L'obiettivo generale di questo studio è quello di esaminare l'effetto della lesione del midollo spinale sulla dinamica dello sviluppo e della guarigione dell'ulcera da pressione in un modello animale. Il vantaggio principale di questa tecnica è che non compromette i movimenti degli animali ed è molto riproducibile. Questo modello fornisce una piattaforma per studiare la dinamica della guarigione delle ferite e testare varie strategie terapeutiche per il paziente SCI.
Prima di iniziare la procedura assicurarsi un'anestesia corretta dalla mancanza di risposta a un pizzico di coda. Radere i capelli sopra il dorsum con un clipper elettrico. Quindi applicare la crema depilatoria e lasciare per tre minuti per rimuovere i capelli rimanenti.
Dopo tre minuti rimuovere la crema depilatoria con lo scrub umido e lavare il dorsum in modo simile. E poi riportare gli animali nelle loro gabbie. Il giorno dopo anestetizza gli animali e applica l'unguento oftalmico alle cornee per proteggere gli occhi dall'essiccazione durante la procedura chirurgica.
Quindi, strofinare la pelle animale tre volte ciascuna con scrub alla betadina e 70% di etanolo. Prima dell'incisione, utilizzare una siringa con un ago calibro 25 per iniettare 100 microlitri dello 0,125% di bupivacaina intorno al sito di incisione come analgesia. Contare indietro dalle nervature galleggianti che corrispondono a T13 per identificare da T8 a T12.
Dopo aver creato un'incisione da uno a 1,5 centimetri, lungo la linea mediana, sul retro, a livello delle vertebre da T8 a T12 cancellare il tessuto adiposo sottocutaneo per accedere ai muscoli paraspinali. E poi sezionarli lentamente per esporre i processi spinosi e lamina su entrambi i lati. È molto fondamentale eseguire questa procedura con molta attenzione per evitare un eccessivo sanguinamento e qualsiasi lesione al midollo spinale.
Eseguire una laminectomia delle vertebre da T9 a T10 per esporre il midollo spinale staccando delicatamente la lamina spinale utilizzando le forcep di microsezionazione. Utilizzare le forcep per fissare e sollevare la colonna vertebrale a T8 per esagerare la curvatura spinale. Quindi, utilizzare forbici fini per sezionare il midollo spinale tra le vertebre T9 e T10 fino al pavimento del canale vertebrale per garantire la completa trasezione.
Dopo aver osservato la trasezione completa al microscopio chirurgico, applicare un pezzo di grasso sottocutaneo sul sito di laminectomia per fornire ulteriore protezione al midollo spinale prima della chiusura chirurgica del sito. Infine, chiudere la ferita e suturare i muscoli paravertebrali e la fascia superficiale. Quindi chiudere la pelle usando clip di sutura.
Subito dopo l'intervento sci scrub la parte posteriore dell'animale con betadina e 70% alcol. Per un'ulcera da pressione al di sotto del sito della lesione del midollo spinale utilizzare un ago calibro 25 per iniettare 10 microlitri di soluzione di bupivacaina allo 0,125% in un'ellisse nella pelle dorsale, vicino all'osso sacro, con punti distanti da 0,5 a un centimetro. Sollevare delicatamente una piega della pelle sul retro del mouse e incastrato tra due dischi magnetici.
Immediatamente dopo l'applicazione del magnete, riportare gli animali in gabbie singole posizionate su una pastiglia riscaldante fino a quando non viene riconquistata la piena coscienza. Dopo 12 ore di applicazione del magnete anestetizza leggermente l'animale con isoflurane e rimuovi i magneti. Scatta una fotografia dei siti della ferita per registrare l'aspetto iniziale dell'ulcera da pressione al giorno zero time point.
Coprire la ferita con pellicola trasparente per evitare asciugatura o contaminazione. Ospita da solo gli animali seguendo la procedura. Subito dopo l'intervento chirurgico iniettare all'animale un millilitro dello 0,9% di soluzione salina per l'idratazione e buprenorfina SR per l'analgesia.
Eseguire l'evacuazione manuale della vescica due volte al giorno. Rimuovere le clip chirurgiche sette giorni dopo l'intervento chirurgico alla lesione del midollo spinale. Raccogliere campioni di pelle feriti dal topo eutanasiato nel momento desiderato dopo la lesione del midollo spinale e l'induzione dell'ulcera da pressione cutanea.
Correggere in formalina al 10% per 24 ore. Dopo 24 ore trasferire al 70% di etanolo e conservare a quattro gradi Celsius fino alla sessatura. Questa immagine descrive la scomparsa dell'epidermide in un animale di controllo entro il terzo giorno della rimozione post-magnete.
Le frecce indicano i bordi della ferita epidermica situati dove il rivestimento epiteliale si assottiglia. Nell'animale di controllo l'epidermide riappare entro il settimo giorno. Per le ferite create al di sotto del livello dello SCI, nei topi SCI, si vede una migrazione significativamente più lenta.
Qui, la figura raffigura una guarigione e una chiusura delle ferite più lente nei topi SCI rispetto ai topi di controllo. L'immunostaining per Ki67, un marcatore di cellule proliferare indicato dalle frecce rosse, ha rivelato meno proliferazione nel gruppo SCI. La colorazione per CD31, un marcatore per i vasi sanguigni indicato dalle frecce rosse, ha rivelato una minore densità dei vasi sanguigni nel gruppo SCI.
Infine, l'immunostaining per l'actina muscolare liscia alfa ha rivelato livelli più bassi di questa proteina nelle ferite della pelle dei topi SCI. Durante il tentativo di questa procedura è importante ricordare di posizionare correttamente i magneti per sviluppare due ferite circolari separate da pelle intatta. Ciò ridurrà la variabilità nello sviluppo e nella guarigione delle ferite.
Le ulcere da pressione cutanea nei pazienti feriti al midollo spinale conferiscono costi significativi al sistema sanitario statunitense. Questo modello animale fornisce una piattaforma per testare varie strategie terapeutiche per aiutare la guarigione dell'ulcera da pressione nei pazienti feriti del midollo spinale.
