואת דוושת הרגל לספק הכוח. מקם את דוושת הרגל מתחת למשטח העבודה.
הרכבת אקדח הקעקועים
1. בעזרת מפתח אלן או מברג משושה, שחררו את הברגים שבידית האחיזה (איור 2A, מוקף באדום).
2. הכנס את קצה הפלסטיק עד לידית האחיזה. הדקו את הבורג כדי להחזיק אותו במקומו.
3. הכניסו את צינור המתכת לחלק האחורי של ידית האחיזה (איור 2A). זה יותאם, אז להכניס אותו למחצית אורכו. הדקו את הבורג כדי להחזיק אותו במקומו.
4. הכניסו מחט קעקוע דרך החלק האחורי של ידית האחיזה כך שהיא תשב בנוחות בקצה הפלסטיק שבקדמת ידית האחיזה (איור 2B).
5. החלק את גב המחט וצינור המתכת דרך מהדק הצינור. התאימו את צינור המתכת כך שהמחט תתאים בנוחות לקצה הפלסטיק (איור 2B). הדקו ידנית את מהדק הצינור עד שהצינור לא יוכל לזוז (איור 2C).
6. הסר את טבעת O השחורה וחבר את המחט לזרוע הרוטור; החליפו את טבעת ה-O כדי לאבטח את המחט למקומה (איור 2C).
הגדר את המתח על ספק הכוח כך שיש מספיק כוח כדי לחדור את העור אבל לא כל כך חזק כי קשה לשלוט. לאחר חיבור ספק הכוח לחשמל, לחץ על דוושת הרגל כדי לוודא שההתקן פועל. היזהר לא לכוון את המחט על עצמך או על אנשי צוות אחרים.
הערה: מכונת הקעקוע המשמשת בפרוטוקול זה פועלת בצורה הטובה ביותר בין 6.0 ל- 9.0 וולט, אך הדבר עשוי להשתנות בין מכונות קעקוע לספקי מתח ויש לקבוע זאת אמפירית.
מלאו את המכסה של צינור מיקרוצנטריפוגה בנפח 1.5 מ"ל או סיר דיו מפלסטיק שסופק בדיו קעקוע שחור עד כשלושת רבעי הפקק המלא.

2. הרדמה

הכינו את חומר ההרדמה במיכל גדול מספיק כדי להטביע נקבה בוגרת אחת של צפרדע X. laevis .
1. בעזרת מים בטוחים לצפרדעים (ללא כלור), מוסיפים טריקאין לריכוז הסופי של 1.5 גרם/ליטר וסודיום ביקרבונט לריכוז הסופי של 3.5 גרם/ליטר. מערבבים להתמוססות. ה- pH של פתרון זה הוא 7.15.
  אזהרה: טריקאין הוא חומר מגרה.
יש לטבול צפרדע אחת במיכל ההרדמה. ודאו שהצפרדע נשארת שקועה בתמיסת הטריקאין עד שהיא מורדמת (7-8 דקות).
1. כדי לבדוק אם הצפרדע מורדמת לחלוטין, הרימו אותה, החזיקו אותה הפוכה ולחצו אותה היטב על רגל אחת. אם הצפרדע אינה נרתעת או מגיבה, ניתן לקעקע אותה.
2. אם לצפרדעים לוקח באופן עקבי יותר מ-10 דקות להיות מורדמות, הכינו תמיסת טריקאין טריקאין טרייה עם סודיום ביקרבונט.
  הערה: צפרדעים לא צריכות לבלות יותר מ -30 דקות בתמיסת טריקאין¹⁵.

3. קעקוע

הערה: לפני קעקוע חיה חיה, זה יכול להיות שימושי להתאמן על חתיכת פרי עם קליפה מוצקה (כגון לימון או בננה).

