Tre metodi sono descritti in questo protocollo: raccolta del polline corbicolare usando trappole di polline, ordinamento del polline per colore e acetolisi. Questi metodi sono comunemente usati negli studi relativi agli impollinatori, come l'efficienza dell'impollinazione, le dinamiche di foraggiamento degli impollinatori e la qualità e la diversità della dieta. L'intrappolamento del polline è un modo semplice per raccogliere grandi quantità di polline dalle colonie di api.
Ordinare i pellet di polline per colore è un metodo economico per classificare il polline che richiede una bassa esperienza e l'acetolisi consente di identificare il taxon vegetale associato a ciascun colore del pellet. A dimostrare la procedura saranno Ellen Topitzhofer, assistente di ricerca di facoltà, ed Emily Carson, assistente di ricerca laureata del mio laboratorio. Per iniziare, determinare quando intrappolare il polline dalla posizione desiderata dell'apiario e selezionare le colonie di api ottimali per intrappolare il polline.
Valuta la forza della colonia contando le bottinatrici che ritornano all'ingresso della colonia per due minuti e quindi seleziona le colonie con il maggior numero totale di raccoglitrici di ritorno. Seleziona alveari con stoviglie in buone condizioni, preferibilmente senza ingressi extra e coperchi deformati. Usa colonie con meno ingressi alternativi, poiché le api bottinatrici che ritornano a tali colonie hanno maggiori probabilità di riorientarsi verso l'ingresso della trappola.
Seleziona gli ingressi dell'alveare rivolti a sud quando possibile. Se gli alveari sono pallettizzati, installare trappole di polline su ogni colonia rivolta nella stessa direzione su un determinato pallet per evitare la deriva dei raccoglitori negli ingressi degli alveari vicini. Se lo si desidera, valutare il nido di covata della colonia ispezionando i telai per la presenza di larve e selezionare colonie con quantità relativamente grandi di larve.
Quindi, installare trappole per pollini sulle colonie di api selezionate. Per le trappole frontali, attaccare la trappola davanti all'ingresso con graffette, viti e nastro adesivo, oppure collegare la trappola alle corde elastiche avvolte attorno all'alveare. Sigillare tutti gli altri possibili ingressi nella colonia con un materiale non adesivo e modellabile, come lattice o schiuma di poliuretano o un panno hardware numero otto per fori a coclea.
Utilizzare nastro adesivo per piccole crepe. Se si utilizzano trappole a montaggio frontale che si trovano su alveari a livello del suolo, posizionare una barriera come un tappetino di gomma tra il cestello di raccolta e l'erba per evitare danni da umidità dalla rugiada. Attivare il meccanismo di intrappolamento della trappola di polline 24 ore dopo l'installazione e prima che inizi il volo di foraggiamento del giorno.
Raccogliere il polline corbicolare particolare dal vassoio di raccolta e metterlo in sacchetti di plastica o provette da centrifuga, quindi conservarlo in un refrigeratore con ghiaccio. Usa lo scooper o un cucchiaio grande per raccogliere 10 grammi di polline come sottocampione rappresentativo. Rimuovere tutte le parti e i detriti delle api dal sottocampione, quindi ordinare ogni pellet di polline dal sottocampione di 10 grammi in un gruppo di colori utilizzando sia il colore del polline che la consistenza per differenziare tra i gruppi.
Per garantire almeno 0,25 grammi di ciascun gruppo di colori per le fasi a valle, posizionare eventuali pellet che non sono abbastanza abbondanti da formare un gruppo di colori di almeno 0,25 grammi in un gruppo miscellaneo. Assegna un nome a ogni singolo gruppo di colori utilizzando la Guida ai colori Pantone. Pesare 0,25 grammi di pellet di polline da ciascun gruppo di colori.
Indossare i DPI appropriati. Quindi, aggiungere lentamente 500 microlitri di acido acido glaciale a ciascuna provetta di microcentrifuga contenente 0,25 grammi di polline del gruppo di colori. Durante l'ispezione visiva del tubo, mescolare il polline con uno stuzzicadenti pulito per 10-15 secondi.
