Puntura venosa succlavia come metodo alternativo di raccolta del campione di sangue nei ratti. Dopo l'anestesia generale, mettere i ratti in posizione supina e sterilizzare lo spazio infraclavicolare con il 75% di etanolo. Identificare la fossa sternale superiore prima della puntura.
Individuare il sito di puntura, caudale verso la regione esterna di un terzo della clavicola nello stesso lato. La direzione dell'ago era posizionata verso la fossa sternale superiore e doveva quasi essere parallela alla clavicola, appena posteriore ad essa. Dopo la raccolta del sangue, premere il sito di puntura per uno o due minuti, per interrompere il sanguinamento.
La raccolta del sangue con volume sufficiente è sempre necessaria negli esperimenti sugli animali. La raccolta del sangue dalla vena della coda dei ratti è popolare e meno stressante di alcuni metodi aggressivi come la raccolta del campione di plesso orbitale retrò. Tuttavia, questo metodo è limitato dal tasso di successo.
Qui, introduciamo il nostro metodo per la raccolta del sangue con il volume di sangue desiderato dalla vena succlavia. I nostri risultati mostrano che questo metodo è sicuro e pratico e potrebbe essere considerato nel caso in cui il prelievo di sangue dalla vena della coda non sia riuscito. Per iniziare, preparare nastro adesivo, agente epilante, 75% etanolo, tubo di raccolta del sangue, siringa millilitro a due punti cinque, rasoio per capelli, scala elettronica, eparina e soluzione salina fisiologica.
Ratti di casa in condizioni standard, con libero accesso al cibo e all'acqua potabile, tenuti in gabbie di 530 centimetri quadrati con biancheria da letto da barba in legno. Indurre l'anestesia generale in tutti gli animali attraverso l'iniezione intraperitoneale prima della puntura. Posizionare il topo in posizione supina, fissare gli arti posteriori in una posizione comoda e fissare gli arti superiori paralleli al corpo, proprio accanto al tronco.
Pulire entrambi i lati dello spazio infraclavicolare per rimuovere la pelliccia e qualsiasi sporco visibile. Pulire il collo e la pelle toracica con il 75% di etanolo e mantenere l'area pulita e asciutta con garza. Entrambi i lati della vena succlavia sono adatti per la puntura, e qui, scegliamo il lato destro per la puntura.
Identificare la posizione e la direzione della clavicola destra con il pollice sinistro dell'operatore e individuare delicatamente la fossa sternale superiore con l'indice. Risciacquare la siringa con soluzione di eparina da 10 unità per millilitro. Individuare il sito di puntura, puntare cinque millimetri caudale alla regione esterna di un terzo della clavicola destra.
Spostare delicatamente la siringa nella pelle del sito di puntura. Una volta che l'ago entra nella pelle infraclavicolare, applicare una pressione attiva attraverso la mano destra dell'operatore. La direzione dell'ago è posizionata verso la fossa sternale superiore e dovrebbe quasi parallela alla clavicola, appena posteriore ad essa.
Di solito, la vena succlavia potrebbe essere raggiunta inserendo l'ago per circa due millimetri in questa direzione. Una volta che l'ago entra nella vena, il sangue entrerà nella siringa sotto una pressione attiva. Quindi la pressione attiva deve essere mantenuta fino a quando non viene prelevato un volume adeguato di sangue.
Dopo la raccolta del sangue, rimuovere l'ago della puntura e premere il sito di puntura per uno o due minuti per interrompere il sanguinamento. Prestare attenzione: la pressione deve essere molto delicata per prevenire lo strozzamento. Trasferire il campione di sangue in un tubo del vuoto antico coagulato con EDTA e centrifugare a 1600G per 10 minuti per raccogliere il plasma.
Aspirare il supernato a ripulire il tubo e conservare a meno 18 gradi Celsius. Per confrontare il tasso di successo tra gli operatori qualificati e i principianti, 20 ratti SD sono stati divisi in due gruppi in modo casuale. I risultati mostrano che attraverso la vena socclavia destra, ci sono riusciti rispettivamente nove ratti del gruppo abile e otto ratti del gruppo dei principianti.
Quindi la raccolta del sangue dai restanti tre ratti è riuscita attraverso il lato sinistro. Il tasso di successo non ha avuto differenze significative tra questi due gruppi. Il corso del tempo era leggermente diverso in questi due gruppi.
Non si sono verificate gravi complicazioni, come pneumotorace, emopneumotorace ed emorragia durante o dopo l'operazione. Tutti gli animali sopravvissero dopo il prelievo di sangue. Per dimostrare le difficoltà di apprendimento della procedura di puntura, abbiamo ulteriormente confrontato il numero di prelievi tra i gruppi qualificati e principianti.
Come mostrato nella tabella due, il numero medio di ritiri in gruppo qualificato è leggermente inferiore a quello dei principianti, ma non vi è alcuna significatività statistica. In conclusione, i nostri risultati mostrano che la strategia di puntura della vena succlavia per la raccolta del sangue è sicura e fattibile nei ratti. Questo metodo è prezioso, specialmente nelle occasioni in cui è necessaria una grande quantità di sangue.
Questo metodo potrebbe essere un'alternativa ottimale se il campionamento del sangue convenzionale fallisce.
