El objetivo general de este estudio es examinar el efecto de la lesión de la médula espinal en la dinámica del desarrollo de úlceras por presión y la curación en un modelo animal. La principal ventaja de esta técnica es que no perjudica los movimientos de los animales, y es muy reproducible. Este modelo proporciona una plataforma para estudiar la dinámica de la cicatrización de heridas y probar diversas estrategias terapéuticas para el paciente con SCI.
Antes de comenzar el procedimiento asegurar la anestesia adecuada por la falta de respuesta a un pellizco de cola. Afeitar el pelo sobre el dorso con un clipper eléctrico. Luego aplica la crema depilatoria, y deja durante tres minutos para eliminar el cabello restante.
Después de tres minutos retirar la crema depilatoria con el exfoliante húmedo y lavar el dorso de manera similar. Y luego devolver a los animales a sus jaulas. Al día siguiente anestesiar a los animales y aplicar la pomada oftálmica a las córneas para proteger los ojos del secado durante el procedimiento quirúrgico.
Luego, frota la piel del animal tres veces más cada una con exfoliante de betadina y 70%etanol. Antes de la incisión, utilice una jeringa con una aguja de calibre 25 para inyectar 100 microlitros de 0,125% de bupivacaína alrededor del lugar de la incisión como analgesia. Cuenta de vuelta de las costillas flotantes que corresponden a T13 para identificar T8 a T12.
Después de crear una incisión de uno a 1,5 centímetros, a lo largo de la línea media, en la parte posterior, a nivel de las vértebras T8 a T12, despeje el tejido adiposo subcutáneo para acceder a los músculos paraspinales. Y luego diseccionarlos lentamente para exponer los procesos espinosos y lamina en ambos lados. Es muy crítico hacer este procedimiento con mucho cuidado para evitar el sangrado excesivo y cualquier lesión en la médula espinal.
Realizar una laminectomía de las vértebras T9 a T10 para exponer la médula espinal despegando suavemente la lámina espinal usando micro fórceps diseccionantes. Use fórceps para asegurar y levantar la columna vertebral en T8 para exagerar la curvatura de la columna vertebral. A continuación, utilice tijeras finas para sedar la médula espinal entre las vértebras T9 y T10 hasta el suelo del canal vertebral para asegurar la transección completa.
Después de observar la transección completa bajo un microscopio quirúrgico, aplique un pedazo de grasa subcutánea sobre el sitio de laminectomía para proporcionar protección adicional a la médula espinal antes del cierre del sitio quirúrgico. Finalmente, cierra la herida y sutura los músculos paravertebrales y la fascia superficial. A continuación, cierre la piel con clips de sutura.
Inmediatamente después de la cirugía de SCI fregar la parte posterior del animal con betadina y 70%alcohol. Para una úlcera por presión debajo del sitio de la lesión de la médula espinal, utilice una aguja de calibre 25 para inyectar 10 microlitros de 0.125%bupivacaína solución en una elipse en la piel dorsal, cerca del sacro, con puntos de 0,5 a un centímetro de distancia. Levante suavemente un pliegue de piel en la parte posterior del ratón y empareje entre dos discos magnéticos.
Inmediatamente después de la aplicación del imán devolver los animales a jaulas individuales colocadas en una almohadilla de calefacción hasta que se recupere la conciencia completa. Después de 12 horas de aplicación del imán ligeramente anestesiar al animal con isoflurano y quitar los imanes. Tome una fotografía de los sitios de la herida para registrar la apariencia inicial de la úlcera por presión en el punto de hora cero del día.
Cubra la herida con una película transparente para evitar el secado o la contaminación. Una sola casa de los animales siguiendo el procedimiento. Inmediatamente después de la cirugía inyecte al animal un mililitro de 0.9%saline para hidratación y buprenorfina SR para analgesia.
Realice la evacuación manual de la vejiga dos veces al día. Retire los clips quirúrgicos siete días después de la cirugía de lesión de la médula espinal. Recoger muestras de piel heridas del ratón eutanizado en el momento deseado después de la lesión de la médula espinal y la inducción de la úlcera por presión de la piel.
Arreglo en 10% de formol durante 24 horas. Después de 24 horas transfiera al 70% de etanol y almacene a cuatro grados centígrados hasta el seccionamiento. Esta imagen representa la desaparición de la epidermis en un animal de control por el tercer día de la eliminación post-imán.
Las flechas indican los bordes epidérmicos de la herida ubicados donde se adelgaza el forro epitelial. En el animal de control la epidermis reaparece para el día siete. Para las heridas creadas por debajo del nivel del SCI, en ratones SCI, se observa una migración significativamente más lenta.
Aquí, la figura representa una cicatrización y cierre de heridas más lentos en los ratones SCI en comparación con los ratones de control. La inmunostaining para Ki67, un marcador de células proliferantes indicadas por las flechas rojas, reveló menos proliferación en el grupo SCI. La tinción de CD31, un marcador para los vasos sanguíneos indicado por las flechas rojas, reveló una menor densidad de los vasos sanguíneos en el grupo SCI.
Finalmente, la inmunostaining para la actina muscular lisa alfa reveló niveles más bajos de esta proteína en las heridas de la piel de ratones SCI. Al intentar este procedimiento es importante recordar colocar los imanes correctamente para desarrollar dos heridas circulares separadas por la piel intacta. Esto reducirá la variabilidad en el desarrollo y la curación de heridas.
Las úlceras por presión cutánea en pacientes lesionados con médula espinal otorgan costos significativos al sistema de salud de los Estados Unidos. Este modelo animal proporciona una plataforma para probar diversas estrategias terapéuticas para ayudar a la curación de úlceras por presión en pacientes lesionados con médula espinal.
