יישום מוצלח של טכניקות אלה יאפשר הערכה קינטית של ניסויים פרמקולוגיים או מעבר של מזהמים קסנוביוטיים באמצעות שליה שלם מורפולוגית. טכניקת חליטת שליה מכרסמים מאפשרת תפוקה גבוהה יותר של מחקרים תרופתיים או טוקסיקולוגיים, תרכובות מרובות ניתן להעריך באמצעות הרקמה של סכר יחיד. הפגנת הטכניקה תהיה ג'נין ד'Errico, סטודנט בכיר לתואר שני מהמעבדה שלי.
לפני תחילת ההליך, בעדינות למלא את כל התאים, מחטים, micropipettes זכוכית, צינורות ומאגרים עם פתרון מלח פיזיולוגי מחומם או PSS, בזהירות להסיר את כל בועות האוויר עם פיפטה העברה הטה בסדר לפי הצורך. סובבו את כל שלושת העצורים למיקום כבוי כדי לאבטח את הנוזל בתוך הפיפסטים. מניחים עניבה אחת על כל אחד משני micropipettes זכוכית מוכן ל Cannulation הרחם ועל שני מחטי קצה קהה המיועדים cannulation הטבור.
ואז לאבטח את הקשרים כדי למנוע אובדן במהלך תנועות התא. לאחר אישור חוסר תגובה לצביטת בוהן ביום הריון הרדמה 20 נקבה חולדה בהריון, להרים קרן הרחם אחת מהבטן ולהפיץ את הצופר החוצה דרך ארוכה, חיצונית לחיה. השתמש תפרים משי קלוע לקשור את עורק הרחם בקצוות הנרתיק והשחלות של הקרן, כולל השחלה בתוך התפר עם קרן הרחם.
באמצעות מספריים כירורגיים, לעשות חתכים בצד הפרוקסימלי של עניבת השחלה ואת הצד הדיסטלי של עניבת הנרתיק. מעבירים את קרן הרחם לתוך צלחת ניתוח מרופדת גומי סיליקון ומלא PSS קר. עם צד השחלה משמאל ואת הצד הנרתיקי בצד ימין, בעדינות לדחוף סיכה לנתח דרך קרן הרחם לתוך גומי סיליקון כדי לייצב את הרחם.
בחר יחידת שליה עוברית אימהית מרכזית בצופר. באמצעות מלקחים ומספריים עדין, להסיר את קרום מי המפירה מפני השטח העובריים של שליה דואג כדי למנוע את חבל הטבור. לפענח וללחבל את חבל הטבור כדי להפריד את הגור העוברי.
לאחר זיהוי העורק והווריד הטבורי, יש להפריד בעדינות וללקט את כלי הטבור. לאחר מכן חותכים את וריד הטבור מעט קצר יותר מאשר עורק הטבור כדי להקל על הזיהוי. ולזיט את עורק הרחם והווריד עם מספריים כירורגיים.
שמירה על האוריינטציה הנכונה של זרימת הדם האנטומית עורק הרחם, למקם את יחידת שליה לתוך תא כלי מבודד שונה מלא PSS מחומצן חם תחת מיקרוסקופ ניתוח. באמצעות זוג אחד של מלקחיים עדין בכל יד, cannulate הקצוות הפרוקסימליים והדיסטליים של עורק הרחם על מיקרופיגטות זכוכית. אבטחו היטב את העורק עם תפר הניילון הסטרילי שהונח קודם לכן.
לאכלס ולאבטח את עורק הטבור על המחט קהה 23 מד. ואז cannulate ולאבטח את וריד הטבור על המחט קהה 25 מד ולמילוי אחורי כל stopcocks וצינורות כדי למנוע בועות אוויר. זכור לבדוק את כל stopcocks, cannulas, צינורות עבור בועות אוויר, כמו בולוס אוויר במערכת יוביל מצוקה הסלולר לחסל את זרימת זרם הדלפק בתוך שליה.
חבר את כל הצינורות לפי הדמות. מניחים סירות שקילה קטנות תחת קנונילציה דיסטלית של עורק הרחם האימהי ותחת קנונילציה מחט של וריד הטבור העוברי כדי לתפוס את השתקה שתצוץ במהלך ההליך. הכן את לוחית האיסוף עבור הקולך לניתוח מאוחר יותר.
פתח את stopcock כדי לאפשר זרימת נוזלים דרך צינורות לכיוון שליה ולהדליק את המשאבה peristaltic, בקרת לחץ צג לחץ. לאט לאט להגדיל את הלחץ ל 80 מילימטרים כספית לקרוא על צג הלחץ. לאט לאט לפתוח את stopcock כדי לאפשר זרימת נוזלים אל עורק הרחם.
מילוי מחדש של כל המאגרים כדי לשמור על נפח הנוזלים לאורך כל הניסוי. לאחר שהרקמות יש שיווי משקל במשך 30 דקות כדי לאפשר את כלי הדם להסתגל לזרימת הנוזלים החדשה, להקים את זלוף הבסיס על ידי איסוף קולים במשך 10 דקות משתי סירות לשקול. למדוד את נפח הנוזל העולה דרך עורק הרחם ווריד הטבור.
בסוף תקופת האיסוף הבסיסית, לנהל את הטיפול הניסיוני לתוך עורק הרחם. לאחר מכן לאסוף דגימות מן העורק הרחם דיסטלי ואת וריד הטבור העוברי כל 10 דקות במשך סך של 180 דקות לאחר עירוי. למדוד את מזהמים בתוך דגימות הנוזלים.
זלול עם צבע כחול אוונס כדי לבדוק את המערכת כדי לדמיין את תפקוד מחסום הנוזלים והליות המתאים למניעת העברה מזהמת לתא העובר מגלה כי הצבע הגיע וחדור את רקמת שליה בתוך מערכת זו. לאחר חקירה מדוקדקת יותר, ברור כי הצבע הכחול של אוונס לא נכנס לווריד הטבור העוברי, הצפוי, שכן הצבע הכחול של אוונס קשור לאלבומין. בניסוי מייצג זה, זוהתה העברת נוזלים מופחתת לתא העובר תוך 10 דקות של עירוי פוליסטירן.
העברת הפוליסטירן לתא העובר הגיעה לשיאה ב-20 דקות ונמשכה 90 דקות. הדבר החשוב ביותר לזכור במהלך cannulation הוא ללכת לאט. הפיפסים והרקמות עדינים מאוד יכולים בקלות להישבר או להיקרע.
על ידי שקילה של היעילות, מתודולוגיה זו יכולה לשמש כדי לחקור פיזיולוגיה שליה, כמו גם טרנסלוקציה חומר.