הכינו מיכל התאוששות לצפרדעים לפני הקעקוע. ממלאים מיכל ב-10-15 ליטר מים טריים בטוחים לצפרדעים ומוסיפים אי קלקר. זה יספק משטח לצפרדע להתעורר מבלי לטבוע.
הערה: ניתן להכין אי קלקר באמצעות מכסה של מיכל קלקר קר המונח בתוך שקית רוכסן.
הניחו את הצפרדע המורדמת על גבה על מגבת נייר יבשה או נייר ספסל (איור 3A). השתמשו במגבות נייר לא מולבנות (חומות) לכל עבודה המערבת צפרדעים.
בעזרת מגבון יבש ללא מוך, נגבו את המים והריר מחזה הצפרדע.
מצאו את עצם החזה במרכז החזה של הצפרדע בעזרת אצבעות, ובעזרת היד הלא דומיננטית החזיקו את העור מתוח.
סימון הצפרדע
1. החזיקו את אקדח הקעקועים שהורכב במאונך ביחס למשטח העבודה וטבלו את המחט בדיו (איור 3B).
2. שמירה על אקדח הקעקועים המורכב אנכי, לחץ על קצה המחט על עור הצפרדע לפני לחיצה על דוושת הרגל. ציירו קווים על עור הצפרדע תוך הפעלת לחץ אחיד.
  הערה: דימום קל או אדמומיות הם נורמליים, כמו גם החלקת עור קלה.
3. אם המחט נתפסת על עור הצפרדע, נקו עודפי דיו או עור מהמחט בעזרת מגבון. עודף דיו הוא נורמלי במהלך קעקוע.
4. אם החזה של הצפרדע מכוסה ביותר מדי דיו מכדי לראות בבירור את האזור המסומן (איור 3C), יש לנקות את עודפי הדיו בעזרת מים בטוחים לצפרדעים ומגבון (איור 3C). לאחר מכן, פתילו לחות עם מגבון יבש והמשיכו לסמן בדיו.
  הערה: ניתן להכין בקבוק לחיץ של מים בטוחים לצפרדעים לפני הקעקוע.
5. המשיכו להשתמש בדיו באותו אזור עד שיישארו מספרים כהים וקריאים לאחר מחיקת עודפי דיו (איור 3D). במקום לצייר את כל הסימון או המספר בקו אחד, בצעו שוב ושוב קווים קטנים יותר, במיוחד בעקומות.

4. התאוששות

הרטיבו מגבת נייר במים בטוחים לצפרדעים והניחו אותה שטוחה על גבי אי הקלקר (איור 4A).
החזרת צפרדעים לטנקים עומדים
1. הניחו את בטן הצפרדע על המגבת הפונה למים (איור 4B). מקפלים חצי ממגבת הנייר על החצי האחורי של הצפרדע ובעזרת ידיים קפוצות מרטיבים את החלק העליון של הצפרדע. ברגע שצפרדע יוצאת מההרדמה (כשעה לאחר הקעקוע), היא תיכנס למים באופן עצמאי ותשחה כרגיל.
2. להחזיר צפרדעים לדיור לטווח ארוך לאחר 24 שעות, לאחר הקעקוע נרפא לחלוטין.

5. ניקיון ותחזוקת ציוד

שימוש חוזר ואוטוקלאבינג של מחטי קעקוע
1. יש לשטוף מחטים ב-100% איזופרופנול ומים שעברו דה-יוניזציה כדי לשחרר את הדיו ולקרצף את שאריות הדיו שלא התמוססו.
2. לאחר הקרצוף, הניחו את המחטים בתוך מארז מתכת או עטפו אותן ברדיד אלומיניום ואוטוקלאבה למשך 30 דקות במחזור יבש.
אם יש דיו על חתיכות של מכונת הקעקוע או ציוד אחר, לנגב אותו עם 100% אתנול ומגבת נייר.
בתמיסת ההרדמה ריכוז הטריקאין הסופי הוא כ-0.5%. יש להשליך זאת בהתאם להנחיות מוסדיות לטיפול בפסולת מסוכנת.
אחסון ותחזוקה של ציוד
1. במידת האפשר, אחסנו את מכונת הקעקועים בחדר יבש. עודף לחות יפגע ברכיבים החשמליים ויפחית את תוחלת החיים של המכונה.
2. כדי לשמור על תקינות מכונת הקעקועים, בדקו את המסב על הרוטור (איור 2C) כדי לוודא שהוא לא השתחרר מתנודות²². ניתן להדק זאת באמצעות מפתח אלן או מברג משושה.
3. בערך פעם בחודש, לשמן את המסב על זרוע הרוטור באמצעות שומן סיכה סמיך²².
4. בחלק ממכונות הקעקוע, זרוע הרוטור יכולה להיתקע ולא תרטוט. כדי לתקן זאת, סובבו את זרוע הרוטור או דחסו את הקפיץ כך שהמחט תהיה במצב מונמך (איור 2C).

