この研究の全体的な目標は、動物モデルにおける圧迫潰瘍の発達と治癒のダイナミクスに及ぼす脊髄損傷の影響を調べることである。この技術の主な利点は、動物の動きを損なわない、そして非常に再現可能である。このモデルは創傷治癒の力学を研究し、SCI患者のための様々な治療戦略をテストするためのプラットホームを提供する。
手順を開始する前に、テールピンチへの応答の欠如によって適切な麻酔を確認してください。電気クリッパーでドーサムの上に髪を剃ります。脱毛クリームを塗り、残りの髪を取り除くために3分間放置します。
3分後、濡れたスクラブで脱毛クリームを取り除き、同様にドーサムを洗います。そして、彼らのケージに動物を返します。翌日、動物を麻酔し、眼科軟膏を角膜に塗布して、手術中の乾燥から目を保護する。
次いで、ベタジンスクラブと70%エタノールで動物の皮膚をそれぞれ3回スクラブする。切開前に、25ゲージ針の注射器を使用して、鎮痛として切開部位の周りに0.125%ブピバカインの100マイクロリットルを注入する。T13 に対応するフローティング リブからカウントバックして、T8 から T12 を識別します。
1〜1.5センチメートルの切開を作成した後、正中線に沿って、背部に、T8〜T12椎骨のレベルで、皮下脂肪組織をクリアして、脊髄筋肉にアクセスする。そして、両側の棘プロセスと層状を露出させるためにゆっくりとそれらを解剖します。過度の出血や脊髄への損傷を避けるために、この手順を非常に慎重に行うことは非常に重要です。
T9~T10椎骨のラミニング術を行い、マイクロ解剖鉗子を用いて脊髄層を軽く剥がして脊髄を露出させる。鉗子を使用して、脊柱を固定し、T8で持ち上げて、脊髄湾曲を誇張します。その後、細かいはさみを使用して、T9とT10椎骨の間の脊髄を椎骨管の床まで切り離し、完全な切り抜きを確保します。
外科顕微鏡下で完全な切除を観察した後、手術部位閉鎖前に脊髄にさらなる保護を提供するために、ラミネクトミー部位上に皮下脂肪の一部を適用する。最後に、傷を閉じ、麻痺筋と表面筋膜を縫合します。次に、縫合クリップを使用してスキンを閉じます。
SCI手術の直後にベタジンと70%アルコールで動物の背中をスクラブします。脊髄損傷部位の下の圧力潰瘍の場合、25ゲージ針を使用して、仙椎の近くの背部皮膚の楕円に0.125%bupivacaine溶液の10マイクロリットルを注入し、ポイント0.5〜1センチメートル離れた。マウスの背面に皮膚をそっと持ち上げ、2枚の磁気ディスクの間に挟みます。
マグネットアプリケーションの直後に、完全な意識が取り戻されるまで加熱パッドに置かれた単一のケージに動物を返します。12時間の磁石塗布後、イオブルランで動物を軽く麻酔し、磁石を取り除きます。創傷部位の写真を撮って、昼ゼロタイムポイントでの圧力潰瘍の初期出現を記録する。
乾燥や汚れがないように、透明なドレッシングフィルムで傷口を覆います。手順に従って動物を一戸舎。手術直後に、動物に0.9%の生理食塩水を1ミリリットル注入し、鎮痛のためにブプレノルフィンSRを注入する。
1日2回、膀胱の手動避難を行います。脊髄損傷手術の7日後に外科用クリップを取り外します。脊髄損傷および皮膚圧迫潰瘍誘導後の所望の時点で、安楽死させたマウスから負傷した皮膚サンプルを収集する。
24時間10%ホルマリンで修正。24時間後に70%エタノールに移し、切り離すまで摂氏4度で保存します。この画像は、ポストマグネット除去の3日目までに対照動物の表皮の消失を示しています。
矢印は、上皮裏地が薄くなる位置にある表皮創傷縁を示す。対照動物では、表皮は7日目までに再び現れる。SCIのレベルを下回って創傷を作成した場合、SCIマウスでは、有意に遅い移動が見られる。
ここでは、この図は、コントロールマウスと比較して、SCIマウスにおける創傷治癒および閉鎖の遅さを示している。赤い矢印によって示される増殖細胞のマーカーであるKi67の免疫染色は、SCI群における増殖が少ないことを明らかにした。赤い矢印によって示される血管のマーカーであるCD31の染色は、SCI群の血管密度の低下を明らかにした。
最後に、α平滑筋アクチンの免疫染色は、SCIマウスからの皮膚創傷におけるこのタンパク質の低レベルを明らかにした。この手順を試みている間、磁石を適切に配置して、無傷の皮膚によって分離された2つの円形の創傷を発症することを忘れないでください。これにより、創傷の発達と治癒の変動が減少します。
脊髄損傷患者の皮膚圧迫潰瘍は、米国の医療システムに多大なコストを与える。この動物モデルは脊髄損傷患者の圧力潰瘍の治癒を助けるためにさまざまな治療戦略をテストするためのプラットホームを提供する。
