쥐 자궁천골 인대와 골반저 장기의 분리 및 특성화

요약

이 기사는 여성 생식 조직에 대한 연구를 확장하기 위해 생쥐의 자궁경부, 직장 및 방광을 포함한 자궁천골 인대 및 기타 골반저 조직을 해부하기 위한 자세한 프로토콜을 제시합니다.

초록

골반 장기 탈출증(POP)은 골반저의 무결성, 구조 및 기계적 지지에 영향을 미치는 상태입니다. 골반저의 장기는 근육, 인대 및 골반 근막을 포함한 다양한 해부학적 구조에 의해 지지됩니다. 자궁천골 인대(uterosacral ligament, USL)는 하중을 지탱하는 중요한 구조이며, USL의 손상은 POP 발병 위험을 높입니다. 현재 프로토콜은 라만 분광법을 사용한 USL 생화학적 구성 및 기능에 대한 고유한 데이터 수집 및 기계적 거동 평가와 함께 쥐 USL 및 골반저 장기의 해부에 대해 설명합니다. 마우스는 전임상 연구를 위한 매우 중요한 모델이지만, 쥐 USL을 해부하는 것은 어렵고 복잡한 과정입니다. 이 절차는 USL을 포함한 쥐 골반저 조직의 해부를 안내하여 여러 평가 및 특성화를 가능하게 하는 접근 방식을 제시합니다. 이 작업은 기초 과학자와 엔지니어가 골반저 조직의 해부를 지원하여 USL 및 골반저 상태에 대한 연구와 마우스 모델을 사용한 여성 건강에 대한 전임상 연구의 접근성을 확대하는 것을 목표로 합니다.

서문

여성의 약 50%가 골반 장기 탈출증(POP)의 영향을 받습니다^1,2. 이 여성의 약 11%는 성공률이 낮은 외과적 치료를 받기 위한 기준에 부합합니다(~30%)^3,4. POP는 USL과 골반저 근육이 적절한 지지력을 제공하지 못하여 골반 장기(방광, 자궁, 자궁경부, 직장)의 일부 또는 전부가 자연적인 위치에서 하강하는 것을 특징으로 한다⁵. 이 상태는 해부학 적 기능 장애와 결합 조직의 파괴, 신경근 손상뿐만 아니라 predisposing 요인 ^3,6을 포함합니다. POP는 연령, 체중, 출산 및 분만 유형(예: 질 분만 또는 제왕절개)과 같은 여러 요인과 관련이 있습니다. 이러한 요인은 모든 골반저 조직의 기계적 무결성에 영향을 미치는 것으로 생각되며, 임신과 출산율이 POP ^5,7,8

프로토콜

모든 동물 실험 및 절차는 콜로라도 볼더 대학의 동물 관리 및 사용 위원회에서 승인한 프로토콜 #2705에 따라 수행되었습니다. 6주령의 암컷 C57BL/6J 마우스를 본 연구에 사용하였다. 동물들은 상업적 공급원으로부터 입수하였다 ( 재료의 표 참조).

1. 동물 준비

1. 제도적으로 승인된 방법에 따라 동물을 안락사시킵니다.
   참고: 본 연구는 성공적인 안락사를 보장하기 위해 미국 수의학 협회(American Veterinary Medical Association)의 지침(분당 CO₂로 챔버 부피의 30% 내지 70%의 변위율)에 따라 CO₂ 흡입을 사용한 후 자궁경부 탈구를 사용했습니다.
   1. 가능하면 쥐 알레르겐의 확산을 최소화하기 위해 후드 아래에서 작업하십시오. 마우스가 움직이고 호흡을 멈추면 2분 이상 기다렸다가 반응이 없는지 확인합니다.
      참고: 마우스가 임신 중이거나 산후인 경우 새끼를 개별적으로 안락사시켜야 합니다. E15.5 이상의 새끼는 해부 중에 참수해야 합니다.
2. 해부 패드, 11날 메스, 구부러진 얇은 날카로운 가위, 두 쌍의 집게, 구부러진 집게, 5-....

결과

야생형 마우스의 해부의 각 단계는 프로토콜과 관련된 관련 비디오 및 그림에 자세히 설명되어 있습니다. 본 연구에서는 6주령의 암컷 C57BL/6J 마우스를 사용하였다(보충표 1). 서로 다른 효소로 처리된 USL을 사용한 3개의 샘플 그룹, 즉 대조군(무처리), 콜라게나제 처리 및 콘드로이티나제 처리 그룹을 분석했습니다. USL의 평활근, 신경 및 림프관은 섬유소 콜라겐과 글리코사미노글리칸.......

토론

구조적 손상이 여성 생식 조직에 미치는 영향은 충분히 연구되지 않았으며 POP 연구를 위해 쉽게 접근할 수 있는 동물 모델이 필요합니다. 마우스는 인간의 생식 연구를 모방할 수 있는 비용 효율적인 모델이다¹⁶. 여성 생식 기관 연구에 대한 관심이 높아짐에 따라 이러한 조직의 연구를 돕는 방법이 필요합니다. 이러한 요구를 해결하기 위해 이 작업에서는 구조 및 기능 분석을 ?.......

자료

Name	Company	Catalog Number	Comments
11 Blade	Fisher	3120030	Removable blade
1x PBS	Fisher	BP399-1	Diluted from 10x concentration
Chondroitinase ABC	Sigma	C3667-10UN	Enzyme
Collagenase Type I	Worthington Biochemical	LS004194	Enzyme
Confocal Microscope	Leica	STELLARIS 5	Upright configuration
Dissection Microscope	Leica	S9E	With camera
Dumont #5 Forceps	Fisher	NC9626652	Thin tip
Female C57BL/6J mice	Jackson Laboratory	strain #: 000664
FemtoTools Micromanipulator	FemtoTools	FT-RS1002	100 mN load cell
FST Curved Forceps	Fisher	NC9639443	Curved tip
FST Sharp 9 mm Scissors	Fisher	NC9639443	Dissection scissors
Ghost Dye 780	Tonbo	13-0865-T500	Free amine stain
Kimwipes	Fisher	06-666	Box of 50 wipes
OCT	Tissue Tek	4583	Used for tissue preservation
PDMS	Thermo Fisher	044764.AK	Follow manufacturer's instructions
Petri Dishes 35 mm	Fisher	FB0875711A	Used for dissected tissue
Polyglactin 5-0 Suture	Veter.Sut	VS385VL	With needle
Renishaw InVia Raman Microscope	Renishaw	PN192(EN)-02-A	With confocal objectives
Rocking Platform	VWR	10127-876	2 tier platform
Surgical Gloves	Fisher	52818	For dissection
Sytox	Thermo Fisher	S11381	Nuclear stain
T-pins	Fisher	S99385	For dissection
Transfer Pipets	Fisher	13-711-7M	For dissection
Underpads	Fisher	22037950	To cover dissection pad