5-Bromo-2'-Deoxyuridine (BrdU) Labeling of Mitochondrial DNA in HeLa Cells

ミトコンドリアの標識を開始するには、10%ウシ胎児血清またはFBSを含むDMEM中のBrdUの20マイクロモル溶液を調製します。次に、ミトコンドリア追跡色素を添加して、最終濃度を1.1マイクロモルに調整します。15時間後、10マイクロリットルのミトコンドリアトラッキング色素溶液をHeLa細胞懸濁液含有ウェルに加える。

細胞を1時間インキュベートします。新しく合成されたDNA分子をBrdUで標識するために使用される条件により、HeLa細胞のミトコンドリアでBrdU標識DNAを検出することができました。抗BrdU抗体で得られたシグナルは特異的であり、BrdUで処理された細胞でのみ観察されました。

BrdU処理にかかわらず、抗BrdUまたは抗DNA抗体シグナルは、行ゼロ細胞のミトコンドリアで検出されなかった。抗BrdU抗体からの蛍光シグナルを定量すると、BrdUで処理された行ゼロ細胞はBrdU未処理細胞と同じ低レベルの蛍光を示したが、親株A549およびHeLaのシグナルは50倍高かった。