תוצאות

לקעקועים באיכות גבוהה יהיו משיכות כהות וקריאות על חזה הצפרדע, וניתן להבדיל ביניהם בבירור ממרחק של כמה מטרים (איור 5A). באופן כללי, מספרים וסימונים גדולים יותר טובים יותר לקריאות, אך ניתן להקטין שמות ומספרים ארוכים יותר כדי להתאים בנוחות לחזה הצפרדע. קשה יותר לשפוט אורך חיים ?...

Discussion

קעקוע בני אדם הוא צורת אמנות בת אלפי שנים, וכל עוד בני האדם קעקעו את עצמם, הם גם קעקעו או מיתגו בעלי חיים²³ . הציוד והטכניקות לסימון בעלי חיים, בעיקר יונקים, מבוססים היטב, מתועדים היטב ונגישים באופן נרחב. בעוד שסימון בעלי חיים נועד במקור להבדיל בין הרתעת בעלי חיים וגניבות

Disclosures

המחברים מצהירים כי אין אינטרסים מתחרים.

Acknowledgements

אנו מודים למרכז לרפואה השוואתית ומחקר של דארטמות' קולג' על מתן גידול יומי לבעלי החיים המשמשים בפרוטוקול זה. אנו מודים גם ללאה יעקב ולאדוויטה בוס על עזרתן בבדיקת הפרוטוקול ובצילום בעלי חיים. לבסוף, אנו מודים למעבדה של אן מילר על ההכשרה בפרקטיקה של קעקוע. עבודה זו נתמכה על ידי מענק R00 GM147826 של NIH לג'.ל.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
3 needle round liners	Worldwide Tattoo Supply	1203RLB	Packaged sterile
5 Needle Round Disposable ULTRA	Worldwide Tattoo Supply	HTIPRS5-U	Packaged sterile
5 needle round liners	Worldwide Tattoo Supply	1205RLB	Packaged sterile
7 needle round liners	Worldwide Tattoo Supply	1207RLB	Packaged sterile
Clip Cord	Worldwide Tattoo Supply	N/A
Foot pedal	Worldwide Tattoo Supply	N/A
Inkpots	Worldwide Tattoo Supply	N/A
Kimwipes, delicate task wipes	Fisher Scientific	06-666A
RCA Connection	Worldwide Tattoo Supply	N/A
Scream Ink Pitch Black, 1oz	Worldwide Tattoo Supply	SI101
Sodium bicarbonate (NaHCO3)	Sigma-Aldrich	S5761
Stainless steel grips	Worldwide Tattoo Supply	N/A
Stealth 2.0 Rotary Tattoo Machine	Worldwide Tattoo Supply	N/A
Stealth 2.0 Rotary Tattoo Machine Box Set	Worldwide Tattoo Supply	STEALTH2-SET
Styrofoam island	N/A	N/A	This is the lid of a styrofoam cold shipping container
Tricaine (ethyl 3-aminobenzonate methanesulfate)	Sigma-Aldrich	E10521	CAUTION: IRRITANT
Unbleached paper towels	Grainger	2U229	Paper towels MUST be unbleached, bleach is toxic to amphibians
Voltage Supply	Worldwide Tattoo Supply	N/A
Wash bottle (with frog-safe water)	Fisher Scientific	FB0340923T	Frog safe water is dechlorinated, pH 7.0-8.5, conductivity 1200-1800 uS
X. laevis adult female	Xenopus1	N/A
Zip-top plastic bag	N/A	N/A	This bag should be large enough to hold the styrofoam island

