Das übergeordnete Ziel dieser Studie ist es, die Auswirkungen von Rückenmarksverletzungen auf die Dynamik der Entwicklung von Druckgeschwüren und Heilung in einem Tiermodell zu untersuchen. Der Hauptvorteil dieser Technik ist, dass sie die Tierbewegungen nicht beeinträchtigt und sehr reproduzierbar ist. Dieses Modell bietet eine Plattform, um die Dynamik der Wundheilung zu untersuchen und verschiedene therapeutische Strategien für SCI-Patienten zu testen.
Vor Beginn des Verfahrens sorgen sie für eine ordnungsgemäße Anästhesie durch die fehlende Reaktion auf eine Schwanzprise. Rasieren Sie das Haar über dem Dorsum mit einem elektrischen Clipper. Dann die Enthaarungscreme auftragen und drei Minuten ziehen lassen, um das restliche Haar zu entfernen.
Nach drei Minuten die Enthaarungscreme mit dem nassen Peeling entfernen und das Dorsum ähnlich waschen. Und dann bringen Sie die Tiere in ihre Käfige zurück. Am nächsten Tag die Tiere befeuchten und die ophthalmologische Salbe auf die Hornhäuten auftragen, um die Augen während des chirurgischen Eingriffs vor dem Trocknen zu schützen.
Dann schrubben Sie die Tierhaut dreimal mit Betadinpeeling und 70% Ethanol. Vor dem Einschnitt verwenden Sie eine Spritze mit einer 25-Meter-Nadel, um 100 Mikroliter 0,125%bupivacaine um die Einschnittstelle als Analgesie zu injizieren. Zählen Sie von den schwebenden Rippen zurück, die T13 entsprechen, um T8 bis T12 zu identifizieren.
Nach der Schaffung eines ein bis 1,5 Zentimeter Großen Einschnitts, entlang der Mittellinie, auf der Rückseite, auf der Ebene von T8 bis T12 Wirbel n. Chr. löschen Sie das subkutane Fettgewebe, um auf die paraspinalen Muskeln zuzugreifen. Und dann sezieren sie langsam, um die spinösen Prozesse und Lamina auf beiden Seiten zu entlarven. Es ist sehr wichtig, dieses Verfahren sehr sorgfältig zu tun, um übermäßige Blutungen und Verletzungen des Rückenmarks zu vermeiden.
Führen Sie eine Laminektomie der Wirbel T9 bis T10 durch, um das Rückenmark freizulegen, indem Sie die Spinallamina mit Mikrosesektieren sanft abschälen. Verwenden Sie Zangen, um die Wirbelsäule bei T8 zu sichern und zu heben, um die Wirbelsäulenkrümmung zu übertreiben. Verwenden Sie dann eine feine Schere, um das Rückenmark zwischen den Wirbeln T9 und T10 bis zum Boden des Wirbelkanals zu sektionieren, um eine vollständige Transektion zu gewährleisten.
Nach Beobachtung der kompletten Transektion unter einem chirurgischen Mikroskop tragen Sie ein Stück subkutanes Fett über die Laminektomie-Stelle auf, um dem Rückenmark vor dem chirurgischen Standortverschluss zusätzlichen Schutz zu bieten. Schließlich schließen Sie die Wunde und Nähen sie die paravertebralen Muskeln und oberflächliche Faszien. Schließen Sie dann die Haut mit Nahtclips.
Unmittelbar nach der SCI-Operation schrubben Sie den Rücken des Tieres mit Betadin und 70% Alkohol. Für ein Druckgeschwür unterhalb der Rückenmarksverletzungsstelle verwenden Sie eine 25-Meter-Nadel, um 10 Mikroliter 0,125%bupivacaine-Lösung in eine Ellipse in der Rückenhaut, in der Nähe des Kreuzbeins, mit den Punkten 0,5 bis 1 Zentimeter auseinander zu injizieren. Heben Sie vorsichtig eine Hautfalte auf der Rückseite der Maus und Sandwich es zwischen zwei magnetischen Scheiben.
Unmittelbar nach magnetiger Anwendung kehren die Tiere in einzelne Käfige zurück, die auf ein Heizkissen gelegt werden, bis das volle Bewusstsein wiedererlangt ist. Nach 12 Stunden Magnetanwendung das Tier mit Isofluran leicht anästhesieren und die Magnete entfernen. Nehmen Sie ein Foto von den Wundstellen auf, um das ursprüngliche Auftreten des Druckgeschwürs am Tag null Zeitpunkt aufzuzeichnen.
Bedecken Sie die Wunde mit transparenter Verbandsfolie, um Eintrocknung oder Kontamination zu vermeiden. Einhausung der Tiere nach dem Verfahren. Unmittelbar nach der Operation injizieren Sie das Tier mit einem Milliliter 0,9% Saline für Hydratation und Buprenorphin SR für Analgesie.
Führen Sie zweimal täglich eine manuelle Blasenevakuierung durch. Entfernen Sie die chirurgischen Clips sieben Tage nach einer Operation mit Rückenmarksverletzungen. Sammeln Sie verwundete Hautproben von der eingeschläferten Maus zum gewünschten Zeitpunkt nach Rückenmarksverletzung und Hautdruckgeschwürinduktion.
Fix in 10%formalin für 24 Stunden. Nach 24 Stunden auf 70% Ethanol übertragen und bei vier Grad Celsius bis zum Schnitt lagern. Dieses Bild zeigt das Verschwinden der Epidermis in einem Kontrolltier am dritten Tag der Post-Magnet-Entfernung.
Pfeile zeigen die epidermalen Wundkanten an, die sich dort befinden, wo die Epithelauskleidung ausdünnt. Im Kontrolltier taucht die Epidermis am siebten Tag wieder auf. Bei Wunden, die unterhalb des Niveaus des SCI erzeugt werden, wird bei SCI-Mäusen eine deutlich langsamere Migration beobachtet.
Hier zeigt die Abbildung eine langsamere Wundheilung und Verschluss in den SCI-Mäusen im Vergleich zu den Kontrollmäusen. Immunostaining für Ki67, ein Marker von sich ausbreitenden Zellen, der durch die roten Pfeile angezeigt wird, zeigte eine geringere Proliferation in der SCI-Gruppe. Die Färbung von CD31, einem Marker für Blutgefäße, der durch die roten Pfeile angezeigt wird, ergab eine geringere Blutgefäßdichte in der SCI-Gruppe.
Schließlich, Immunstainierung für Alpha glatte MuskelAkt in offenbarte niedrigere Ebenen dieses Proteins in der Haut Wunden von SCI-Mäuse. Beim Versuch dieses Verfahrens ist es wichtig, daran zu denken, die Magnete richtig zu platzieren, um zwei kreisförmige Wunden zu entwickeln, die durch intakte Haut getrennt sind. Dies reduziert die Variabilität in der Wundentwicklung und -heilung.
Hautdruckgeschwüre bei Rückenmarksverletzten verursachen erhebliche Kosten für das US-Gesundheitssystem. Dieses Tiermodell bietet eine Plattform zum Testen verschiedener therapeutischer Strategien zur Unterstützung der Druckgeschwürheilung bei Rückenmarksverletzten.
