Negli studi di farmacocinetica e tossicocinetica, abbiamo bisogno di raccogliere una certa quantità di sangue in momenti specifici nei ratti per rilevare l'esposizione al farmaco. Questo studio descrive un metodo semplice ed efficiente per raccogliere il sangue dalla vena succlavia nei ratti in questo protocollo. Questa tecnica consente un campionamento ripetuto, tempestivo e facilmente identificabile senza anestesia e ottiene sangue di alta qualità attraverso la raccolta ripetitiva di campioni.
Dovresti conoscere l'anatomia della vena succlavia, la contenzione dei ratti e la punta dell'ago. Il metodo è rischioso e richiede un professionista qualificato. Per iniziare, trova il punto più basso della fossa triangolare succlavia tra il collo e l'arto anteriore in un ratto.
Spostarsi di circa due o tre millimetri verso la testa e raggiungere il punto dell'ago nel sito di raccolta del sangue. Rimuovere i capelli usando un rasoio elettrico. Per mantenere la testa, il collo e il seno del ratto in posizione verticale, afferrare la pelle sulla parte posteriore del collo con una mano ed esporre il sito di iniezione.
Raddrizzare l'arto anteriore sul lato del sito di iniezione per mantenere il suo livello. Tenere la siringa parallela alla testa del ratto con l'altra mano e inclinare la siringa verso l'esterno da cinque a 10 gradi, in modo che la punta sia inclinata verso la direzione ventrale. Inserire l'ago completamente nella cavità anteriore.
Tirare indietro la siringa per mantenere la pressione negativa con il tubo. Spostare lentamente l'ago da profondo a poco profondo e risalire lo stesso percorso. Quando il sangue è entrato nell'ago della siringa, fissare la posizione dell'ago.
A seconda del peso e della salute dei ratti, monitorare la quantità massima di sangue da prelevare in conformità con gli standard stabiliti dal comitato per la cura e l'uso degli animali dell'istituzione. In assenza di altri requisiti, non rimuovere più del 20% del volume totale del sangue dell'animale entro 24 ore. Quando viene raccolto un campione di sangue sufficiente, ritirare immediatamente la siringa e prepararsi per il trattamento del sangue.
Pressurizzare il sito di iniezione del ratto per uno o due minuti per fermare l'emorragia. Poiché il sito di raccolta si trova nella parte inferiore del collo, pizzicare la pelle della vena succlavia per fermare l'emorragia premendo su di essa. Rimuovere l'ago dalla siringa e gettarlo nel contenitore degli strumenti affilati.
Trasferire lentamente il sangue dalla siringa a un tubo da 1,5 millilitri. Premere la siringa contro il muro per evitare la formazione di bolle. Chiudere il coperchio del tubo della microcentrifuga e sfiorarlo delicatamente.
Mescolare accuratamente il sangue con l'anticoagulante capovolgendolo almeno cinque volte. Entro 120 minuti dopo la raccolta del plasma, centrifugare l'intero campione di sangue a 2.000 RCF per 10-15 minuti a temperatura ambiente. Utilizzare una pistola per pipette per trasferire il plasma superiore in una provetta di microcentrifuga fresca.
Non toccare la testina della pipetta con il sangue intero inferiore. Smaltire o centrifugare nuovamente il plasma contaminato dai globuli rossi. I campioni di plasma accuratamente raccolti dalla vena succlavia erano di colore giallo pallido traslucido.
La raccolta di sangue impropria o la manipolazione hanno provocato l'emolisi. Durante il primo campionamento, il peso corporeo dell'animale maschio era compreso tra 268 e 297 grammi e circa 214-239 grammi per le femmine. Durante l'ultimo campionamento, il peso corporeo dell'animale maschio era compreso tra 376 e 462 grammi e circa 254-300 grammi per le femmine.
C'è stato un intervallo di 28 giorni tra la raccolta di sangue tossicocinetico. Il peso corporeo dell'animale aumentava costantemente ogni settimana e l'osservazione clinica era normale. Il preciso metodo di inserimento dell'ago e l'angolo possono garantire una raccolta del sangue regolare ed evitare rischi.
Questa operazione richiede una pratica ripetuta.
