פרוטוקול זה לקביעת גודל הגזע והכדאיות העוברית משמש מעבדות רבות של C.elegans. ירידה בגודל הגבורה וביכולת הקיום העוברית יכולה להצביע על פגמים בתהליכים התפתחותיים חשובים כגון מיוזה, הפריה ואמבריוגנזה. טכניקה זו מספקת הוראות ברורות לחוקרי C.elegans מתחילים.
הוא פשוט יחסית להתקנה ולביצוע, ומהווה נקודת התחלה מצוינת בעבודה עם זנים מוטנטיים חדשים. האתגר הגדול ביותר בטכניקה זו הוא זיהוי עובר לעומת זיהוי עובר לא מופרי. חוקרים חדשים צריכים לתרגל את זיהוי העוברים, הביציות ושלבי הזחל השונים לפני תחילת ניסויים אלה.
כדי להתחיל, תייגו את גב הצלחת, העבירו הרמפרודיט בודד בשלב L4 אל הצלחת. ודא שלא מועברים עוברים או תולעים אחרות לצלחת. אפשרו לתולעים להתפתח למבוגרים ולהניח צאצאים עצמיים במשך 24 שעות בטמפרטורת הרבייה הסטנדרטית של 20 מעלות צלזיוס.
הבקיעו את הצלחת ביום השלישי. למחרת, תייגו סט של צלחות חדשות והעבירו את היום שבו תולעת בודדת אחת לצלחת החדשה. אפשרו לתולעים להטיל עוברים במשך 24 שעות בטמפרטורה של 20 מעלות צלזיוס.
הבקיעו את הצלחת ביום הרביעי. ביום השלישי, תייגו סט של צלחות חדשות והעבירו את היום השני של תולעים בודדות לצלחת החדשה. אפשרו לתולעים להניח צאצאים במשך 24 שעות ב-20 מעלות.
הבקיעו את הצלחת ביום החמישי. ציירו דוגמת רשת על מכסה של 35 מ"מ בעזרת טוש עדין. הניחו את המכסה המרושת מתחת ללוחית הבדיקה לצורך ספירה כדי לעקוב אחר תולעים שנספרו בעבר.
באמצעות מונה תאים דיפרנציאלי, ספרו את הזחלים החיים והעוברים שלא בקעו בתוך הריבוע הבודד. עבור תולעים על גבולות ריבוע לספור מבוסס על המיקום של ראש התולעת. ספרו תולעים עם ראשים שנוגעים בקצה העליון והשמאלי של הריבוע.
רשום את מספר הזחלים החיים והעוברים שלא בקעו במחברת מעבדה. ביום הרביעי, הניחו את היום השני על ידי ספירת הזחלים החיים והעוברים שלא בקעו ורשמו אותם במחברת מעבדה. ביום החמישי, הניקוד את היום השלישי על ידי ספירת הזחלים החיים והעוברים שלא בקעו, ורשום אותם במחברת מעבדה.
לאחר תיוג גב הצלחת, העבירו תולעת הרמפרודיט L4 בודדת לצלחת. ודא שלא מועברים עוברים או תולעים אחרות לצלחת. מעבירים תולעת זכרית L4 בודדת לצלחת המכילה הרמפרודיט L ארבע.
אפשרו לתולעים להזדווג ולהניח צאצאים במשך 24 שעות בטמפרטורה של 20 מעלות צלזיוס. הניקוד את הצלחת עבור זחלים חיים לעומת עוברים שלא בקעו ביום השלישי. למחרת, תייגו סט של צלחות חדשות והעבירו את ההרמפרודיט והזכר לצלחת החדשה.
ודא כי hermaphrodite הגיע לבגרות. אפשרו להרמפרודיטים להניח צאצאים במשך 24 שעות בטמפרטורה של 20 מעלות צלזיוס. הניקוד את הצלחת עבור זחלים חיים לעומת עוברים שלא בקעו ביום הרביעי.
ביום השלישי, תייגו סט של צלחות חדשות והעבירו את ההרמפרודיט והזכר לצלחת החדשה. אפשרו לתולעים להניח צאצאים במשך 24 שעות ב-20 מעלות. הניקוד את הצלחת עבור עוברים חיים לעומת עוברים שלא בקעו ביום החמישי.
באמצעות מונה תאים דיפרנציאלי, ספרו את הזחלים החיים והעוברים שלא בקעו מהיום הראשון ורשמו אותם במחברת מעבדה. ביום הרביעי, ספרו את הצאצאים החיים והעוברים שלא בקעו מהיום השני ורשמו אותם במחברת מעבדה. בדוק את היום צלחת אחת לזכרים.
אם התרחשה הזדווגות, היחס הגנטי הצפוי של הרמפרודיטים לזכרים הוא 50 עד 50. אם ביום צלחת אחת אין זכרים, לא התרחשה הזדווגות בין הזכר להרמפרודיט. השליכו את זוג ההזדווגות הזה ותיעדו את התצפית במחברת המעבדה.
ביום החמישי, ספרו את הזחלים החיים ואת העוברים שלא בקעו מהיום השלישי ורשמו אותם במחברת מעבדה. בדיקת הכדאיות העוברית עבור N2 הניבה אחוז כדאיות של 98.9%, בעוד שגם הוא-5 (e1490) וגם spo-11(ok79) הראו ירידה בכדאיות העוברית עם אחוזים של 74.9% ו-0.8% בהתאמה. גודל הברוד הממוצע של N2, him-5(e1490) ו-spo-11(ok79) נקבע כ-217, 105 ו-219 בהתאמה.
הכרת השלבים השונים של פיתוח C.elegans חשובה לנתונים מדויקים וניתנים לשחזור. מומלץ להכיר את התפתחות התולעים באמצעות תמונות ומיקרוסקופ מנתח. הליך זה הוא צעד ראשון נהדר כדי לקבוע אם גן מעורב בתהליך התפתחותי והוא יכול להיות ואחריו ניתוחים ציטולוגיים כדי לקבוע איזה תהליך משובש.
