Модифицированная методика индуцирования синдрома поликистозных яичников у мышей

Резюме

Этот протокол представляет собой технику индукции моделей синдрома поликистозных яичников (СПКЯ) у мышей с помощью контролируемого высвобождения летрозола с помощью мини-насосов. Под адекватной анестезией мини-помпа была имплантирована подкожно, и СПКЯ был успешно индуцирован у мышей после определенного периода выпуска мини-помпы.

Аннотация

Синдром поликистозных яичников (СПКЯ) является одной из ведущих причин бесплодия у женщин. Животные модели широко используются для изучения этиологических механизмов СПКЯ и для разработки связанных с ним лекарств. Мышиные модели, индуцированные летрозолом, воспроизводят метаболические и репродуктивные фенотипы пациентов с СПКЯ. Традиционный метод лечения летрозолом у мышей с СПКЯ требует ежедневного дозирования в течение определенного периода, что может быть трудоемким и вызывать значительный стресс у мышей. В этом исследовании описан простой и эффективный метод индуцирования СПКЯ у мышей путем имплантации контролируемого мини-насоса, высвобождающего летрозол. Мини-насос, способный стабильно непрерывно высвобождать количественное количество летрозола, был изготовлен и имплантирован подкожно мышам под наркозом. Это исследование показало, что мышиная модель успешно имитировала особенности СПКЯ после имплантации мини-помпы летрозола. Материалы и оборудование, использованные в этом исследовании, легко доступны для большинства лабораторий и не требуют специальной настройки. В совокупности эта статья представляет собой уникальный, простой в исполнении метод индуцирования СПКЯ у мышей.

Введение

Синдром поликистозных яичников (СПКЯ) является одним из наиболее распространенных состояний среди женщин репродуктивного возраста¹. Он поражает до 18% женщин во всем мире и является основной причиной женского бесплодия во всем мире ^2,3. СПКЯ характеризуется рядом взаимосвязанных репродуктивных аномалий, включая нарушение секреции гонадотропинов, хроническую ановуляцию, повышенную выработку андрогенов и морфологию поликистозных яичников⁴. Помимо гинекологических нарушений, СПКЯ также повышает риск сердечно-сосудистых заболеваний

протокол

Все протоколы экспериментов на животных в этом исследовании были одобрены Комитетом по этике животных Фуданьского университета. Здесь использовали самок мышей C57BL/6J в возрасте 4 недель. Подробная информация о животных, реагентах и оборудовании, использованных в этом исследовании, приведена в Таблице материалов.

1. Подготовка мини-насоса

1. Возьмите порошок летрозола (50 мг), хранящийся в оригинальной упаковке, центрифугируйте порошок летрозола во флаконе при 300 х г в течение 5 с (при комнатной температуре), затем откройте крышку.
2. Медленно добав....

Результаты

Протокол эксперимента и некоторые критические шаги показаны на рисунках 1 и 2. Уровни тестостерона в сыворотке крови показаны на рисунке 3А. У мышей, получавших лечение мини-помпой Летрозола (далее именуемых мышами LTZ), на.......

Обсуждение

В этом отчете демонстрируется простой протокол для индуцирования СПКЯ у мышей с использованием легкодоступных материалов. Мышиная модель СПКЯ имеет важное значение для изучения механизмов СПКЯ и скрининга лекарственных препаратов²⁶. Из доступных метод?.......

Материалы

Name	Company	Catalog Number	Comments
Syringe	Bofeng Biotech	BD300841	1ML (sterile)
Centrifugation tube	Biological Hope	1850-K	15ML (sterile)
Pipette	Eppendorf	3123000268-A	100μL-1000μL (sterile)
Pipette	TopPette	7010101008	10μL-100μL (sterile)
Letrozole powder	Sigma	L6545-50MG	Primary acting drugs (sterile)
PEG(Poly(ethylene glycol))	Solarbio	P8250	Used for dissolution (sterile)
Sterile Physiological Saline Solution	Biosharp	BL158A	Mini-pump storage
Osmotic Pumps	ALZET	1004	Letrozole storage and sustained release (sterile)
Dimethyl sulfoxide	Biosharp	BS087	Used for dissolution (sterile)
Small Animal Anesthesia Machine	RWD	R500IP	Used for anesthesia
Isoflurane	RWD	20071302	Used for anesthesia
Hemostats	Biosharp	BS-HF-S-125	Surgical instrument
Scissors	Biosharp	BS-SOR-S-100P	Surgical instrument
Needle holder	ShangHaiJZ	J32010	Surgical instrument
Forceps	RWD	F12028	Surgical instrument
Needle and the 4-0 absorbable suture	JINGHUAN	CR413	Surgical instrument
Povidone-iodine swabs	SingleLady	GB26368-2010	Skin disinfection
Depilatory cream	ZIKER BIOTECHNOLOGY	ZK-L2701	Depilation agent for laboratory animals
Nitrile Gloves	Biosharp	BC040-L	Used for aseptic operation
Sterile gauze	ZHENDE	BA69087	Used for wiping liquids
C57BL/6J Mice	Shanghai Model Organisms Center	N/A	Age: 4 weeks
Pet Eye Lubricant	BAITE	SHF021153	Used for mouse eye lubricant
Meloxicam Injection	MEIDAJIA	R21064-21	Used for mouse analgesia (sterile)