Xenopus laevis'i Döner Dövme Makinesi ile Dövme Yöntemleri

Özet

Burada, yetişkin Xenopus laevis'i (Afrika pençeli kurbağası) döner bir dövme makinesi ile dövme yöntemlerini açıklıyoruz. Doğru dövme, birkaç ay süren ve hayvanları araştırma ve kayıt tutma amaçları için kolayca ayırt edilebilir hale getiren koyu, kolay okunabilir rakamlarla sonuçlanır.

Özet

Hayvan modelleri, biyomedikal araştırmaların kapsamını genişleterek gelişimsel, moleküler ve hücresel biyoloji anlayışımızı geliştirir ve araştırmacıların insan hastalıklarını modellemesine olanak tanır. Bireysel hayvanları kaydetmek ve izlemek, araştırmacıların çalışma için gereken hayvan sayısını azaltmasına ve hayvan refahını iyileştirmek için uygulamaları iyileştirmesine olanak tanır. Memelileri işaretlemek ve izlemek için kulak delme ve kulak küpeleri de dahil olmak üzere iyi belgelenmiş birkaç yöntem mevcuttur. Bununla birlikte, sucul amfibi türlerini işaretleme yöntemleri sınırlıdır, mevcut kaynaklar modası geçmiş, etkisiz veya aşırı derecede maliyetlidir. Bu el yazmasında, Xenopus laevis'i döner bir dövme makinesiyle işaretlemek için yöntemleri ve en iyi uygulamaları özetliyoruz. Doğru dövme, yüksek kaliteli dövmelerle sonuçlanır, bireyleri araştırmacılar için kolayca ayırt edilebilir hale getirir ve hayvanların sağlığı için minimum risk oluşturur. Ayrıca, hızla solan ve hayvanlara gereksiz yere zarar veren dövmelere neden olabilecek düşük kaliteli dövmelerin nedenlerini de vurguluyoruz. Bu yaklaşım, araştırmacıların ve veteriner hekimlerin amfibileri işaretlemelerine, biyolojik kopyaları ve transgenik çizgileri izlemelerine ve hayvan sağlığının doğru kayıtlarını tutmalarına olanak tanır.

Giriş

Hayvan modelleri, insan sağlığı ile ilgili soruları araştırmak için yararlı araçlardır. Uygulamada, hayvan modellerini kullanan biyomedikal araştırmalar, sağlıklı bir hayvan kolonisinin dikkatli bir şekilde düzenlenmesini ve sürdürülmesini gerektirir. Etik hayvan muamelesi ve yetiştiriciliği için en iyi uygulamalar, deney için gereken hayvan sayısını azaltmayı ve hayvan refahını sağlamak için uygulamaları iyileştirmeyi amaçlamaktadır¹. Pençeli kurbağa cinsi, Xenopus laevis (X. laevis; Afrika pençeli kurbağası) ve Xenopus tropicalis (X. tropicalis; Batı pençeli kurbağa), X. laevis'in Güney Afrikalı doktorlar tarafından ilk gebelik testlerini yapmak için kullanıldığı 1930'lardan beri biyomedikal araştırmalarda kullanılmaktadır². Modern hamilelik testleri artık kurbağa gerektirmese de, Xenopus araştırmasının rolü devam ediyor. Biyomedikal araştırmalar için Xenopus kullanmanın avantajları arasında iyi açıklamalı genomları³, büyük yumurta kavramalarının yıl boyunca indüklenebilir yumurtlaması⁴ ve in vitro fertilizasyona uygun harici olarak bırakılan yumurtalar yer alır. Bu özellikler onları omurgalı embriyolojisi ve gelişimi ^5,6,7, temel moleküler ve hücresel biyoloji 7,8,9,10 ve insan hastalıklarının modellenmesi ^7,11,12,13 için yararlı bir varlık haline getirir.

