Imaging in immunofluorescenza di trappole extracellulari di neutrofili in tessuti umani e murini

Tra la selezione degli anticorpi per l'imaging tissutale, il processo di fissazione rappresenta una sfida per il mascheramento dell'epitopo. Pertanto, è necessario un passaggio di recupero personalizzato per esporre questi antigeni per il legame degli anticorpi. Inoltre, l'autofluorescenza intrinseca ai tessuti può causare difficoltà fino a un'elevata colorazione di fondo.

Tuttavia, l'uso di approcci diversi nei protocolli in letteratura ostacola un confronto standardizzato tra le immagini. Il nostro studio mira a soddisfare la domanda di procedure standardizzate e ad assistere il ricercatore nel superare le sfide durante il processo di imaging. Abbiamo stabilito un protocollo di imaging versatile applicabile a diversi tessuti confrontando vari protocolli diversi.

Quindi il nostro lavoro fornisce suggerimenti per la guida e la risoluzione dei problemi, dall'uso degli anticorpi al montaggio del campione, evidenziando le potenziali insidie. I nostri risultati fanno progredire la ricerca introducendo un nuovo anticorpo primario per il citrullinato hisone tre e un agente riducente autofluorescente per ridurre al minimo la colorazione di fondo. Inoltre, per un imaging di successo, sottolineiamo l'attenta manipolazione dei campioni e l'importanza di mantenere una temperatura elevata costante per il recupero dell'antigene.