Bu tekniklerin başarılı bir şekilde uygulanması farmakolojik çalışmaların kinetik değerlendirilmesi veya morfolojik olarak bozulmamış plasenta yoluyla ksenobiyotik kirleticilerin geçişi için izin verecektir. Kemirgen plasenta perfüzyon tekniği farmakolojik veya toksikolojik çalışmaların daha yüksek bir iş akışı sağlar, birden fazla bileşikler tek bir baraj dokusu kullanılarak değerlendirilebilir gibi. Bu tekniği gösteren jeanine D'Errico, benim laboratuvarımdan yüksek lisans öğrencisi olacak.
İşleme başlamadan önce, tüm odaları, iğneleri, cam mikropipetleri, boruları ve rezervuarları ısıtılmış fizyolojik tuz çözeltisi veya PSS ile hafifçe doldurun ve gerekli olduğu gibi ince uçlu transfer pipetiyle hava kabarcıklarını dikkatlice temizleyin. Pipetlerin içindeki sıvıyı sabitlemek için üç yönlü stopcock'ların tümünü kapalı konuma getirin. Rahim kanülasyonu için hazırlanmış iki cam mikropipetin her birine ve göbek kanültüsü için belirlenen iki künt uç iğneye tek bir kravat yerleştirin.
Sonra oda hareketleri sırasında kaybı önlemek için bağları güvenli. Anestezik gebelik gününde ayak tutamının eksikliğini doğruladıktan sonra 20 kadın hamile sıçan, karından bir rahim boynuzu kaldırın ve boynuzu hayvanın dışında uzun yollardan dışarı yaydı. Rahim boynuzu ile dikiş içinde yumurtalık da dahil olmak üzere boynuz vajinal ve yumurtalık uçlarında rahim arter bağlamak için örgülü ipek dikişkullanın.
Cerrahi makas kullanarak, yumurtalık kravat proksimal tarafında ve vajinal kravat distal tarafında kesiler yapmak. Rahim kornasını silikon kauçuk la kaplı ve soğuk PSS ile dolu bir kesme kabına aktarın. Soldaki yumurtalık tarafı ve sağda vajinal tarafı ile, rahim stabilize etmek için hafifçe rahim kauçuk içine rahim boynuzu ile bir kesme pimi itin.
Boynuz merkezi bir maternal plasenta fetal birim seçin. Ince forceps ve makas kullanarak, göbek kordonu önlemek için özen plasenta fetal yüzeyinden amniyotik membran kaldırın. Fetal yavruyu ayırmak için göbek kordonu çözve iniat.
Göbek arter ve ven tespit ettikten sonra, yavaşça ayrı ve göbek damarları ligate. Sonra kimlik kolaylığı için göbek arter daha kısa göbek damarı biraz kesti. Ve cerrahi makas ile rahim arter ve damar ligate.
Rahim arter anatomik kan akışının doğru yönünü koruyarak, bir diseksiyon mikroskop altında sıcak oksijenli PSS ile dolu modifiye izole damar odasına plasental birim yerleştirin. Her elde ince forseps bir çift kullanarak, cam mikropipetler üzerine rahim arterproksimal ve distal uçları kanül. Daha önce yerleştirilen steril naylon dikiş ile arteri sıkıca sabitler.
Kanülasyon ve 23 gauge künt iğne üzerine göbek arter güvenli. Daha sonra 25 gauge künt iğne üzerine göbek damarı kanül ve güvenli ve hava kabarcıkları önlemek için stopcocks ve tüpler tüm backfill. Sistemdeki bir hava bolus hücresel sıkıntıya yol açacak ve plasenta içinde sayaç akım akışını ortadan kaldırmak gibi, hava kabarcıkları için stopcocks, kanüller ve tüp tüm kontrol etmeyi unutmayın.
Tüm tüpleri rakama göre bağlayın. Anne uterin arter distal kanülasyon altında küçük tartmak tekneler yerleştirin ve işlem sırasında ortaya çıkacak atık yakalamak için fetal umbilical ven iğne kanülasyonu altında. Daha sonra analiz için atık için toplama plakası hazırlayın.
Plasentaya doğru borudan sıvı akışına izin vermek için stopcock'u açın ve peristaltik pompayı, basınç kontrolünü ve basınç monitörünü açın. Basıncı yavaşça 80 milimetreye yükseltin cıva basınç monitöründe okuyun. Yavaş yavaş rahim artersıvı akışını izin stopcock açın.
Deney boyunca sıvı hacmini korumak için tüm rezervuarları yeniden doldurun. Dokular vaskülatür yeni sıvı akışına uyum sağlamak için 30 dakika boyunca dengelendikten sonra, her iki tartma tekneleri 10 dakika boyunca atıkları toplayarak temel perfüzyon u kurun. Rahim arter ve göbek ven ile ortaya çıkan sıvı hacmini ölçün.
Temel toplama döneminin sonunda, rahim arter içine deneysel tedavi uygulayın. Daha sonra infüzyondan sonra toplam 180 dakika boyunca her 10 dakikada bir distal uterin arter ve fetal umbilikal ven atıktan örnekler toplayın. Sıvı numunelerindeki kirleticimaddeleri ölçün.
Sistemi test etmek ve fetal bölmeye kirletici transferi önlemek için uygun sıvı ve plasental bariyer fonksiyonunu görselleştirmek için Evans mavi boya ile perfüzyon boyanın bu sistem içindeki plasenta dokusuna ulaştığını ve perfüzyonunu ortaya koymaktadır. Daha yakından incelenmesi üzerine, Evans mavi boya albümin bağlı olduğu gibi, beklenen fetal göbek ven, girmedi Evans mavi boya olduğu açıktır. Bu temsili deneyde, polistiren infüzyonu 10 dakika içinde fetal bölmeye azaltılmış sıvı transferi tespit edilmiştir.
Polistiren infetal kompartmana transferi daha sonra 20 dakika doruğa ulaştı ve 90 dakika devam etti. Kanülasyon sırasında hatırlanması gereken en önemli şey yavaş gitmektir. Pipetler ve doku çok hassas ve kolayca kırık veya yırtık olabilir.
Bu metodoloji, effluence tartılarak plasental fizyolojinin yanı sıra malzeme translokasyonlarını araştırmak için de kullanılabilir.