References

Hubrecht, R. C., Carter, E. The 3Rs and humane experimental technique: Implementing change. Animals (Basel). 9 (10), 754 (2019).
Elkan, E. R. The Xenopus pregnancy test. British Med J. 2, 1253-1256 (1938).
Vize, P. D., Zorn, A. M. Xenopus genomic data and browser resources. Dev Biol. 426 (2), 194-199 (2017).
Sive, H. . Xenopus: A Laboratory Manual. , (2023).
Borodinsky, L. N. Xenopus laevis as a model organism for the study of spinal cord formation, development, function and regeneration. Front Neural Circuits. 11, 90 (2017).
Hoppler, S., Conlon, F. L. Xenopus: Experimental access to cardiovascular development, regeneration discovery, and cardiovascular heart-defect modeling. Cold Spring Harb Perspect Biol. 12 (6), a037200 (2020).
Fisher, M., et al. Xenbase: key features and resources of the Xenopus model organism knowledgebase. Genetics. 224 (1), 018 (2023).
Slater, P. G., Hayrapetian, L., Lowery, L. A. Xenopus laevis as a model system to study cytoskeletal dynamics during axon pathfinding. Genesis. 55 (1-2), 22994 (2017).
Bermudez, J. G., Chen, H., Einstein, L. C., Good, M. C. Probing the biology of cell boundary conditions through confinement of Xenopus cell-free cytoplasmic extracts. Genesis. 55 (1-2), 23013 (2017).
Stooke-Vaughan, G. A., Davidson, L. A., Woolner, S. Xenopus as a model for studies in mechanical stress and cell division. Genesis. 55 (1-2), 23004 (2017).
Blackburn, A. T. M., Miller, R. K. Modeling congenital kidney diseases in Xenopus laevis. Dis Model Mech. 12 (4), 038604 (2019).
Tandon, P., Conlon, F., Furlow, J. D., Horb, M. E. Expanding the genetic toolkit in Xenopus: Approaches and opportunities for human disease modeling. Dev Biol. 426 (2), 325-335 (2017).
Wheeler, G. N., Brändli, A. W. Simple vertebrate models for chemical genetics and drug discovery screens: Lessons from zebrafish and Xenopus. Dev Dyn. 236 (6), 1287-1308 (2009).
Carron, M., et al. Evolutionary origin of Hox13-dependent skin appendages in amphibians. Nat Commun. 15 (1), 2328 (2024).
Schultz, T. W., Dawson, D. A. Housing and husbandry of Xenopus for oocyte production. Lab Animal. 32 (2), 34-39 (2003).
Cadillac, J. . Animal identification systems used for mice. , (2006).
Donnelly, M. A., Guyer, C., Juterbock, J. E., Alford, R. A. Techniques for marking amphibians. Meas Monitor Biol Div: Std Meth Amphibians. , 277-284 (1994).
Hutchens, S. J., Deperno, C. S., Matthews, C. E., Pollock, K. H., Woodward, D. K. Visible implant fluorescent marker: A reliable marking alternative for snakes. Herpetol Rev. 39 (3), 301-303 (2008).
Hoogstraten-Miller, S., Dunham, D. Practical identification methods for African clawed frogs (Xenopus laevis). Lab Animal. 26 (7), 36-38 (1997).
Loopstra, J. A., Zwart, P., Verhoeff-de Fremery, R., Vervoordeldonk, F. J. M. Marking of African clawed toads (Xenopus laevis). Improvement of a skin autograft technique. New Dev Biosci: Their Implicat Lab Animal Sci. , 311-316 (1988).
Rodel, M. Xenopus tropicalis. AmphibiaWeb. , (2001).
Worldwide Tattoo Supply. Stealth 2 Rotary Tattoo Machine Intro & Maintenance. Worldwide Tattoo Supply. , (2015).
Khan, S. U., Mufti, O. The hot history and cold future of brands. J Manager Sci. 1 (1), 75-84 (2007).
Catlett, T. All About Lip Tattoo: what to Expect, Cost, Risks, Touch-ups & More. Healthline. , (2019).

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Explore More Articles

208

This article has been published

Video Coming Soon

Keep me updated:

Method Article