Bireysel Xenopus hayvanlarını izlemek için güvenilir yöntemler, biyolojik kopyaları kaydetmek ve araştırmada titizliği ve tekrarlanabilirliği geliştirmek için gereklidir. Xenopus sıklıkla gruplar halinde barındırıldığından, hayvan işaretlemesi araştırmacıların bireysel hayvanları kolayca izlemesine olanak tanır⁴. Hayvanların doğru bir kaydını tutmak, zamandan ve kaynaklardan tasarruf sağlayabilir ve hayvanların sağlığını takip etme yeteneğini geliştirebilir. Örneğin, hayvanların bireysel olarak tanımlanması, transgenik Xenopus hatları oluşturmak için organizasyon iş akışlarını iyileştirebilir, çünkü bu, hayvanların organizasyonunu ve bireysel olarak tanımlanmasını gerektiren¹⁴ dizileme ile doğrulanan belirli genotiplere sahip birden fazla kurbağa nesli gerektirir. Bu, özellikle bu mutasyonlar kolayca ayırt edilebilir yetişkin fenotiplerinden yoksun olduğunda geçerlidir. Benzer şekilde, temel hücresel ve gelişimsel biyolojiyi incelemek için Xenopus oositlerinin ve embriyolarının kullanılması, bireysel hayvanların izlenmesinden fayda sağlar. Yumurtlamayı indükledikten sonra, hiper yumurtlama sendromu gibi sağlık komplikasyonlarını önlemek için hayvanların en az 3 ay dinlenmesi gerekir¹⁵. Bireysel tanımlama yöntemleri, hayvanların çok sık yumurtlamaya teşvik edilmemesini sağlar.

Hayvanların işaretlenmesi ve izlenmesi, laboratuvar personelinin hayvanların sağlık sorunlarını izlemesine de olanak tanır. Aynı genotipteki hayvanların hastalanması, transgen ile ilişkili aşırı akrabalı yetiştirme veya beklenmeyen sağlık sorunlarını gösterebilir. Benzer şekilde, son yumurtlamadan sonra hastalanan hayvanlar, reaktifler, malzemeler veya tekniklerle ilgili sorunları gösterebilir. Hayvanları ve sağlıklarını izlemek, laboratuvar personelinin ve veteriner hekimlerin, endişeler yeniden ortaya çıktığında takip etmelerini ve gelecekteki hastalıkları önlemek için önleyici tedbirler almalarını sağlar. Memelilerde çok sayıda tanımlama yöntemi vardır. Fareler için kalıcı yöntemler arasında kulak delme, kulak küpeleri, dövme ve deri altı mikroçipler bulunur¹⁶. Bunlar, bir koloni veya kafes içindeki hayvanları net ve güvenilir bir şekilde ayırt edebilir ve laboratuvar personeli tarafından kolayca uygulanabilir. Kulak delme gibi yöntemler minimal invazivdir, yalnızca bir parça özel ekipman gerektirir ve çoğu yaştaki hayvanlar için işe yarar. Bu sistemler fareler için basit ve kullanışlı olsa da, kurbağalarda kullanımları benzersiz bir dizi zorluk sunar. Kurbağalar ve diğer amfibiler bir kulak kepçesinden (dış kulak yapısı) yoksundur. Bazı araştırmacılar hayvanın çenesine, ayak parmağına veya arka bacağına etiketler yapıştırmıştır^17,18. Bu yaklaşım çeşitli sorunlara yol açtı: çene etiketleri tahrişe neden oldu ve ajite kurbağalar ön ayaklarıyla etiketleri çıkarmaya çalıştı¹⁷. Ayak etiketleri, ayak parmakları arasındaki dokumayı delerek hareketi bozdu ve kaybolma riskini taşıdı. Bu nedenle, amfibiler tanımlama için kendi yöntemlerine ihtiyaç duyarlar. Tarihsel olarak, amfibileri işaretlemek için ayak parmağı kırpma da kullanılmıştır^17,19. Ayak parmağı keskin bir makasla kırpılır ve hayvan, ön ayaklardaki ve arka ayaklardaki ayak parmaklarının uzunluğu veya ayak parmağının geriye doğru uzadığı açı (semenderlerde) ile tanımlanabilir. Bununla birlikte, bu yöntem, ayak parmağının kırpılmasının hayvanın hareketini bozabileceğine dair etik kaygıyı ortaya çıkarmaktadır¹⁷. Ek olarak, bu kanamaya neden olabilir ve enfeksiyon riski oluşturabilir. Kurulan bir diğer işaretleme sistemi, kurbağanın bir kısmından derinin alındığı ve cerrahi olarak başka bir kısmına tutturulduğu deri otogreftleridir. Örneğin, bir kurbağanın sırtını veya omzunu göğsünden²⁰ açık renkli bir deri grefti kullanarak işaretlemek için bir yöntem tarif edilmiştir. Deri greftleri ayrıca sınırlamalar ve risklerle birlikte gelir: prosedür invazivdir ve potansiyel olarak ölümcül bir rahatsızlık olan Aeromonas hydrophila enfeksiyonu veya kırmızı bacak riskini ortaya çıkarır; otogreftin tamamen iyileşmesi 6 haftaya kadar sürer; Ve açıklanan yöntemlerle, bir otogreft²⁰ koymak için sınırlı yerler nedeniyle sadece 6 kurbağa bir arada barındırılabilir.

