Caratterizzazione dei modulatori dei recettori attivati dalla proteasi con un saggio di mobilizzazione del calcio utilizzando un lettore di piastre

Il nostro laboratorio sta lavorando per capire come la modulazione dei recettori attivati dalla proteasi possa inibire l'infiammazione. Abbiamo sviluppato una nuova classe di piccole molecole chiamate parmoduline che modulano l'attività di PAR1. L'obiettivo è quello di scoprire parmoduline con proprietà migliorate per un potenziale utilizzo come candidati farmaci, e anche di comprendere la loro modalità d'azione.

Negli studi preclinici con i nostri collaboratori, abbiamo stabilito che le parmoduline possono essere particolarmente promettenti per il trattamento di disturbi guidati da tromboinfiammazione, tra cui malattie renali, epatiche e cardiovascolari. La loro modalità d'azione può anche consentire lo sviluppo di composti con un profilo di sicurezza migliore rispetto ai precedenti candidati farmaci mirati a PAR1. Il recettore PAR1 è importante per l'attivazione delle piastrine, ma la sua segnalazione nelle cellule endoteliali è anche importante e rilevante in numerose patologie.

Pertanto, volevamo sviluppare un protocollo economico e conveniente per testare l'attività delle parmoduline e delle cellule endoteliali in coltura. Siamo qui per condividere un protocollo aggiornato che misura la mobilizzazione del calcio che utilizza un lettore di piastre standard e non richiede un gestore automatico di liquidi. È adatto per lo screening dei ligandi PAR1 nelle cellule endoteliali, ma in teoria può essere utilizzato per misurare l'attività di qualsiasi composto che influisce sulla mobilizzazione del calcio.