マウス子宮仙靭帯と骨盤底器官の分離と特性評価

要約

この記事では、女性の生殖組織の研究を拡大するために、マウスの子宮頸部、直腸、膀胱を含む子宮仙靭帯およびその他の骨盤底組織を解剖するための詳細なプロトコルを紹介します。

要約

骨盤臓器脱(POP)は、骨盤底の完全性、構造、および機械的サポートに影響を与える状態です。骨盤底の臓器は、筋肉、靭帯、骨盤筋膜など、さまざまな解剖学的構造によって支えられています。子宮仙靭帯(USL)は重要な耐荷重構造であり、USLの損傷によりPOPを発症するリスクが高くなります。本プロトコルでは、ラマン分光法を用いたUSL生化学的組成と機能に関する独自のデータの取得、および機械的挙動の評価とともに、マウスUSLと骨盤底器官の解剖について説明します。マウスは前臨床研究にとって非常に貴重なモデルですが、マウスUSLの解剖は困難で複雑なプロセスです。この手順は、USLを含むマウス骨盤底組織の解剖をガイドし、複数の評価と特性評価を可能にするアプローチを提示します。この研究は、基礎科学者やエンジニアによる骨盤底組織の解剖を支援し、USLおよび骨盤底の状態に関する研究や、マウスモデルを使用した女性の健康の前臨床試験へのアクセスを拡大することを目的としています。

概要

女性の約50%が骨盤臓器脱(POP)の影響を受けています^1,2。これらの女性の約11%は、成功率が低い外科的修復を受けるための基準を満たしています(~30%)^3,4。POPは、USLと骨盤底筋が適切なサポートを提供できないために、骨盤内臓器(すなわち、膀胱、子宮、子宮頸部、および直腸)のいずれかまたはすべてが自然な位置から降下することを特徴としています⁵。この状態は、素因^3,6に加えて、解剖学的機能障害および結合組織の破壊、ならびに神経筋損傷を伴う。POPは、年齢、体重、パリティ、分娩タイプ(すなわち、経腟分娩または帝王切開出産)などの複数の要因に関連しています。これらの要因は、すべての骨盤底組織の機械的完全性に影響を与えると考えられており、妊娠と同等性が^POP5,7,8の主な推進力であると考えられています。

プロトコル

すべての動物実験および手順は、コロラド大学ボルダー校の動物管理および使用委員会によって承認されたプロトコル#2705に従って実施されました。本研究では、6週齢の雌C57BL / 6Jマウスを使用しました。動物は商業的な供給源から入手した( 材料表を参照)。

1.動物の準備

1. 制度的に承認された方法に従って動物を安楽死させる。
   注:本研究では、米国獣医師会のガイドラインに沿ってCO 2吸入を使用しました(チャンバー容積の30%から70%の変位率 CO₂ /分)、続いて頸部脱臼、成功した安楽死を確実にするために。
   1. 可能であれば、マウスアレルゲンの拡散を最小限に抑えるためにフードの下で作業してください。マウスの動きと呼吸が止まったら、2分以上待って応答がないことを確認します。
      注意: マウスが妊娠中または産後の場合、子犬は個別に安楽死させる必要があります。子犬E15.5以上は、解剖中に斬首する必要があります。
2. 解剖パッド、11枚羽根メス、湾曲した細い鋭利なハサミ、2対の鉗子、湾曲した鉗子、5-0ポリグラクチン縫合糸、解剖顕微鏡、および6本のピンを使用して解剖セットアップを準備します(図1、 材料表

結果

野生型マウスの解剖の各ステップは、プロトコルに関連する関連ビデオおよび図に詳述されている。この研究では、6週齢の雌C57BL / 6Jマウスを使用しました(補足表1)。異なる酵素で処理されたUSLを含む3つのサンプルグループ、対照(無処理)、コラゲナーゼ処理群、およびコンドロイチナーゼ処理群を分析しました。USLの平滑筋、神経、リンパ管は、原線維性コラーゲンとグリコサ.......

ディスカッション

女性の生殖組織に対する構造的損傷の影響は十分に研究されておらず、POP研究のために簡単にアクセスできる動物モデルが必要です。マウスは、ヒトの生殖研究を模倣できる費用対効果の高いモデルです¹⁶。女性の生殖器系の研究への関心が高まっているため、これらの組織の研究を支援する方法が必要です。このニーズに対処するために、この研究では、構造的および機?.......

資料

Name	Company	Catalog Number	Comments
11 Blade	Fisher	3120030	Removable blade
1x PBS	Fisher	BP399-1	Diluted from 10x concentration
Chondroitinase ABC	Sigma	C3667-10UN	Enzyme
Collagenase Type I	Worthington Biochemical	LS004194	Enzyme
Confocal Microscope	Leica	STELLARIS 5	Upright configuration
Dissection Microscope	Leica	S9E	With camera
Dumont #5 Forceps	Fisher	NC9626652	Thin tip
Female C57BL/6J mice	Jackson Laboratory	strain #: 000664
FemtoTools Micromanipulator	FemtoTools	FT-RS1002	100 mN load cell
FST Curved Forceps	Fisher	NC9639443	Curved tip
FST Sharp 9 mm Scissors	Fisher	NC9639443	Dissection scissors
Ghost Dye 780	Tonbo	13-0865-T500	Free amine stain
Kimwipes	Fisher	06-666	Box of 50 wipes
OCT	Tissue Tek	4583	Used for tissue preservation
PDMS	Thermo Fisher	044764.AK	Follow manufacturer's instructions
Petri Dishes 35 mm	Fisher	FB0875711A	Used for dissected tissue
Polyglactin 5-0 Suture	Veter.Sut	VS385VL	With needle
Renishaw InVia Raman Microscope	Renishaw	PN192(EN)-02-A	With confocal objectives
Rocking Platform	VWR	10127-876	2 tier platform
Surgical Gloves	Fisher	52818	For dissection
Sytox	Thermo Fisher	S11381	Nuclear stain
T-pins	Fisher	S99385	For dissection
Transfer Pipets	Fisher	13-711-7M	For dissection
Underpads	Fisher	22037950	To cover dissection pad