Daha az invaziv markalama yaklaşımları arasında cam boncuklar ve transponder yongaları^{bulunur 17,19}. Cam boncuk yönteminde, cam boncuklar küçük bir dikişe geçirilir ve kurbağanın derisine dikilir. Bu, en az 60 farklı renk kombinasyonu ile deri otogreftlerinden daha fazla değişkenlik sağlar. Bununla birlikte, dikişin dışarı çıkma ve boncukların kaybolmasına neden olma riski vardır. Alternatif olarak, kurbağanın dorsal lenf kesesinde deri altına bir mikroçip transponder implante edilebilir. Bu, en kalıcı işaretleme yöntemi olarak kabul edilir ve potansiyel olarak sonsuz sayıda hayvanın ayrı ayrı tanımlanmasını ve kataloglanmasını sağlar. Bununla birlikte, bu aynı zamanda en pahalı yöntemdir, çünkü bireysel mikroçipler pahalıdır ve büyük bir koloninin işaretlenmesi maliyetli olacaktır. Mikroçipler ayrıca^19'u okumak için özel bir tarayıcı gerektirir. Xenopus tanımlaması için yaygın bir yaklaşım, hayvanların doğal renklendirmesine ve desenlerine atıfta bulunmaktır. Bu, özellikle yetişkinlik boyunca kalan farklı desenlere sahip olan X. laevis gibi kurbağalar için iyi çalışır. Bununla birlikte, bu desenler zamanla stresle değişebilir ve kurbağalar şeffaf ve renkli kaplar arasında hareket ettirildiğinde renklenme farklı görünebilir¹⁵. Ek olarak, bu tanımlama yöntemi, X. laevis'e kıyasla daha az belirgin işaretleme desenlerine sahip olan X. tropicalis veya renk işaretlemesi olmayan albino hayvanlar için daha az kullanışlıdır²¹. Farklı işaretlere sahip türler için bile, laboratuvar personeli işaretlerin yerleşimini ve boyutunu farklı şekilde yorumlayabilir ve bu da tanımlamada hatalara neden olabilir. Bu nedenle, hayvanları fotoğraflamak, ek bir tanımlama yöntemiyle birlikte en güvenilir olanıdır. Bu nedenle, Xenopus hayvanlarını kolayca ayırt edilebilir, kalıcı ve minimal invaziv bir teknik kullanarak işaretlemeye ve tanımlamaya çalışıyoruz.

Amfibilere dövme yapma yöntemlerini açıklayan sınırlı sayıda yayınlanmış kaynak vardır. Dövme, ısı markaları, gümüş nitrat markaları ve donma markaları dahil olmak üzere diğer markalama teknikleriyle birlikte tanımlanmıştır¹⁷. Aynı kaynakta, 27G hipodermik iğne ile rakamlar çizilerek dövme yapıldı ve işlemin, bir rakam veya başka bir işaret şeklinde bir tel kullanan diğer markalama tekniklerinin aksine, enfeksiyona neden olmadığı not edildi. Başka bir kaynakta, kurbağaları işaretlemek için bir elektrikli dövme makinesi (titreşimli bir iğne olarak tanımlanır) kullanıldı, ancak teknik hakkında çok az ayrıntı verildi ^17,19. Yazarlar, kurbağanın koruyucu balçık tabakasını rahatsız ederek bu prosedürün kırmızı bacak riskini artırdığı konusunda uyarıyorlar. Hem tamamen noninvaziv (fotoğraflar gibi) hem de kalıcı (mikroçipler gibi) bir işaretleme veya tanımlama yöntemi olmasa da, dövme etkili bir uzlaşma sağlar. Dövme, deri otogreftleri gibi diğer tekniklere kıyasla nispeten basittir. Ek avantajlar arasında daha küçük bir öğrenme eğrisi ve nispeten ucuz ekipman bulunur. Sucul amfibileri dövmek, araştırmacıları korkutabilecek ve başarılı hayvan işaretlemesini bozabilecek bazı zorluklarla birlikte gelir. Bu makale, araştırmacılara yetişkin Xenopus'u döner bir dövme makinesiyle dövme yapmak için iyi belgelenmiş yöntemler sağlamayı amaçlamaktadır.

