マウスにおける多嚢胞性卵巣症候群の誘導のための改良技術

要約

このプロトコルでは、ミニポンプを使用して制御されたレトロゾール放出を通じて、マウスに多嚢胞性卵巣症候群 (PCOS) モデルを誘導する技術を紹介します。十分な麻酔下でミニポンプを皮下に移植し、ミニポンプを一定時間放出した後、マウスにPCOSを成功裏に誘導しました。

要約

多嚢胞性卵巣症候群(PCOS)は、女性の不妊症の主な原因の1つです。動物モデルは、PCOSの病因メカニズムの研究や関連する医薬品開発に広く使用されています。レトロゾール誘導マウスモデルは、PCOS患者の代謝および生殖表現型を再現します。PCOSマウスにおけるレトロゾール治療の従来の方法は、一定期間にわたって毎日投与する必要があり、これは労働集約的であり、マウスに大きなストレスを引き起こす可能性があります。この研究では、制御されたレトロゾール放出ミニポンプを埋め込むことにより、マウスにPCOSを誘導するための簡単で効果的な方法について説明します。定量的な量のレトロゾールを安定して連続的に放出できるミニポンプを作製し、麻酔下マウスに皮下移植しました。この研究では、マウスモデルがレトロゾールミニポンプ移植後のPCOSの特徴をうまく模倣したことが示されました。この研究で使用された材料と機器は、ほとんどのラボですぐに入手でき、特別なカスタマイズは必要ありません。まとめて、この記事では、マウスでPCOSを誘導するためのユニークで実行しやすい方法を提供します。

概要

多嚢胞性卵巣症候群(PCOS)は、生殖年齢¹の女性に最も一般的な疾患の1つです。これは、世界の女性の最大18%が罹患しており、世界中の女性の不妊の主な原因です^2,3。PCOSは、ゴナドトロピン分泌障害、慢性無排卵、アンドロゲン産生の増加、多嚢胞性卵巣形態など、相互に関連する一連の生殖異常を特徴^{としています4。}婦人科疾患に加えて、PCOSは心血管疾患のリスクも増加させます^5,6。何十年にもわたる研究にもかかわらず、PCOSの病因は不明のままです^7,8。

PCOSの病因についてより深い洞察を得て、新しい治療法を開発するためには、人間の生理学を厳密に模倣した動物モデルを作成することが非常に重要です⁹。現在報告されているPCOSのげっ歯類モデルには、テストステロン、レトロゾール、吉草酸エストラジオールなどの治療によって誘発される....

プロトコル

この研究のすべての動物実験プロトコルは、復旦大学の動物倫理委員会によって承認されました。ここでは、4週齢の雌C57BL/6Jマウスを使用しました。この研究で使用された動物、試薬、および機器の詳細は、 資料表に記載されています。

1.ミニポンプの準備

1. 元の包装ボトルに保存されたレトロゾール粉末(50 mg)を取り、ボトル内のレトロゾール粉末を300 x g で5秒間(室温)遠心分離し、キャップを開けます。.
2. レトロゾール粉末に625μLのDMSOをピペットでゆっくりと加え、よく混合して8 mg/100 μL、合計625 μLの濃度のストック溶液を得ます。
   注:異なるパッケージサイズのレトロゾール粉末を使用する場合は、ストックソリューションを構成するために事前にDMSOの必要量を計算してください。レトロゾール粉末、DMSO、およびその他の関連化合物は、滅菌グレードでなければなりません。ピペットの先端、チューブ、およびその他の関連アイテムは、使用前に滅菌または滅菌する必要があります。
3. 実験計画に従って必要なマウスの数を数えます。
4. 必要なマウスの数に応じて、必要なレトロゾール原液の総量をピペットで汲み上げ、ゆっくりと遠心チューブに注入します。

ディスカッション

この報告では、簡単に入手できる材料を使用してマウスにPCOSを誘導するための簡単なプロトコルを示しています。マウスPCOSモデルは、PCOSメカニズムの探索と薬物のスクリーニングに不可欠です²⁶。マウスでPCOSモデルを誘導するために利用可能な方法の中で、レトロゾール誘導は最も一般的に使用される方法の1つです。レトロゾールの使用は、テ?.......

資料

Name	Company	Catalog Number	Comments
Syringe	Bofeng Biotech	BD300841	1ML (sterile)
Centrifugation tube	Biological Hope	1850-K	15ML (sterile)
Pipette	Eppendorf	3123000268-A	100μL-1000μL (sterile)
Pipette	TopPette	7010101008	10μL-100μL (sterile)
Letrozole powder	Sigma	L6545-50MG	Primary acting drugs (sterile)
PEG(Poly(ethylene glycol))	Solarbio	P8250	Used for dissolution (sterile)
Sterile Physiological Saline Solution	Biosharp	BL158A	Mini-pump storage
Osmotic Pumps	ALZET	1004	Letrozole storage and sustained release (sterile)
Dimethyl sulfoxide	Biosharp	BS087	Used for dissolution (sterile)
Small Animal Anesthesia Machine	RWD	R500IP	Used for anesthesia
Isoflurane	RWD	20071302	Used for anesthesia
Hemostats	Biosharp	BS-HF-S-125	Surgical instrument
Scissors	Biosharp	BS-SOR-S-100P	Surgical instrument
Needle holder	ShangHaiJZ	J32010	Surgical instrument
Forceps	RWD	F12028	Surgical instrument
Needle and the 4-0 absorbable suture	JINGHUAN	CR413	Surgical instrument
Povidone-iodine swabs	SingleLady	GB26368-2010	Skin disinfection
Depilatory cream	ZIKER BIOTECHNOLOGY	ZK-L2701	Depilation agent for laboratory animals
Nitrile Gloves	Biosharp	BC040-L	Used for aseptic operation
Sterile gauze	ZHENDE	BA69087	Used for wiping liquids
C57BL/6J Mice	Shanghai Model Organisms Center	N/A	Age: 4 weeks
Pet Eye Lubricant	BAITE	SHF021153	Used for mouse eye lubricant
Meloxicam Injection	MEIDAJIA	R21064-21	Used for mouse analgesia (sterile)