オープン パッチ ・ クランプのピペットで非撹拌の境界層におけるイオン濃度の測定: 流体によるイオン チャネルの制御の流れ

この提出は、イオンチャネルの規則における流体フローなど、電気生理学的な分野における重要な質問に答える上で役立ちます。この技術の主な利点は、イオンチャネルの流体流量調節に関連するデータ解釈のために、膜表面の未攪拌境界層における実際のイオン濃度を推定できることである。この手順を開始するには、焼成ガラスの毛管チューブを曲げてU字型にします。

毛細管の内径は、大きなイオン電流を記録する際の直列抵抗を低減するのに十分な大きさである必要があります。次に、3グラムのアガロースを塩化3モルカリウムの100ミリリットルに溶解し、90〜100°Cのホットプレートに置きます。次いで、塩化カリウムアガロースをブリッジに積み込み、ガラスブリッジを溶液に浸漬する。

アガロースが設定し、硬化するために室温で一晩それを保ちます。翌日、硬化したアガロース塩からアガロースカリウムを含むガラス橋を慎重に掘り出します。冷蔵庫の3モル塩化カリウムの広い首のボトルに橋を保管してください。

この手順では、パッチクランプチャンバの上に、入浴液を積んだ容器を置きます。次に、チューブを吸引して、パッチクランプチャンバーに入浴液を充填します。流体の流れを止めるには、チューブをコンテナ側でクリップして流体の流れを遮断します。

その後、吸引側でチューブをクリップし、同時に吸引を停止します。これは定常制御条件です。流体流れのせん断力を適用するには、容器と吸引側の両方のチューブを同時に開きます。

流体流せん断力を細胞に適用する前または後に、所定の時間にわたる流体体積の減少を測定することによって、毎分ミリリットルの流量を計算する。液体・金属接合電位の変化を測定するには、入浴室用の生理食塩塩を通常用意し、寒天性塩化カリウム橋の不在と存在下で比較します。次に、3モル塩化カリウム溶液を含むパッチピペットをチャンバに入れ、ピペットと入浴液との間の接合電位シフトを最小限に抑える。

次に、電圧クランプアンプを現在のクランプモードに設定します。初期オフセット電位を無効にした後、流量を変化させることによって誘導される電圧の変化を測定します。電圧の変化が液体-金属接合電位であることを確認するために、浴液と参照電極との間のアガロース塩橋を用いて、流体の流れが接合電位に及ぼす影響を再検討する。

液体-金属接合電位の変化の結果を用いて、機能電位流量関係を描画し、上流流量による接合電位シフトの飽和値を推定します。そして、入浴液中の塩化物濃度を変化させ、結合電位の塩化濃度関係を描く。なお、流体速度は一定で、隣接する塩化銀参照電極のそれへの塩化濃度の低下を防止するために十分に高いものであるべきである。

2つの関係曲線から、測定された接合電位シフトからの塩化物濃度の変化を推定する。VDCC-L電流は、酵素的に分散したラット腸間膜動脈筋細胞に記録され、ナイスタチンはパッチクランプ記録を穿穿刺した。アガロースカリウムクロリドブリッジを使用すると、参照電極と入浴液の間の接合電位を最小限に抑えることができ、流体の流れは独立してVDCC-L電流の電圧を増加させた。

しかし、銀銀塩化物基準電極を入浴液に直接接続した場合、アガロースカリウムクロリドブリッジを伴わずに、流体流れの存在下でのIV関係は、静止状態下のVDCC-L電流と比較して右にシフトした。また、アガロースブリッジを用いたラットの好塩基性白血病細胞に記録されたKerr2.1電流の流量増加は、攪拌されていない層効果によって説明できる。その開発後、この技術は、電気生理学の研究者のための道を開きました。

だから、イオンチャネル電流の流体流れの調節のためです。電気化学現象の観点からは、細胞膜表面における未撹拌境界層において。