Protokol

Açıklanan tüm hayvan prosedürleri, Dartmouth College'ın Kurumsal Hayvan Bakımı ve Kullanımı Komitesi tarafından onaylanmıştır.

1. Ekipman kurulumu

NOT: Prosedür için bir iş akışı ve örnek bir tezgah kurulumu dahildir (Şekil 1).

1. Dövme tabancasını ve ayak pedalını güç kaynağına bağlayın. Ayak pedalını çalışma yüzeyinin altına yerleştirin.
2. Dövme tabancasının montajı
   1. Bir Alyan anahtarı veya altıgen tornavida kullanarak tutamaktaki vidaları gevşetin (Şekil 2A, kırmızı daire içine alınmış).
   2. Plastik ucu tutamağın içine sonuna kadar sokun. Yerinde tutmak için vidayı sıkın.
   3. Metal boruyu tutamağın arkasına yerleştirin (Şekil 2A). Bu ayarlanacaktır, bu nedenle uzunluğunun yarısına kadar yerleştirin. Yerinde tutmak için vidayı sıkın.
   4. Tutamağın ön tarafındaki plastik uca rahatça oturması için tutamağın arkasından bir dövme iğnesi sokun (Şekil 2B).
   5. İğnenin ve metal borunun arkasını tüp kelepçesinden kaydırın. Metal boruyu, iğne plastik uca rahatça oturacak şekilde ayarlayın (Şekil 2B). Boru cl'yi elle sıkınamp tüp hareket edemeyecek duruma gelene kadar (Şekil 2C).
   6. Siyah O-ringi çıkarın ve iğneyi rotor koluna asın; iğneyi yerine sabitlemek için O-ringi değiştirin (Şekil 2C).
3. Güç kaynağındaki voltajı, cildi delmek için yeterli güç olacak, ancak kontrol edilmesi zor olacak kadar güçlü olmayacak şekilde ayarlayın. Güç kaynağı prize takılıp bağlandıktan sonra, makinenin çalıştığından emin olmak için ayak pedalına basın. İğneyi kendinize veya diğer personele doğrultmamaya dikkat edin.
   NOT: Bu protokolde kullanılan dövme makinesi en iyi 6.0 ile 9.0 V arasında çalışır, ancak bu, dövme makineleri ve voltaj kaynakları arasında değişebilir ve ampirik olarak belirlenmelidir.
4. 1.5 mL'lik bir mikrosantrifüj tüpünün kapağını veya sağlanan plastik bir mürekkep kabını siyah dövme mürekkebi ile yaklaşık dörtte üçü kadar doldurun.

2. Anestezi

1. Anesteziyi, bir yetişkin dişi X. laevis kurbağasını batıracak kadar büyük bir tankta hazırlayın.
   1. Kurbağa için güvenli (klorsuz) su kullanarak, 1,5 g / L'lik son konsantrasyona trikserin ve 3,5 g / L'lik son konsantrasyona sodyum bikarbonat ekleyin. Çözünmesi için karıştırın. Bu çözeltinin pH'ı 7.15'tir.
      DİKKAT: Trikain tahriş edicidir.
2. Bir kurbağayı anestezi tankına batırın. Kurbağanın anestezi uygulanana kadar (7-8 dakika) tricaine solüsyonuna batırılmış halde kaldığından emin olun.
   1. Kurbağanın tam olarak uyuşturulup uyuşturulmadığını kontrol etmek için onu kaldırın, baş aşağı tutun ve tek ayağını sıkıca sıkın. Kurbağa ürkmezse veya tepki vermezse, dövme yapılabilir.
   2. Kurbağaların anestezi alması sürekli olarak 10 dakikadan fazla sürerse, sodyum bikarbonat ile tamponlanmış taze trikain çözeltisi hazırlayın.
      NOT: Kurbağalar tricaine solüsyonu^15'te 30 dakikadan fazla zaman geçirmemelidir.

