وسيتيح التطبيق الناجح لهذه التقنيات التقييم الحركي للتجارب الدوائية أو مرور الملوثات الزينبيوتية عبر المشيمة السليمة من الناحية الشكلية. تسمح تقنية تسريب المشيمة القوارض بزيادة إنتاجية الدراسات الدوائية أو السمية ، حيث يمكن تقييم مركبات متعددة باستخدام أنسجة سد واحد. إظهار هذه التقنية ستكون جانين D'Errico، طالبة الدراسات العليا العليا من مختبري.
قبل البدء في الإجراء، وملء بلطف جميع الغرف والإبر، micropipettes الزجاج، أنابيب والخزانات مع محلول الملح الفسيولوجية الدافئة أو PSS، وإزالة بعناية أي فقاعات الهواء مع ماصة نقل يميل غرامة حسب الضرورة. بدوره كل من stopcocks الطريق الثلاثي إلى موقف قبالة لتأمين السائل داخل الماصات. ضع ربطة عنق واحدة على كل من الوميكروبيبيبتات الزجاجية المعدة لتكبيل الرحم وعلى إبر التلميح الفظ المخصصة للتكبيل السري.
ثم تأمين العلاقات لمنع الخسارة أثناء تحركات الغرفة. بعد التأكد من عدم وجود استجابة لقرصة إصبع قدم في يوم الحمل المذبل 20 أنثى فأر حامل ، ارفع قرنًا واحدًا من البطن وانتشر القرن على الطرق الطويلة ، خارجيًا للحيوان. استخدم خياطة حريرية مضفرة لربط شريان الرحم عند طرفي المهبل والمبيض في القرن، بما في ذلك المبيض داخل الغرزة مع قرن الرحم.
باستخدام مقص جراحي، قم بعمل شقوق على الجانب القريب من ربطة عنق المبيض والجانب القاصي من ربطة العنق المهبلية. نقل قرن الرحم في طبق تشريح اصطف مع المطاط السيليكون ومليئة PSS الباردة. مع الجانب المبيض إلى اليسار والجانب المهبلي إلى اليمين، ودفع بلطف دبوس تشريح من خلال قرن الرحم في المطاط السيليكون لتحقيق الاستقرار في الرحم.
حدد وحدة الجنين المشيمة الأمومية المركزية إلى القرن. باستخدام ملقط ومقص ناعم، قم بإزالة الغشاء الأمنيوسي من سطح الجنين للمشيمة مع الحرص على تجنب الحبل السري. كشف وligate الحبل السري لفصل الجرو الجنين.
بعد تحديد الشريان السري والوريد ، يفصل بلطف وligate الأوعية السرية. ثم قطع الوريد السري أقصر قليلا من الشريان السري لسهولة تحديد الهوية. و ligate الشريان الرحمي والوريد مع مقص جراحي.
الحفاظ على التوجه الصحيح لتدفق الدم الشريان الرحمي التشريحية، ووضع وحدة المشيمة في غرفة السفينة المعزولة المعدلة مليئة PSS المؤكسج الدافئ تحت مجهر تشريح. باستخدام زوج واحد من ملقط غرامة في كل يد، cannulate نهايات قريبة وهاتية من الشريان الرحمي على micropipettes الزجاج. تأمين الشريان بإحكام مع خياطة النايلون المعقمة الموضوعة سابقا.
Cannulate وتأمين الشريان السري على إبرة 23 قياس حادة. ثم cannulate وتأمين الوريد السري على إبرة 25 قياس حادة والردم كل من stopcocks وأنابيب لمنع فقاعات الهواء. تذكر للتحقق من كل من stopcocks، cannulas، وأنابيب لفقاعات الهواء، كما بولينغ الهواء في النظام سوف يؤدي إلى الضائقة الخلوية والقضاء على تدفق التيار العداد داخل المشيمة.
ربط جميع الأنابيب وفقا للرقم. ضع قوارب وزن صغيرة تحت التكبيل القعري لرِيان الرحم الأم وتحت تحبيب الإبرة للوريد السري الجنيني لالتقاط النفايات السائلة التي ستظهر أثناء الإجراء. إعداد لوحة تجميع للنفايات السائلة لتحليلها لاحقاً.
فتح stopcock للسماح تدفق السوائل من خلال أنابيب نحو المشيمة وتشغيل مضخة ال peristaltic، ومراقبة الضغط ومراقبة الضغط. زيادة الضغط ببطء إلى 80 ملليمتر الزئبق قراءة على مراقبة الضغط. ببطء فتح stopcock للسماح تدفق السوائل إلى الشريان الرحمي.
إعادة ملء جميع الخزانات للحفاظ على حجم السوائل طوال التجربة. بعد أن تكون الأنسجة قد توازنت لمدة 30 دقيقة للسماح للأوعية للتكيف مع تدفق السوائل الجديدة ، قم بإنشاء ضخ خط الأساس عن طريق جمع النفايات السائلة لمدة 10 دقائق من كل من قوارب الوزن. قياس حجم السائل الذي يظهر من خلال الشريان الرحمي والوريد السري.
في نهاية فترة جمع خط الأساس، وإدارة العلاج التجريبي في الشريان الرحمي. ثم جمع عينات من شريان الرحم القاصي والوريد السري الجنين السائل كل 10 دقائق لما مجموعه 180 دقيقة بعد التسريب. قياس الملوثات داخل عينات السوائل.
الضخ مع ايفانز صبغة زرقاء لاختبار النظام وتصور السائل المناسب وظيفة حاجز المشيمة لمنع نقل الملوثات إلى حجرة الجنين يكشف عن أن الصبغة وصلت و pered الأنسجة المشيمة داخل هذا النظام. عند التحقيق عن كثب، فمن الواضح أن صبغة الأزرق إيفانز لم تدخل الوريد السري الجنين، وهو أمر متوقع، كما لا بد للصبغة الزرقاء إيفانز إلى الألبومين. في هذه التجربة التمثيلية، تم تحديد نقل سائل مخفض إلى حجرة الجنين في غضون 10 دقائق من ضخ البوليسترين.
ثم بلغ نقل البوليسترين إلى حجرة الجنين ذروته في 20 دقيقة واستمر لمدة 90 دقيقة. أهم شيء أن نتذكر خلال التكبيب هو أن تذهب ببطء. الماصات والأنسجة حساسة جدا ويمكن بسهولة أن تصبح مكسورة أو ممزقة.
من خلال وزن effluence ، يمكن استخدام هذه المنهجية للتحقيق في فسيولوجيا المشيمة وكذلك نقل المواد.
