Questo protocollo automatizzato consente la preparazione istopatologica dei tessuti murini con sistemi robotici abitualmente utilizzati per l'elaborazione e l'incorporamento di campioni umani, aumentando notevolmente la qualità dei campioni. I principali vantaggi di questa tecnica sono che riduce il numero di variabili metodologiche e migliora la standardizzazione delle fasi procedurali. A dimostrare la procedura, sarà Francesca Boggio.
Francesca Boggio è una patologa che lavora nel mio laboratorio. Inizia usando piccole pinzette per trasferire i campioni fissi di tessuto del colon murino dalla formalina tamponata neutra, su una piastra di lavoro di sessatura in una piastra di Petri. Utilizzare un bisturi sterile per tagliare i due punti in frammenti da 0,2 a 0,3 centimetri e utilizzare le pinzette per posizionare un segmento in ciascuna delle tre punte sporgenti di plastica non adiacenti di una cassetta orientata per incorporare la paraffina.
Spingere con cura i quattro bordi per chiudere la cassetta e inserire la griglia in un telaio di supporto in plastica. Quindi, etichettare il fotogramma di supporto per identificare il campione e trasferire la cassetta nella griglia. Un'ora prima dell'elaborazione, ruotare il processore automatico.
Quando lo strumento indica che la paraffina si è sciolta, inserire manualmente il cestello metallico nel processore automatizzato. Una volta inserite tutte le cassette, chiudere il cestello e aprire il coperchio della ritocco. Inserire il cestello nell'alloggiamento dedicato del processore e chiudere il coperchio della ritocco.
Utilizzare il touchscreen sul computer dello strumento per definire il protocollo di lavoro selezionando la sequenza di soluzioni, tempi e temperatura, da attuare secondo lo schema fornito nella tabella. Fare clic sull'icona del computer dedicato per assegnare il protocollo alla tordo contenente il carrello delle cassette e fare clic sul pulsante start. Quando lo strumento conferma la fine del protocollo con un'icona dedicata e un tono di allarme, aprire il coperchio della torsione e rimuovere il cestello dal processore.
Un'ora prima dell'incorporamento del tessuto, accendere l'embedder automatico e attendere che la paraffina sia completamente sciolta come indicato dal termometro del bagno di paraffina sullo strumento. Trasferire manualmente fino a 32 cassette elaborate dal cestello del processore al rack dell'incorporatore e aprire il coperchio principale dell'embedder. Utilizzare il touchscreen per segnalare al sistema robotico che viene inserito un rack e aprire il coperchio dell'alloggiamento dell'ingresso.
Inserire fino a quattro rack nell'alloggiamento di ingresso e chiudere il coperchio dell'alloggiamento dell'ingresso. Quindi, utilizzare il touchscreen per avviare la procedura di incorporamento come indicato nella tabella. Quando lo strumento conferma l'estremità del protocollo con l'icona dedicata, rimuovere il rack di uscita e chiudere il coperchio principale dell'embedder.
Quindi, trasferire i blocchi incorporati dal rack in una scatola di archiviazione. L'accorciamento del colon e l'espressione colon dei geni pro infiammatori sono parametri ampiamente utilizzati per segnare la presenza di solfato di sodio di dextran o infiammazione indotta da DSS. Anche l'infiltrazione di cellule infiammatorie nella lamina propria intestinale è notevolmente migliorata dal trattamento DSS.
La colorazione H&E di campioni non trattati elaborati dall'automazione come dimostrato, rivela meno cellule infiammatorie infiltrazioni, alterazioni epiteliali e cambiamenti nell'architettura delle mucose rispetto ai campioni di animali trattati con DSS. La qualità della preparazione e dell'incorporamento del tessuto murino eseguita dagli strumenti automatizzati può essere ulteriormente confermata dalla colorazione immunoistochimica per CD20 e Colorazione Tricromatica Mallory. In particolare, l'elaborazione automatizzata dei campioni consente costantemente la valutazione di una percentuale più elevata di parametri istologici rispetto ai campioni elaborati con il metodo manuale.
Fare attenzione a inserire correttamente il tessuto nella griglia per attendere che il processore automatizzato sia pronto e attendere che la paraffina sia completamente sciolta. Questo metodo può essere utilizzato per eseguire analisi istologiche di qualsiasi tessuto murino, con la qualitazione di campioni istologici umani che saranno utilizzati nei modelli murini dei patologi umani. Questa tecnica ha già avuto successo nello studio per lo studio dell'infiammazione infiammatoria dei tessuti e sarà utile per studiare modelli di cancro murino colorettale.
Poiché alcuni reagenti utilizzati in questo protocollo sono pericolosi, ricorda di indossare sempre guanti protettivi, occhiali e un camice da laboratorio quando esegui questa procedura.