3. Dövme

NOT: Canlı bir hayvana dövme yaptırmadan önce, sert bir kabuğu olan bir meyve parçası (limon veya muz gibi) üzerinde pratik yapmak faydalı olabilir.

1. Dövme yapmadan önce kurbağalar için bir kurtarma tankı hazırlayın. Bir depoyu 10-15 L taze kurbağa için güvenli su ile doldurun ve bir Strafor adası ekleyin. Bu, kurbağanın boğulmadan uyanması için bir yüzey sağlayacaktır.
   NOT: Fermuarlı bir torba içine yerleştirilmiş bir strafor soğuk nakliye konteynerinin kapağı kullanılarak bir strafor adası yapılabilir.
2. Anestezi uygulanmış kurbağayı kuru bir kağıt havlu veya tezgah kağıdı üzerine sırt üstü koyun (Şekil 3A). Kurbağalarla ilgili tüm işler için ağartılmamış (kahverengi) kağıt havlu kullanın.
3. Kuru, tüy bırakmayan bir mendil kullanarak kurbağanın göğsündeki suyu ve mukusu silin.
4. Kurbağanın göğsünün ortasındaki sternumu parmaklarınızla bulun ve baskın olmayan elinizi kullanarak cildi gergin tutun.
5. Kurbağayı işaretlemek
   1. Monte edilmiş dövme tabancasını çalışma yüzeyine göre dikey olarak tutun ve iğneyi mürekkebe batırın (Şekil 3B).
   2. Monte edilmiş dövme tabancasını dikey tutarak, ayak pedalına basmadan önce iğnenin ucunu kurbağanın derisine bastırın. Eşit basınç uygularken kurbağanın derisine çizgiler çizin.
      NOT: Bazı küçük kanama veya kızarıklıklar, küçük cilt dökülmesi gibi normaldir.
   3. İğne kurbağanın derisine takılıyorsa, iğnedeki fazla mürekkebi veya cildi bir mendille temizleyin. Dövme sırasında fazla mürekkep olması normaldir.
   4. Kurbağanın göğsü, işaretlenen alanı net bir şekilde göremeyecek kadar fazla mürekkeple kaplıysa (Şekil 3C), fazla mürekkebi kurbağa için güvenli su ve bir mendille temizleyin (Şekil 3C'). Ardından kuru bir mendille nemi çekin ve mürekkeplemeye devam edin.
      NOT: Dövme yapmadan önce bir şişe kurbağa için güvenli su hazırlanabilir.
   5. Fazla mürekkebi sildikten sonra koyu, okunaklı sayılar kalana kadar aynı alanı mürekkeplemeye devam edin (Şekil 3D). Tüm işareti veya sayıyı tek bir vuruşta çizmek yerine, özellikle eğriler için art arda daha küçük vuruşlar yapın.

4. Kurtarma

1. Bir kağıt havluyu kurbağa için güvenli suyla ıslatın ve strafor adanın üzerine düz bir şekilde yerleştirin (Şekil 4A).
2. Kurbağaların ayakta duran tanklara geri döndürülmesi
   1. Kurbağayı suya bakacak şekilde havlunun üzerine göbeği yatırın (Şekil 4B). Kağıt havlunun yarısını kurbağanın arka yarısının üzerine katlayın ve ellerinizi kaplayarak kurbağanın üstünü ıslatın. Bir kurbağa anesteziden çıktığında (dövmeden yaklaşık 1 saat sonra), bağımsız olarak suya girecek ve normal şekilde yüzecektir.
   2. Dövme tamamen iyileştikten sonra kurbağaları 24 saat sonra uzun süreli konutlara geri koyun.