Centrifugare il campione per tre minuti a 1.100 volte G, quindi decantare il surnatante nel becher di scarico acido. Per preparare la miscela di acetolisi, aggiungere 10,8 millilitri di acido acido acido glaciale alla miscela di acetolisi etichettata con becher. Quindi, aggiungere lentamente 1.200 microlitri di acido solforico concentrato dalla soluzione madre.
Aggiungere lentamente 1.000 microlitri di miscela di acetolisi a ciascun tubo e mescolare con uno stuzzicadenti pulito per 10-15 secondi. Posizionare i campioni su un blocco termico preriscaldato a 80 gradi Celsius. Incubare i tubi per cinque minuti, mescolando accuratamente ogni tubo con uno stuzzicadenti pulito a metà dell'incubazione.
Dopo l'incubazione, aggiungere lentamente 500 microlitri di acido acetico glaciale a ciascun tubo e mescolare con uno stuzzicadenti pulito per 10-15 secondi. Centrifugare i campioni, quindi decantare il surnatante da ciascun tubo nel becher di scarico acido. Risciacquare ogni campione tre volte con acqua aggiungendo 1.000 microlitri di acqua distillata a ciascun tubo e mescolando con uno stuzzicadenti pulito.
Centrifugare i campioni e decantare il surnatante dalle provette nel becher di bicarbonato di sodio. Quindi, ripetere i risciacqui con acqua altre due volte. Aggiungere 1.000 microlitri di etanolo al 95% dal becher di etanolo a ciascun tubo e mescolare con uno stuzzicadenti pulito.
Quindi, centrifugare i campioni e decantare il surnatante dai tubi nel becher di scarico dell'etanolo. Mescolare la soluzione madre di safranina-O e aggiungere da 5 a 10 gocce a ciascun tubo. Mescolare con uno stuzzicadenti per 10-15 secondi e lasciare lo stuzzicadenti nel tubo.
Aggiungere 1.000 microlitri di etanolo al 95% dal becher di etanolo a ciascun tubo e mescolare. Dopo aver centrifugato i campioni, decantare il surnatante nel becher di scarico dell'etanolo. Aggiungere da 10 a 15 gocce di glicerina in ogni tubo e mescolare il contenuto per 10-15 secondi.
Lasciare i tubi aperti nella cappa aspirante per far evaporare l'etanolo per almeno due ore a temperatura ambiente. Vetrini per microscopio per etichette per l'identificazione del polline. Rimuovere una goccia di residui di polline da un tubo e posizionarla al centro del vetrino del microscopio etichettato, consentendo alla goccia di diffondersi leggermente.
Posizionare una linguetta di copertura pulita sopra la goccia sul vetrino e sigillare la sottoveste di copertura sulla diapositiva con smalto trasparente. Utilizzando i metodi descritti, è stato raccolto il polline corbicolare, ordinato per colore e sono state identificate le fonti vegetali di ciascun gruppo di colori del pellet per valutare la diversità del polline. Ogni campione di raccolta di polline aveva più gruppi di colori distinguibili.
In alcuni campioni, i gruppi di colore del polline contenevano da quattro a cinque pellet. Tuttavia, la maggior parte dei gruppi aveva significativamente di più e serviva come proprio gruppo di colori etichettati per l'acetelisi. Dopo l'acetolisi, la microscopia a luce a campo chiaro è stata utilizzata per identificare efficacemente ciascun gruppo di colori al suo rango tassonomico più basso possibile, confermando le caratteristiche morfologiche con quelle dei campioni voucher raccolti dall'area circostante ciascun sito di studio.
Il polline raccolto dalle sedi delle colture di mandorle aveva una diversità di polline relativamente inferiore rispetto al polline raccolto da altre colture, con una media di tre colori di pellet in 3,2 taxa di piante per sito Il polline selezionato può essere testato per i pesticidi per chiarire i prodotti agrochimici presenti sulle piante da foraggio delle api o analizzato per la composizione chimica per determinare il suo valore nutrizionale per le api. I risultati di questa ricerca hanno fornito preziose informazioni sulla diversità delle specie osservata nel polline raccolto dalle colonie, evidenziando la diversità sostanzialmente bassa del polline raccolto nei sistemi di coltivazione delle mandorle.
