Métodos para tatuar Xenopus laevis com uma máquina de tatuagem rotativa

Resumo

Aqui, descrevemos métodos para tatuar Xenopus laevis adulto (sapo africano com garras) com uma máquina de tatuagem rotativa. A tatuagem adequada resulta em numerais escuros e facilmente legíveis que duram vários meses e tornam os animais facilmente distinguíveis para fins de pesquisa e manutenção de registros.

Resumo

Os modelos animais expandem o escopo da pesquisa biomédica, aprofundando nossa compreensão da biologia do desenvolvimento, molecular e celular e permitindo que os pesquisadores modelem doenças humanas. Registrar e rastrear animais individuais permite que os pesquisadores reduzam o número de animais necessários para o estudo e refinem as práticas para melhorar o bem-estar animal. Existem vários métodos bem documentados para marcar e rastrear mamíferos, incluindo socos e marcas de orelha. No entanto, os métodos de marcação de espécies de anfíbios aquáticos são limitados, sendo os recursos existentes desatualizados, ineficazes ou proibitivamente dispendiosos. Neste manuscrito, descrevemos métodos e melhores práticas para marcar Xenopus laevis com uma máquina de tatuagem rotativa. A tatuagem adequada resulta em tatuagens de alta qualidade, tornando os indivíduos facilmente distinguíveis para os pesquisadores e representando um risco mínimo para a saúde dos animais. Também destacamos as causas de tatuagens de baixa qualidade, que podem resultar em tatuagens que desbotam rapidamente e causam danos desnecessários aos animais. Essa abordagem permite que pesquisadores e veterinários marquem anfíbios, permitindo que eles rastreiem réplicas biológicas e linhagens transgênicas e mantenham registros precisos da saúde animal.

Introdução

Os modelos animais são ferramentas úteis para investigar questões relativas à saúde humana. Na prática, a pesquisa biomédica usando modelos animais requer organização e manutenção cuidadosas de uma colônia animal saudável. As melhores práticas para o manejo e criação éticos de animais visam reduzir o número de animais necessários para experimentação e refinar as práticas para garantir o bem-estar animal¹. O gênero de rãs com garras, incluindo Xenopus laevis (X. laevis; Sapo africano com garras) e Xenopus tropicalis (X. tropicalis; Sapo com garras ocidentais), têm sido usados em pesquisas biomédicas desde a dé....

Protocolo

Todos os procedimentos em animais descritos foram aprovados pelo Comitê Institucional de Cuidados e Uso de Animais do Dartmouth College.

1. Configuração do equipamento

NOTA: Um fluxo de trabalho para o procedimento e um exemplo de configuração de bancada estão incluídos (Figura 1).

1. Conecte a pistola de tatuagem e o pedal à fonte de alimentação. Posicione o pedal embaixo da superfície de trabalho.
2. Montando a pistola de tatuagem
   1. Usando uma chave Allen ou chave de fenda sextavada, solte os parafusos na empunhadura (Figura ....

Discussão

Tatuar humanos é uma forma de arte que remonta a milhares de anos e, desde que os humanos se tatuam, eles também tatuam ou marcam animais²³. O equipamento e as técnicas para marcar animais, particularmente mamíferos, estão bem estabelecidos, bem documentados e amplamente acessíveis. Embora a marcação de animais fosse originalmente para distinguir o gado e os impedimentos de roubo²³, seu papel na pesquisa biomédica tornou-se igualmente importante.

Materiais

Name	Company	Catalog Number	Comments
3 needle round liners	Worldwide Tattoo Supply	1203RLB	Packaged sterile
5 Needle Round Disposable ULTRA	Worldwide Tattoo Supply	HTIPRS5-U	Packaged sterile
5 needle round liners	Worldwide Tattoo Supply	1205RLB	Packaged sterile
7 needle round liners	Worldwide Tattoo Supply	1207RLB	Packaged sterile
Clip Cord	Worldwide Tattoo Supply	N/A
Foot pedal	Worldwide Tattoo Supply	N/A
Inkpots	Worldwide Tattoo Supply	N/A
Kimwipes, delicate task wipes	Fisher Scientific	06-666A
RCA Connection	Worldwide Tattoo Supply	N/A
Scream Ink Pitch Black, 1oz	Worldwide Tattoo Supply	SI101
Sodium bicarbonate (NaHCO3)	Sigma-Aldrich	S5761
Stainless steel grips	Worldwide Tattoo Supply	N/A
Stealth 2.0 Rotary Tattoo Machine	Worldwide Tattoo Supply	N/A
Stealth 2.0 Rotary Tattoo Machine Box Set	Worldwide Tattoo Supply	STEALTH2-SET
Styrofoam island	N/A	N/A	This is the lid of a styrofoam cold shipping container
Tricaine (ethyl 3-aminobenzonate methanesulfate)	Sigma-Aldrich	E10521	CAUTION: IRRITANT
Unbleached paper towels	Grainger	2U229	Paper towels MUST be unbleached, bleach is toxic to amphibians
Voltage Supply	Worldwide Tattoo Supply	N/A
Wash bottle (with frog-safe water)	Fisher Scientific	FB0340923T	Frog safe water is dechlorinated, pH 7.0-8.5, conductivity 1200-1800 uS
X. laevis adult female	Xenopus1	N/A
Zip-top plastic bag	N/A	N/A	This bag should be large enough to hold the styrofoam island