5. Temizlik ve ekipman bakımı

1. Dövme iğnelerinin yeniden kullanılması ve otoklavlanması
   1. Mürekkebi gevşetmek için iğneleri %100 izopropanol ve deiyonize suda durulayın ve çözünmemiş kalan mürekkebi ovalayın.
   2. Fırçaladıktan sonra, iğneleri metal bir otoklav kutusuna yerleştirin veya alüminyum folyo ile sarın ve kuru bir döngüde 30 dakika boyunca otoklavla sarın.
2. Dövme makinesinin veya diğer ekipmanın parçalarında mürekkep varsa,% 100 etanol ve bir kağıt havluyla silin.
3. Anestezik çözelti, yaklaşık% 0.5'lik bir nihai trikin konsantrasyonuna sahiptir. Bunu kurumsal tehlikeli atık yönetimi yönergelerine göre atın.
4. Ekipman depolama ve bakımı
   1. Mümkünse, dövme makinesini kuru bir odada saklayın. Aşırı nem, elektrikli bileşenlere zarar verir ve makinenin ömrünü kısaltır.
   2. Dövme makinesini iyi çalışır durumda tutmak için, titreşimlerden²² gevşemediğinden emin olmak için rotor üzerindeki yatağı (Şekil 2C) kontrol edin. Bu, bir Alyan anahtarı veya altıgen tornavida ile sıkılabilir.
   3. Ayda yaklaşık bir kez, rotor kolundaki yatağı kalın bir yağlama gresi²² kullanarak yağlayın.
   4. Bazı dövme makinelerinde rotor kolu sıkışabilir ve titremez. Bunu düzeltmek için rotor kolunu çevirin veya yayı iğne alçaltılmış konumda olacak şekilde sıkıştırın (Şekil 2C).

Sonuçlar

Yüksek kaliteli dövmeler, kurbağanın göğsünde koyu, okunaklı vuruşlara sahip olacak ve birkaç metre uzaklıktan net bir şekilde ayırt edilebilecektir (Şekil 5A). Genel olarak, daha büyük sayılar ve işaretler okunabilirlik için daha iyidir, ancak daha uzun adlar ve sayılar kurbağanın göğsüne rahatça sığacak şekilde küçültülebilir. Dövmenin uzun ömürlülüğünü değerlendirmek daha zordur, ancak yüksek kaliteli kurbağa dövmeleri en az 3-6 ay boyunca kara...

Tartışmalar

İnsanları dövmek binlerce yıl öncesine dayanan bir sanattır ve insanlar kendilerini dövme yaptıkları sürece hayvanları da dövme yapmışlardır veya markalamışlardır²³. Hayvanları, özellikle memelileri işaretlemek için ekipman ve teknikler iyi kurulmuş, iyi belgelenmiş ve geniş çapta erişilebilirdir. Hayvanları işaretlemek başlangıçta hayvancılık ve hırsızlık caydırıcılarını ayırt etmek için²³ olsa da, biyomedikal araştırmalardaki ...

Malzemeler

Name	Company	Catalog Number	Comments
3 needle round liners	Worldwide Tattoo Supply	1203RLB	Packaged sterile
5 Needle Round Disposable ULTRA	Worldwide Tattoo Supply	HTIPRS5-U	Packaged sterile
5 needle round liners	Worldwide Tattoo Supply	1205RLB	Packaged sterile
7 needle round liners	Worldwide Tattoo Supply	1207RLB	Packaged sterile
Clip Cord	Worldwide Tattoo Supply	N/A
Foot pedal	Worldwide Tattoo Supply	N/A
Inkpots	Worldwide Tattoo Supply	N/A
Kimwipes, delicate task wipes	Fisher Scientific	06-666A
RCA Connection	Worldwide Tattoo Supply	N/A
Scream Ink Pitch Black, 1oz	Worldwide Tattoo Supply	SI101
Sodium bicarbonate (NaHCO3)	Sigma-Aldrich	S5761
Stainless steel grips	Worldwide Tattoo Supply	N/A
Stealth 2.0 Rotary Tattoo Machine	Worldwide Tattoo Supply	N/A
Stealth 2.0 Rotary Tattoo Machine Box Set	Worldwide Tattoo Supply	STEALTH2-SET
Styrofoam island	N/A	N/A	This is the lid of a styrofoam cold shipping container
Tricaine (ethyl 3-aminobenzonate methanesulfate)	Sigma-Aldrich	E10521	CAUTION: IRRITANT
Unbleached paper towels	Grainger	2U229	Paper towels MUST be unbleached, bleach is toxic to amphibians
Voltage Supply	Worldwide Tattoo Supply	N/A
Wash bottle (with frog-safe water)	Fisher Scientific	FB0340923T	Frog safe water is dechlorinated, pH 7.0-8.5, conductivity 1200-1800 uS
X. laevis adult female	Xenopus1	N/A
Zip-top plastic bag	N/A	N/A	This bag should be large enough to hold the styrofoam island