이 연구의 전반적인 목표는 동물 모델에서 압력 궤양 발달 및 치유의 역학에 척수 손상의 효과를 검사하는 것입니다. 이 기술의 주요 장점은 동물의 움직임을 손상시키지 않으며 매우 재현 할 수 있다는 것입니다. 이 모델은 상처 치유의 역학을 연구하고 SCI 환자를위한 다양한 치료 전략을 테스트할 수있는 플랫폼을 제공합니다.
절차를 시작하기 전에 꼬리 핀치에 대한 반응의 부족으로 적절한 마취를 보장합니다. 전기 클리퍼로 도섬 위에 머리를 면도합니다. 그런 다음 탈모 크림을 바르고 3 분간 그대로 두고 남은 모발을 제거합니다.
3분 후 젖은 스크럽으로 디필 크림을 제거하고 도섬을 비슷하게 씻습니다. 그리고 동물을 새장에 돌려놓습니다. 다음 날 동물을 마취하고 외과 수술 중 건조로부터 눈을 보호하기 위해 각막에 안과 연고를 적용합니다.
그런 다음 베타딘 스크럽과 70%에탄올로 동물 피부를 각각 3회 문질러 보디울 수 있습니다. 절개 하기 전에, 주사기를 사용 하 여 25 게이지 바늘 에 주사기를 사용 하 여 주입 100 0.125%bupivacaine 의 미생물 사이트 주위 진통 사이트. T13에 해당하는 부동 갈비뼈에서 다시 계산하여 T8에서 T12로 식별합니다.
1 내지 1.5센티미터 절개를 만든 후, 중간선을 따라, 뒤쪽, T8 내지 T12 척추의 수준에서 피하 지방 조직을 맑게 하여 기생충 근육에 접근한다. 그런 다음 천천히 해부하여 양쪽에 가시 공정과 라미나를 노출시합니다. 과도한 출혈과 척수의 부상을 피하기 위해이 절차를 매우 신중하게 수행하는 것이 매우 중요합니다.
T9에서 T10 척추에 대한 라미네절제술을 수행하여 마이크로 해부 포셉을 사용하여 척수 라미나에서 부드럽게 벗겨서 척수를 노출시합니다. 포셉을 사용하여 T8의 척추 컬럼을 고정하고 들어 올려 척추 곡률을 과장하십시오. 그런 다음 미세 가위를 사용하여 T9과 T10 척추 사이의 척수를 척추 의 바닥까지 절제하여 완전한 횡부를 보장하십시오.
수술 현미경의 밑에 완전한 transection를 관찰한 후에 수술 사이트 폐쇄 의 앞에 척수에 추가 보호를 제공하기 위하여 라미케토미 사이트에 피하 지방의 조각을 적용합니다. 마지막으로, 상처를 닫고 주역 근육과 피상적 근막을 봉합합니다. 그런 다음 봉합사 클립을 사용하여 피부를 닫습니다.
SCI 수술 직후 베타딘과 70%의 알코올로 동물의 뒤쪽을 문질러보입니다. 척수 손상 부위 아래의 압력 궤양의 경우 25 게이지 바늘을 사용하여 0.125%의 부피바카인 용액10을 사럼 근처의 등쪽 피부의 타원에 주입하고 0.5~1센티미터 간격으로 사용한다. 마우스 뒷면에 피부를 부드럽게 들어 올리고 두 개의 자기 디스크 사이에 끼입니다.
자석 응용 프로그램 직후 전체 의식이 회복 될 때까지 가열 패드에 배치 된 단일 케이지에 동물을 반환합니다. 자석 적용 후 12 시간 동안 가볍게 이소플루란으로 동물을 마취하고 자석을 제거합니다. 상처 부위의 사진을 찍어 하루 0시점에 압력 궤양의 초기 모양을 기록하십시오.
건조 또는 오염을 방지하기 위해 투명 드레싱 필름으로 상처를 덮습니다. 절차를 따라 동물을 단독 보관합니다. 수술 직후 진통제용 수분 공급 및 부프레노르핀 SR용 0.9%의 1밀리리터로 동물을 주입합니다.
하루에 두 번 수동 방광 을 수행하십시오. 척수 손상 수술 후 7 일 수술 클립을 제거합니다. 척수 손상 및 피부 압력 궤양 유도 후 원하는 시점에서 안락사 마우스에서 상처 입은 피부 샘플을 수집합니다.
24시간 동안 10%의 포르말린으로 수정합니다. 24시간 후 70%에탄올로 이동하여 단면까지 섭씨 4도에 보관하십시오. 이 이미지는 자석 제거 후 3일째까지 대조군 동물의 표피가 사라지는 것을 묘사합니다.
화살표는 상피 안대기가 얇아지는 표피 상처 가장자리를 나타냅니다. 대조군 동물에서 표피는 7일째에 다시 나타납니다. SCI 의 수준 이하로 생성 된 상처의 경우, SCI 마우스에서, 크게 느린 마이그레이션이 볼 수 있습니다.
여기서, 그림은 대조군 마우스에 비해 SCI 마우스의 느린 상처 치유 및 폐쇄를 묘사한다. 적색 화살표로 표시된 증식 세포의 마커인 Ki67에 대한 면역 염색은 SCI 그룹에서 더 적은 증식을 나타냈다. CD31에 대한 염색, 적색 화살표로 표시된 혈관에 대한 마커, SCI 그룹에서 낮은 혈관 밀도를 밝혀.
마지막으로, 알파 부드러운 근육 액틴에 대한 면역 염색은 SCI 마우스의 피부 상처에서이 단백질의 낮은 수준을 밝혀. 이 절차를 시도하는 동안 그대로 피부에 의해 분리 된 두 개의 원형 상처를 개발하기 위해 자석을 올바르게 배치하는 것이 중요합니다. 이것은 상처 발달과 치유의 가변성을 감소시킬 것입니다.
척수 부상 환자의 피부 압력 궤양은 미국 의료 시스템에 상당한 비용을 부여합니다. 이 동물 모델은 척수 부상 환자의 압력 궤양 치유를 돕기 위해 다양한 치료 전략을 테스트하기위한 플랫폼을 제공합니다.
